顱腦創傷血清標志物miR—124的表達及其意義的研究

毛劍

【摘要】 目的：研究顱腦創傷血清標志物miR-124（腦組織特異性的miRNA-124）的表達及其意義。方法：選取2014年11月-2015年6月本院接診的顱腦創傷患者38例為研究組，另選38例正常人為正常組。研究組采取積極的手術治療，正常組不予以任何治療措施。比較兩組miR-124、白細胞介素10（IL-10）、調節性T細胞（Treg細胞）的表達水平及治療前格拉斯哥昏迷量表（GCS）評分、預后格拉斯哥結局評分（GOS）。結果：入院4、24 h，研究組miR-124、IL-10水平和Treg細胞比例均顯著高于正常組，比較差異均有統計學意義（P<0.05）；研究組治療前GCS評分明顯低于正常組（P<0.05）；兩組預后GOS評分和miR-124表達水平比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。結論：血清標志物miR-124與顱腦創傷診斷和預后有一定的關系，其能夠幫助臨床醫師開展個體化治療和早期更精確地估計預后，值得在臨床大力推廣。

【關鍵詞】 顱腦創傷； 血清標志物； miR-124

【Abstract】 Objective：To study the expression and significance of serum marker miR-124 （brain specific miRNA-124） in patients with traumatic brain injury.Method：A total of 38 patients with craniocerebral trauma admitted to our hospital from November 2014 to June 2015 were selected as study group，and another 38 normal people were selected as normal group.The study group received active surgical treatment，while normal group did not receive any treatment.The expression level of miR-124，interleukin 10（IL-10），regulatory T cells（Treg cells） and the scores of the lasto Coma Scale（GCS） before treatment and the prognosis of Glasgow outcome score（GOS） between two groups were compared.Result：After admission 4 and 24 h，the levels of miR-124，IL-10 and Treg cell proportions in study group were significantly higher than those of normal group（P<0.05）.The GCS score of study group before treatment was significantly lower than that of normal group（P<0.05）.The prognosis of GOS and miR-124 expression level between two groups were compared，the differences were not statistically significant（P>0.05）.Conclusion：Serum marker miR-124 has a certain relationship with the prognosis of traumatic brain injury，which can help clinicians carry out individualized treatment and early accurate estimation of prognosis，it is worth popularizing in clinical practice.

【Key words】 Craniocerebral trauma； Serum markers； miR-124

First-authors address：No.184 Hospital，Yingtan 335000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.20.025

顱腦外傷是神經外科的多發疾病，改善預后是一切醫療活動的核心和最終目標，早期判斷顱腦創傷病情嚴重性，對預后進行估計并給予合適的個體化治療對重型顱腦創傷患者至關重要[1-2]。目前臨床上常用的患者預后估計工具主要包括臨床指標（GCS評分、并發癥、瞳孔變化等）、影像學資料（CT、MR等）和顱內壓變化等[3]。盡管這些工具給顱腦創傷救治工作帶來了很大改善，但其本身亦存在各種局限性，如難以從病理生理學角度判斷腦損傷程度、對病情嚴重性定量程度不足、容易受各種臨床因素如醉酒、鎮靜和肌肉松弛藥物的影響[4]。因此，急需一種新的預后預測和分級方法，能夠在顱腦創傷急性期對預后進行充分定量，并且穩定性高，能夠直接反應腦損傷病理生理學變化，幫助臨床醫師開展個體化治療和早期更精確地估計預后。研究表明，顱腦損傷后機體可應激產生一系列的炎癥反應和免疫應答，形成“瀑布效應”進一步加重腦損傷[5]。miR-124（腦組織特異性的miRNA-124）在神經系統疾病研究較多，在腦缺血中表達上調，并且和膠質瘤、阿爾茨海默病的發生發展有一定關系[6]，且研究發現心肺復蘇后血清miR-124的表達明顯升高，并與顱腦損傷的程度有一定關系，還可參與調解免疫反應[7]。因此本研究選取本院接診的38例顱腦創傷患者和38例正常人作為對比，研究顱腦創傷血清標志物miR-124的表達及其意義。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年11月-2015年6月本院接診的顱腦創傷患者38例為研究組。納入標準：有明確頭部外傷史；年齡18～75歲；格拉斯哥昏迷量表（GCS）評分3～15分[8]；經本院醫學倫理委員會批準，且患者或家屬自愿簽署知情同意書。排除標準：曾經損傷過腦顱的患者；患有肝腎功能不全，缺血性心臟病，甲狀腺功能異常，2型糖尿病的患者；臨床資料不完全患者等。另選38例正常人（醫院體檢的健康成年人）為正常組。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 （1）miR-124的檢測：入院4、24 h，抽取兩組靜脈血，肝素抗凝，利用熒光定量聚合酶聯反應（RT-PCR）測定外周血中單個核細胞中miR-124表達量，用標準曲線法計算miR-124表達量。（2）白細胞介素（IL-10）的檢測：將已分離的血漿標本從冰箱取出置于室溫下，待溶解后離心取上清液，應用酶聯免疫吸附試驗（ELIAS）檢測血清中IL-10的含量。（3）Treg細胞的檢測：利用購自美國BD公司流式細胞儀檢測Treg細胞，并采用Cellquest Pro軟件進行分析。

