miR-218在調控肝癌發(fā)生發(fā)展中的機制及其干預措施分析

胡金陵

全球范圍內肝癌死亡患者每年的死亡數量超過100萬,因此為患者提供有效的治療干預有重要的臨床價值［1］。MicroRAs作為一種非編碼RNA, 在人體當中廣泛分布, 研究結果提示miR-218同腫瘤發(fā)生發(fā)展存在密切聯(lián)系, 在肺癌患者、前列腺癌患者以及肝癌患者當中呈現(xiàn)出表達下降的傾向,在癌癥發(fā)生發(fā)展環(huán)節(jié)能夠發(fā)揮抑制效果［2,3］。miR-218對于肝癌細胞增殖方面的影響研究仍然較少, 本研究分析肝癌患者miR-218表達及其同病理特征之間的關系, 給予患者針對性干預, 并在此基礎上分析干預措施的效果, 現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年2月～2017年2月本院收治的40例肝癌患者作為研究對象, 其中男29例, 女11例；年齡26～68歲, 平均年齡(50.1±6.3)歲。納入標準：符合肝癌診斷標準［4］；病歷資料完整；知情同意本研究。排除標準：合并其他惡性腫瘤；合并精神性疾病；妊娠哺乳期女性。本研究經過醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 miR-218檢測方法 人肝癌細胞株HepG2在含有胎牛血清的培養(yǎng)基當中進行培養(yǎng), 穩(wěn)定傳代3代子后, 取對數生長期的細胞。miR-218轉染使用脂質體法轉染HepG2之后分為兩組, 實驗組添加miR-218mimic以及培養(yǎng)液、脂質體,對照組添加無義序列的miRNAmimic以及培養(yǎng)液、脂質體。接種細胞到培養(yǎng)瓶中, 常溫條件下持續(xù)培養(yǎng)到細胞融合度＞60%, 更換培養(yǎng)液進行培養(yǎng)。收集HepG2細胞制作單細胞懸液, 細胞密度調整為1×105/ml, 100 μl/孔的濃度接種到96孔板。左上孔當作空白孔, 僅僅添加培養(yǎng)基而不添加細胞。每組設置6個復孔, 每孔添加10 μl的3-(4, 5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(MTT)溶液, 避光條件下持續(xù)培養(yǎng)2 h,去除上清之后添加100 μl的二甲基亞砜(DMSO), 常溫條件下持續(xù)孵育30 min直到顆粒溶解。酶標儀檢測570 nm各孔的吸光度D值, 計算各組細胞的活性, 細胞活性=實驗組的D均值/對照組的D均值［5］。重復實驗3次計算平均值。

1.2.2 干預方法 患者均口服應用伊馬替尼治療, 200 mg/次,2次/d, 用餐時服用。在此基礎上加強配套干預。①飲食干預：合理控制飲食, 最大限度實現(xiàn)多樣化, 確保營養(yǎng)均衡。避免單一飲食而使得患者的營養(yǎng)缺乏, 食物需要避免過熱或者過冷, 同時要指導患者少食多餐, 避免高脂肪以及高熱量食物。應當根據患者具體條件確定飲食計劃。②疼痛干預：為了緩解患者痛感, 醫(yī)務人員應當找出疼痛的特征、具體位置以及原因, 給予個性化的干預措施。臨床上往往應用止痛藥物緩解患者的疼痛, 不過應當控制用量。此外, 還可以應用按摩或者是心理暗示等方法。③心理干預：醫(yī)務人員需要對患者提供心理疏導, 緩解其負性情緒, 要幫助患者樹立積極治療的信心, 同家屬溝通, 以便在第一時間發(fā)現(xiàn)其情緒變化。

1.3 觀察指標及判定標準 比較患者肝癌組織以及附近組織miR-218表達水平, 并分析miR-218表達與患者病理特征之間的相關性。比較患者干預前后的SAS、SAS評分, 分數越高焦慮、抑郁情緒越為嚴重。比較患者干預前后VAS評分,分數越高疼痛情況越明顯。同時應用SF-36量表評估患者干預前后生活質量, 具體包括社會功能、軀體功能、角色功能、認知功能, 分數越低生活質量越差［9］。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件對研究數據進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數±標準差()表示, 兩組比較采用t檢驗, 多組比較采用方差分析；相關性分析應用Pearson相關性檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 肝癌組織及癌旁組織miR-218表達水平比較 肝癌患者肝癌組織的miR-218表達水平為(0.45±0.18)低于癌旁組織的(1.54±0.63), 差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。隨著與癌組織距離的縮短, 患者組織的miR-218表達水平不斷降低, 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 40患者肝癌組織及癌旁組織miR-218表達水平比較( )

