PCR法和顯色平板法檢測B族鏈球菌的臨床對(duì)比研究

杜淑嫻 王利英

B族鏈球菌(group B Streptococcus, GBS)是一種革蘭陽性鏈球菌, 亦稱無乳鏈球菌, 可定植于孕產(chǎn)婦腸道和陰道。根據(jù)不同地區(qū)的研究表明, 母體圍生期 GBS 定植是新生兒早發(fā)型GBS感染的主要危險(xiǎn)因素。據(jù)統(tǒng)計(jì), 攜帶 GBS 的孕婦有40%～70% 在生產(chǎn)過程感染新生兒, 其中1%～3%出現(xiàn)早期侵入性感染, 可導(dǎo)致出生后發(fā)生肺炎、腦膜炎、敗血癥等早發(fā)型感染［1,2］。美國疾病控制和預(yù)防中心(CDC)頒布《圍生期GBS篩查與預(yù)防指南》建議對(duì)所有孕晚期婦女進(jìn)行GBS篩查對(duì)檢測陽性者采取預(yù)防措施, 由GBS感染引起的新生兒感染情況得到了有效控制［3,4］。在我國, 由于孕產(chǎn)婦人群常規(guī)篩查GBS并未完全普及, 而不同地區(qū)不同方法學(xué)的比較資料研究較少, 本研究對(duì)PCR法和顯色平板法檢測GBS的差異進(jìn)行了研究, 為臨床選擇合適的孕晚期GBS篩查方法提供依據(jù)。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年5月1日～12月1日來本院就診的孕晚期婦女594例, 年齡18～42歲, 孕周35～40周。

1.2 試劑 GBS核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)購自泰普生物科學(xué)(中國)有限公司, GBS顯色平板購自鄭州安圖生物工程股份有限公司, 質(zhì)譜檢測送第三方實(shí)驗(yàn)室檢測。

1.3 標(biāo)本采集 將無菌拭子插入孕婦陰道口1/3處旋轉(zhuǎn)一周, 采取分泌物, 一例孕婦同時(shí)取兩份樣本, 分別進(jìn)行PCR法檢測和顯色平板法檢測。將取樣后的拭子做好標(biāo)記后送至檢驗(yàn)科細(xì)菌室進(jìn)行培養(yǎng)鑒定。

1.4 檢驗(yàn)方法 按照全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程中的臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)方法進(jìn)行。將同一患者的兩份樣本, 分別按照廠家說明書要求進(jìn)行PCR法檢測和顯色平板法檢測, 記錄檢測結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

594 例孕晚期孕婦樣本, PCR法和顯色平板法檢測結(jié)果一致的陽性共38例, 不一致的共15例, 經(jīng)質(zhì)譜檢測確認(rèn), 其中9例確認(rèn)為GBS, 另外6例分別為3例化膿性鏈球菌, 2例解沒食子酸鏈球菌, 1例溶血性葡萄球菌。此次研究594例樣本中確認(rèn)GBS陽性47例, 陽性率7.9%。

PCR法檢測陽性43例, 陽性率為7.2%, 經(jīng)質(zhì)譜確認(rèn), 其中5例與顯色平板法不一致, 3例為化膿性鏈球菌, 2例解沒食子酸鏈球菌；顯色平板法檢測陽性48例, 陽性率8.1%,其中10例與PCR法不一致, 經(jīng)質(zhì)譜確9例為GBS, 1例為溶血性葡萄球菌。兩種方法的GBS檢測陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。顯色平板法靈敏度100.0%高于PCR法的80.9%, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；顯色平板法特異性99.8%與PCR法的99.1%比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表 1, 表 2。

表1 PCR法檢測結(jié)果與確認(rèn)結(jié)果對(duì)比(n)

表2 顯色平板法檢測結(jié)果與確認(rèn)結(jié)果對(duì)比(n)

3 討論

GBS是圍生期新生兒及孕產(chǎn)婦最常見的感染致病菌, 由于妊娠期GBS感染會(huì)導(dǎo)致母親和新生兒的感染, 嚴(yán)重威脅產(chǎn)婦和新生兒的生命, 因此采取積極有效的預(yù)防和治療措施對(duì)降低圍生期感染具有重要的意義［5-8］。靈敏度和特異性好的鑒定方法是對(duì)臨床降低感染率是最有效的幫助。因此, 本次研究對(duì)比了PCR法和顯色平板法檢測GBS的差異, 比較兩種方法的敏感度及陽性率。

目前的PCR法采取的技術(shù)原理是擴(kuò)增GBS特異性的環(huán)磷酸腺甙(CAMP)因子的基因。PCR法檢測法靈敏度80.9%顯著低于顯色平板法的100.0%(P＜0.05), 可能是因?yàn)榕R床存在某些缺乏CAMP因子的GBS［9-12］, 造成了PCR漏檢, 也可能是因?yàn)镻CR法檢測樣本的檢測限低于培養(yǎng)法, 漏檢了菌量較少的樣本。PCR法特異性99.1%略低于顯色平板法的99.8%(P＞0.05)。PCR法檢出5例假陽性, 分別是化膿性鏈球菌和解沒食子酸鏈球菌, 可能是因?yàn)榕R床除了GBS具有CAMP基因之外, 個(gè)別化膿性鏈球菌、解沒食子酸鏈球菌、海豚鏈球菌等也具有CAMP因子的基因。顯色平板法檢測1例假陽性, 為溶血性葡萄球菌, 但其顯色與GBS顯色不同,其顯色呈現(xiàn)正面較淺, 背面較深的特征, 補(bǔ)充觸酶試驗(yàn)可以排除。

綜上所述, 顯色平板法檢測GBS具有更高的準(zhǔn)確度和檢出率, 對(duì)臨床大面積篩查GBS非常有幫助, 可有效的提高GBS的篩查。