1.2.2 治療方法 參考顱腦創傷臨床救治指南（第3版）[9]，對顱腦創傷患者應采取積極的手術治療；正常組不予以任何治療措施。

1.3 觀察指標及判定標準 （1）比較兩組入院4、24 h的miR-124、IL-10水平和Treg細胞比例。（2）患者病情及預后評估，采用格拉斯哥結局評分（GOS）評估治療15 d后的預后情況。其中5分：總體痊愈良好，有些小的殘疾，能夠恢復正常生活；4分：中度殘疾，但尚可獨立生活，可以在保護下工作；3分：嚴重殘疾，日常生活不能獨立，需要別人照顧；2分長期持續的植物生存狀態，存在眼部的活動和睡眠周期；1分：死亡[10]。

1.4 統計學處理 使用SPSS 18.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，組內比較采用配對t檢驗；計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組基線資料比較 兩組年齡、性別比較差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性，見表1。

2.2 兩組入院4、24 h的miR-124、IL-10水平和Treg細胞比 例比較 入院4、24 h，研究組miR-124、IL-10水平和Treg細胞比例均顯著高于正常組，比較差異均有統計學意義（P<0.05），見表2。

2.3 兩組GCS、預后GOS評分及miR-124比較 研究組治療前GCS評分明顯低于正常組，差異有統計學意義（P<0.05）；研究組治療15 d后，兩組預后GOS評分和miR-124表達水平比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。見表3。

3 討論

顱腦外傷是外界暴力直接或間接作用于頭部所造成的損傷[11-12]。常見的腦外傷有頭皮裂傷、頭皮撕脫傷、頭皮血腫、顱骨骨折、腦震蕩、腦挫裂傷、顱內血腫等。受傷后有不同程度的頭痛、嘔吐、視乳頭水腫及意識、思維、感覺、運動障礙。顱腦外傷病情復雜、變化快，病情嚴重性不易判斷[13]。故早期判斷顱腦創傷病情嚴重性，對預后進行估計并給予合適的個體化治療對重型顱腦創傷患者至關重要[14-15]。目前臨床上常用的患者預后估計工具主要包括臨床指標（GCS評分、并發癥、瞳孔變化等）、影像學資料（CT、MR等）和顱內壓變化等[16]。盡管這些工具給顱腦創傷救治工作帶來了很大改善，但其本身亦存在各種局限性，如難以從病理生理學角度判斷腦損傷程度、對病情嚴重性定量程度不足、容易受各種臨床因素如醉酒、鎮靜和肌肉松弛藥物的影響[17]。因此，急需一種新的預后預測和分級方法，能夠在顱腦創傷急性期對預后進行充分定量，并且穩定性高，能夠直接反應腦損傷病理生理學變化，幫助臨床醫師開展個體化治療和早期更精確地估計預后。世界關于miR-124的研究剛剛起步[18-19]，因此關于血清miR-124與顱腦創傷預后關系的研究具有創新性。

miRNAs是一類由20～25個核苷酸組成、具有調控功能且存在于真核細胞的內源性非編碼RNA。其在機體內的表達與代謝、個體發育、疾病進展等密切相關，而miR-124作為一種腦組織特異性miRNA，在顱腦損傷中其含量有明確改變[20]。生理狀態下，外周血中miR-124表達較低，但腦組織損傷時可反應性的被釋放入血，增加其在血液中的濃度[21]。一方面，miR-124可通過對輔助T細胞（Th1/Th17）分化和活化T細胞分泌細胞因子的調控作用參與機體的免疫應答[22]；另一方面，miR-124存在可調控AT1R及轉錄因子的靶基因，在改善內皮細胞遷移期內miR-124表達升高的過程中，可促進炎性因子和特異性抗體的釋放，對顱腦組織損傷有一定影響[23]。另外，miR-124若過度激活則可能造成免疫細胞的過度活化和促炎因子的爆發性釋放，進而加重顱腦損傷。Treg細胞通過分泌IL-10和轉化生長因子（TGF-β1）對免疫功能有增強和抑制的雙重作用，對維持細胞免疫平衡有不容忽視的作用[24]。此外，有學者研究表明，顱腦損傷患者miR-124升高，可促進Treg細胞增殖，從而使機體免疫應答、炎癥反應均處于混亂的失衡狀態，不利于患者預后[25]。

因此，為了進一步研究顱腦創傷血清標志物miR-124的表達及其意義，本研究選取本院接診的38例顱腦創傷患者和38例正常人進行研究，結果如下：入院4、24 h，研究組miR-124、IL-10水平和Treg細胞比例均顯著高于正常組，比較差異均有統計學意義（P<0.05），表明此3種指標對顱腦創傷有一定診斷價值。研究組治療前GCS評分明顯低于正常組（P<0.05）；兩組預后GOS評分和miR-124表達水平比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。提示治療后研究組兩者表達水平與正常人相近。這充分說明血清標志物miR-124作為一種新手段在顱腦創傷急性期對預后進行充分定量，并且穩定性高，能夠直接反應腦損傷病理生理學變化，幫助臨床醫師開展個體化治療和早期更精確地估計預后。

綜上所述，血清標志物miR-124對顱腦創傷的診斷和預后有一定的關系，其能夠幫助臨床醫師開展個體化治療和早期更精確地估計預后，值得在臨床大力推廣。

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（收稿日期：2018-03-27） （本文編輯：董悅）