表1 40患者肝癌組織及癌旁組織miR-218表達水平比較( )

注：不同與癌組織距離的組織miR-218表達水平比較, P＜0.05

2.2 miR-218表達與肝癌患者病理特征的相關性分析 miR-218表達與腫瘤大小以及TNM分期存在顯著相關性(r=-0.628、-0.755, P＜0.05)。見表 2。

表2 miR-218表達與肝癌患者病理特征的相關性

2.3 患者干預前后SAS、SDS以及VAS評分比較 干預后,患者SAS、SDS以及VAS評分均顯著低于干預前, 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表3。

表3 干預前后40例患者SAS、SDS以及VAS評分比較( , 分)

表3 干預前后40例患者SAS、SDS以及VAS評分比較( , 分)

注：與干預前比較, aP＜0.05

?

2.4 患者干預前后生活質量評分比較 患者干預后社會功能、軀體功能、角色功能、認知功能評分均高于干預前, 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表4。

表4 40例患者干預前后生活質量評分比較( , 分)

表4 40例患者干預前后生活質量評分比較( , 分)

注：與干預前比較, aP＜0.05

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3 討論

miRNAs屬于非編碼RNAs, 借助于結合目的轉錄降低mRNA, 或者是抑制mRNA翻譯實現(xiàn)基因表達的負向調節(jié)。肝癌當中存在表達異常的一系列miRNAs, 同時大部分同細胞增殖、細胞凋亡以及腫瘤轉移存在聯(lián)系［4］。本研究結果顯示,肝癌組織miR-218表達水平顯著低于癌旁組織, 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。進一步分析可以發(fā)現(xiàn), miR-218表達下降同腫瘤大小(＞5 cm)以及TNM高分期(Ⅲ+Ⅳ)存在密切聯(lián)系。這表明miR-218同肝癌病情的發(fā)展存在聯(lián)系［5］。人類的miR-218主要包括兩個部分的基因編碼, 也就是miR-218-1以及miR-218-2, 其中miR-218-1位于SLIT2染色體4,而miR-218-2位于SLIT3染色體［6］。

有研究人員在肝癌細胞系HepG2當中過表達miR-218,發(fā)現(xiàn)miR-218可以有效抑制細胞增殖同時加速細胞凋亡［7］。為分析miR-218加速肝癌細胞凋亡以及肝癌細胞增殖的具體機制, 研究人員選擇依賴性激酶6(CDK6)以及Bmi-1當作miR-218的靶蛋白展開分析, CDK6是蛋白通道當中的調節(jié)因子之一, 能夠調節(jié)癌蛋白活性以及p27活性, 同時調節(jié)特定細胞的分化, 對于胸腺細胞以及腫瘤發(fā)生發(fā)展都有不容忽視的重要影響［8］。miR-218借助于下調CDK6蛋白, 能夠抑制惡性腫瘤細胞的增殖, 同時加速細胞凋亡。在肝癌當中miR-195借助于抑制CDK6表達使得G(1)/S轉換發(fā)生阻滯。其中Bmi-1可以調節(jié)細胞轉化以及細胞增殖, 并且在干細胞更新環(huán)節(jié)以及腫瘤惡化環(huán)節(jié)都有重要影響。Bmi-1作為核染色質調控因子, miR-218可以抑制Bmi-1表達從而抑制腫瘤細胞的增殖［9,10］。

本研究中, 干預后, 患者SAS、SDS以及VAS評分顯著低于干預前(P＜0.05), 提示伊馬替尼干預有明顯效果。PI3K/Akt通路借助于p85發(fā)揮影響, c-Kit磷酸化之后能夠同PI3K亞基p85加以結合, 從而激活PI3K/Akt通路。對于伊馬替尼較為敏感的肝癌患者, 在應用伊馬替尼進行治療的過程當中,這條通路能夠得到有效的抑制。本研究中, 患者干預后社會功能、軀體功能、角色功能、認知功能評分均高于干預前,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

綜上所述, 肝癌患者的miR-218表達顯著下降, 為靶向治療提供新的思路, 采取針對性干預措施有利于減輕疼痛情況, 改善患者生活質量。