IL-10基因多態性與漢族人群原發性膽汁性肝硬化發病率 病情及預后的關系

李 宏,童 燕,張耀東

(1.新疆石河子大學醫學院第一附屬醫院生殖醫學科 832000；2.湖北省黃崗市婦幼保健院檢驗科 438000)

原發性膽汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)是一種累及肝內膽管系統的慢性進展性疾病，多見于中年女性，肝臟組織的病理特點為進展性的、非化膿性、破壞性小膽管炎[1]。PBC主要表現為乏力、皮膚瘙癢、膽汁性肝硬化。PBC患者的發生與多種基因表達有關。PBC病情危重可能誘發水、電解質平衡紊亂、誘發消化道出血、肝性腦病等[2]。IL-10是機體重要的炎癥因子，IL-10參與體內多種疾病的進展，是由淋巴細胞分泌的重要細胞因子，可以誘導體內多種炎癥細胞包括巨噬細胞、中性粒細胞遷移到炎癥局部造成并加重臟器損傷[3-4]。IL-10基因-1082A/A多態性與機體多種炎癥因子有關，本研究對比分析本院臨床資料，探討IL-10患者與患者PBC病情及預后的關系，現將研究結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2013年5月至2015年5月在本院就診的480例PBC，診斷參照中華醫學會指定的相關診斷標準，納入標準：(1)所有患者均符合PBC的相關診斷標準；(2)年齡大于18歲；排除標準：(1)合并惡性腫瘤、精神異常或其他認知功能障礙的患者；(2)合并免疫缺陷性或其他影響患者血清IL-10水平檢測的患者；(3)合并其他慢性系統疾病包括高血壓、糖尿病等其他疾病的患者；480例患者中男240例、女240例，年齡(23.1±1.9)歲，BMI(23.1±1.9)kg/m2，所有患者均知情同意本研究，且本研究經本院醫學倫理委員會批準，并以同期480例健康體檢者作為對照組。

1.2方法 采取兩組患者血液標本，使用Promega公司試劑盒及Eppendorf核酸定量儀測定白細胞中DNA水平，進一步使用ABI7500型測序級擴增儀擴增IL-10基因-1082A/A的相應基因片段，雙相測序法分析PCR產物。

1.3觀察指標 (1)病情評估：采用Child分級和MELD評分評價患者病情，具體參照文獻[5]；(2)檢測血清中IL-10和腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平：抽取外周血5 mL,TNF-α和IL-10試劑盒購于武漢博士德生物制劑有限公司，檢測方法參照試劑說明書進行。

2 結 果

2.1觀察組和對照組IL-10基因-1082A/A基因型分布情況 觀察組患者IL-10基因-1082G/A基因型為A/A占47.5%，明顯高于對照組的14.2%，基因型為A/A的患者PBC的風險是C/C的2.8倍，基因型為A/C患者患PBC的風險是C/C的1.6倍，含A基因患者患PBC的風險為不含A基因的1.9倍，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 觀察組和對照組IL-10基因-1082A/A基因型分布情況[n(%)]

表2 不同基因型患者血清中IL-10和TNF-α分泌的比較±s，ng/L)

a：P<0.05，與A/C比較；b:P<0.05，與C/C比較；c:P<0.05，與AnyA比較；d:P<0.05,與對照組比較

表3 不同基因型PBC患者血清中Child分級和MELD評分的比較±s，分)

a：P<0.05，與A/A比較；b:P<0.05，與A/C比較；c:P<0.05，與C/C比較；d:P<0.05,與AnyA比較

2.2不同基因型患者血清中IL-10和TNF-α表達水平比較 觀察組患者各基因型IL-10和TNF-α水平明顯高于對照組各基因型，觀察組患者基因型A/A患者IL-10和TNF-α水平分為(33.6±9.5)、(18.9±7.3)ng/L,明顯高于其他基因型和對照組各基因型，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

2.3不同基因型PBC患者Child分級和MELD評分的比較 A/A基因型患者Child評分和MELD評分分別為(8.6±1.8)分和(31.5±3.6)分明顯高于A/C、C/C、Any A基因型的患者，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

2.4PBC患者死亡的多因素分析 將性別、年齡、肝功能、膽紅素水平、IL-10的基因型、血清中IL-10、TNF-α水平作為單因素，以患者死亡為終點事件，采用Logistic回歸模型分析提示：IL-10基因-1082A/A(P=0.01)、IL-10(P=0.02)、MELD評分(P=0.01)是PBC患者死亡的獨立危險因素，見表4。

表4 PBC患者死亡的多因素分析

3 討 論

PBC是一種慢性自身免疫系統疾病，常見于女性，以肝內膽汁淤積為主要臨床特點,可導致嚴重瘙癢、膽管炎等臨床表現，病情進展為終末期肝病可誘發一系列并發癥包括消化道出血、肝性腦病等[5]。PBC患者體內存在多種自身免疫性抗體，體內多種自身免疫性抗體可導致機體肝臟損傷和其他臟器損傷，PBC病理進展可最終誘發終末期肝臟疾病導致患者預后不良[6-7]。積極發現PBC患者病理生理機制，進行早期臨床干預有助于改善PBC患者臨床預后。

IL-10是淋巴細胞分泌的重要細胞因子，與機體炎性反應程度和細胞免疫活化程度密切相關。IL-10可能通過活化中性粒細胞MYD88信號通路，刺激細胞內NF-κB大量分泌，促進膽管上皮細胞損傷，進一步加重PBC患者的病情進展[8-11]。而IL-10基因多態性可能參與PBC患者發病及患者病情的進展，本研究探討IL-10基因多態性與PBC的關系，結果提示基因型A/A的患者PBC的發病率明顯更高，這可能是基因型為A/A的患者可以影響血清中IL-10的分泌進而影響PBC病情的進展，導致PBC的發生。基因型為A/A的患者可能刺激機體分大量的炎癥介質，且可能對患者造成免疫炎癥損傷而誘發PBC。

血清中IL-10大量活化是導致PBC患者預后不良的重要因素，本研究對比不同基因型患者IL-10和TNF-α水平，結果發現基因型為A/A的患者體內TNF-α和IL-10水平明顯更高，而TNF-α水平進一步增高可導致患者體內大量炎癥細胞活化進一步損傷患者肝細胞和膽管上皮細胞[12-15]。這就意味著基因型為A/A的患者可能通過影響患者血清中炎癥介質分泌，加重PBC的病理生理進展。

MELD和Child評分是評價肝硬化病變程度的指標，被廣泛運用。本研究還對比了觀察組患者不同基因型PBC患者MELD和Child評分，結果提示血清中基因型為A/A的患者MELD和Child評分均明顯高于其他基因型患者(P<0.05)。這提示基因型為A/A可能通過調節患者病理機制刺激分泌炎癥因子，而影響患者病理進程，加重局部肝臟組織的損傷。筆者進一步采用Logistics回歸分析探討患者血清中IL-10基因多態性、TNF-α等因素與患者臨床預后的關系，結果提示IL-10基因型為A/A、IL-10水平及MELD評分是患者死亡的獨立危險因素，這意味著機體炎癥因子分泌在PBC病情中具有重要的意義，可能與PBC病理機制密切相關。

綜上所述，PBC是自身免疫系統疾病，患者血清中IL-10基因多態性參與體內多種炎癥因子的分泌和釋放，基因型為A/A可增加PBC發生的風險，是患者死亡的重要風險因素，值得臨床關注。