Fascin和survivin蛋白在結直腸癌組織中的表達及臨床意義

潘建生，陳一杰，江濤，劉朝輝

中國人民解放軍第180醫院普外科，福建 泉州 362000

近年來，結直腸癌的發病率和病死率均呈上升趨勢，近5年來其發病率維持在（454～584）/10萬[1]。結直腸癌可能會發生遠處轉移及淋巴結浸潤，導致患者預后較差[2-3]。生物學機制是導致結直腸癌發生的重要因素，一些生物因子可能會導致腫瘤信號通路的激活或腫瘤細胞生物學特性的改變，影響腫瘤細胞的增殖、浸潤及分化過程，促進惡性腫瘤的發生。肌成束蛋白（Fascin）的表達能夠通過促進腫瘤細胞的偽足形成、α-平滑肌肌動蛋白的合成等，提高腫瘤細胞的浸潤及轉移能力[4]；存活蛋白（survivin）的高表達能夠通過抑制腫瘤細胞凋亡，從而參與腫瘤進展[5]。部分研究探討了survivin或Fascin蛋白在結直腸癌和卵巢惡性上皮性腫瘤發生中的作用，認為Fascin和survivin蛋白高表達與腫瘤進展有關[5-6]，但缺乏有關二者與結直腸癌患者臨床特征關系的分析。為進一步揭示Fascin和survivin蛋白在結直腸癌組織中的表達及意義，從而為結直腸癌的診療提供理論基礎，本研究回顧性分析了67例結直腸癌患者的臨床資料，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2017年1月至2017年12月于中國人民解放軍第180醫院診治的結直腸癌患者的臨床資料，收集患者的結直腸癌組織標本及相應的癌旁組織（距腫瘤邊緣＞5 cm）標本。納入標準：①均經病理組織學確診；②術前均未行放化療等治療。排除標準：①臨床資料不完整者；②合并其他惡性腫瘤者。根據納入和排除標準，本研究共納入67例結直腸癌患者。67例患者中，男39例，女28例；年齡24～67歲，中位年齡51歲；結腸癌40例，直腸癌27例。

1.2 免疫組織化學染色法

首先石蠟切片脫蠟入水，然后應用過氧化氫封閉內源性過氧化物酶（3%H2O2，室溫避光放置10 min），磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗5 min，滴加正常山羊或兔血清封閉處理，37℃，15 min。用濾紙吸去血清，不洗，直接滴加一抗，37 ℃，2 h；滴加生物素化的二抗，37 ℃，40 min；PBS沖洗5 min，二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木素復染，加拿大樹膠（或中性樹膠）封片。

1.3 結果判斷

survivin蛋白主要定位于細胞核，Fascin蛋白主要定位于細胞質，陽性表達呈黃色或棕黃色顆粒。在高倍鏡下隨機選取5個視野，根據陽性細胞比例和染色強度評分的乘積進行判斷，總分≥4分為陽性表達，＜4分為陰性表達[3]。根據陽性細胞比例進行評分：＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。根據染色強度進行評分：無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。

1.4 統計學方法

采用SPSS 19.0軟件對數據進行統計分析，計數資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；相關性分析采用Spearman秩相關性分析；多因素分析采用Logistic回歸分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 survivin和Fascin蛋白在結直腸癌組織和癌旁組織中的表達

結直腸癌組織中survivin和Fascin蛋白的陽性表達率均明顯高于癌旁組織，差異均有統計學意義（P＜0.01）。（表1、圖1）

表1 67例結直腸癌患者的結直腸癌組織和癌旁組織中survivin和Fascin蛋白陽性表達率的比較[n（%）]

圖1 結直腸癌組織和相應癌旁組織中survivin和Fascin蛋白的表達情況（免疫組織化學染色，×100）

2.2 survivin和Fascin蛋白陽性表達率與結直腸癌患者臨床特征的關系

Dukes分期為C～D期、有淋巴結轉移的結直腸癌患者的survivin蛋白陽性表達率明顯高于Dukes分期為A～B期、無淋巴結轉移的患者，Dukes分期為C～D期、有淋巴結轉移、中低分化的結直腸癌患者的Fascin蛋白陽性表達率明顯高于Dukes分期為A～B期、無淋巴結轉移和高分化患者，差異均有統計學意義（P＜0.01）；不同年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤直徑的結直腸癌患者的survivin和Fascin蛋白陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。（表2）

2.3 survivin與Fascin蛋白表達情況的相關性分析

經Spearman秩相關性分析，survivin與Fascin蛋白的表達呈正相關（rs=0.441，P＜0.05）。（表3）

表3 survivin與Fascin蛋白的表達情況

2.4 survivin和Fascin蛋白陽性表達影響因素的多因素分析

將單因素分析中差異有統計學意義的變量納入Logistic多因素回歸分析。結果顯示，Dukes分期和淋巴結轉移情況是survivin蛋白陽性表達的獨立影響因素（OR=3.508、3.016，P＜0.01）；Dukes分期、淋巴結轉移情況和分化程度是Fascin蛋白陽性表達的獨立影響因素（OR=3.022、2.787、2.627，P＜0.01）。（表4、表5）

表4 survivin蛋白陽性表達影響因素的多因素Logistic回歸分析

表5 Fascin蛋白陽性表達影響因素的多因素Logistic回歸分析

3 討論

結直腸癌的早期診斷水平較低，整體生存預后較差，其早期診斷方式主要包括血清學檢查和超聲檢查，雖然能夠在疾病的診斷過程中發揮重要的參考價值，但局限性較為明顯。而在治療方面，手術治療、免疫靶向治療和靜脈化療雖然能夠改善結直腸癌患者的臨床癥狀，抑制病情進展，但長期的臨床隨訪研究顯示，結直腸癌患者綜合性治療后的5年生存率仍不足35%，嚴重并發癥的發生率可達8%以上[7-8]。通過對相關免疫組化指標的研究，能夠為臨床上結直腸癌的診斷和治療提供新的作用靶點及理論參考。

survivin蛋白主要存在于未成熟的胚胎組織中，在成年人惡性腫瘤細胞的發生過程中，survivin蛋白可以通過對細胞周期依賴性蛋白激酶的調控作用，影響細胞周期，提高G1/S細胞比例。研究顯示，survivin蛋白能夠抑制腫瘤細胞的程序性凋亡，促進腫瘤細胞的持續性增殖[9-10]。Fascin蛋白能夠參與腫瘤細胞骨架結構、肌動蛋白或偽足的形成，提高腫瘤細胞變形及突破基底膜的能力，導致腫瘤細胞的轉移風險增加。有研究顯示，Fascin蛋白能夠提高腫瘤細胞對淋巴管內皮細胞和血管內皮細胞的黏附能力，促進惡性腫瘤的進展[11-12]。

本研究結果顯示，survivin和Fascin蛋白在結直腸癌組織中的陽性表達率均明顯高于癌旁組織，差異均有統計學意義（P＜0.01），提示survivin和Fascin蛋白均可能影響結直腸癌的病情進展。survivin和Fascin蛋白高表達主要通過以下機制促進病情進展[13]：①survivin蛋白高表達可抑制腫瘤凋亡抑制因子α的表達水平，抑制腫瘤細胞凋亡，打破腫瘤細胞增殖與凋亡的平衡狀態；②Fascin蛋白可以對腫瘤細胞的α-肌動蛋白和細胞骨架結構產生影響，提高腫瘤細胞的浸潤能力，促進腫瘤細胞對鄰近正常結直腸上皮組織的侵襲。徐萬宇和徐德[14]認為，survivin蛋白高表達能夠促進直腸癌患者臨床轉歸的惡化，導致腫瘤細胞病理分級升高，影響直腸癌患者放化療等綜合性治療的敏感性。免疫組化染色結果顯示，survivin和Fascin蛋白分別表達于結直腸癌細胞的細胞核及細胞質中，特別是在異型性較高的腫瘤細胞周邊，survivin和Fascin蛋白的染色程度更深。本研究結果顯示，survivin蛋白表達與結直腸癌患者的Dukes分期和淋巴結轉移情況有關，這主要是由于survivin蛋白能夠促進腫瘤細胞對深肌層的浸潤，提高腫瘤細胞對淋巴管內皮細胞的黏附能力；Fascin蛋白表達不僅與結直腸患者的Dukes分期和淋巴結轉移情況有關，同時也與分化程度密切相關，這主要是由于Fascin蛋白能夠導致結直腸癌細胞分化成熟調控障礙。部分研究者分析了survivin蛋白表達與腫瘤患者的臨床特征后，并不認為survivin的高表達能夠影響淋巴結轉移[13]，存在相關差異考慮與腫瘤患者的基礎性疾病、指標檢測的敏感度差異有關。本研究還發現，survivin與Fascin蛋白的表達呈正相關，提示二者在促進結直腸癌患者病情進展的過程中可能發揮了一定的協同作用。此外，本研究結果顯示，Dukes分期和淋巴結轉移情況是survivin蛋白陽性表達的獨立影響因素（P＜0.01），Dukes分期、淋巴結轉移情況和分化程度是Fascin蛋白陽性表達的獨立影響因素（P＜0.01）。提示survivin和Fascin蛋白的表達與結直腸癌患者的臨床特征具有一定的關系，這主要與survivin和Fascin蛋白能夠影響結直腸癌細胞的生物學特征有關。

綜上所述，survivin和Fascin蛋白在結直腸癌組織中的陽性表達率較高，且其陽性表達與患者的臨床特征有關，后續研究可以進一步探討survivin和Fascin蛋白表達與結直腸癌患者生存預后的關系。