不同類型銀屑病患者全血中Thl7細胞因子mRNA表達及血清IL—26蛋白水平的臨床分析

付繼成 江珊

[摘要]目的：分析不同類型銀屑病患者全血中Thl7細胞因子mRNA表達及血清IL-26蛋白水平。方法：選取2012年12月-2017年12月在筆者醫院接受治療的80例進行期銀屑病患者，選取同期體檢健康者80例作為對照組，檢測兩組對象血清白細胞介素-26（IL-26）含量，實時熒光定量PCR檢測IL-26、白細胞介素-22（IL-22）、白細胞介素-17A（IL-17A）mRNA表達狀況，并行統計分析。結果：銀屑病及不同分型患者血清IL-26、IL-22、IL-17A mRNA表達量和IL-26蛋白含量均高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。關節型銀屬病患者IL-26 mRNA表達量和血清IL-26含量高于尋常型銀屑病、紅皮型銀屑病和局限性膿瘡型銀屑病，差異有統計學意義（P<0.05）。Pearson相關分析顯示，患者疾病嚴重程度和IL-26蛋白含量呈正相關（r=0.702，P<0.05）。結論：銀屑病患者血清IL-26蛋白含量及IL-26、IL-22、IL-17A mRNA表達量較健康者升高，且關節型銀屑病患者IL-26 mRNA表達量高于其他類型患者。

[關鍵詞]銀屑病；Thl7細胞因子；白細胞介素-26；白細胞介素-22； mRNA

[中圖分類號]R758.63 [文獻標志碼]A [文章編號]1008-6455（2018） 08-0078-03

銀屑病是一種反復發作、慢性自身免疫性皮膚疾病，其病因當前尚不完全明確，可能和感染、基因、環境及激素等因素有聯系。銀屑病患者病變組織可見大量浸潤性白細胞、異常增殖的角質形成細胞及活化T細胞等[1-2]。相關研究顯示，角質形成細胞與浸潤T細胞及它們分泌的細胞因子在病情進展中發揮著重要作用。在病變皮膚組織內有大量Thl細胞分泌的白細胞介素-1β（IL-1β）、γ干擾素（IFN-γ）及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等細胞因子，故人們認為銀屑病中Thl細胞有重要影響。近年來，人們發現T細胞亞群內Thl7細胞能夠合成白細胞介素-22（IL-22）、白細胞介素-17（IL-17），且IL-22和IL-17都參與銀屑病發病進程，為患者體內主要炎性細胞因子[3-5]。Thl7除了分泌IL-22與IL-17，還能夠合成白細胞介素-26（IL-26）。因此，本文通過分析不同類型銀屑病患者全血中Thl7細胞因子mRNA表達及血清IL-26蛋白水平，為臨床患者診療提供一些實驗室依據。

1 資料和方法

1.1 臨床資料：選取2012年12月-2017年12月在筆者醫院接受治療的80例進行期銀屑病患者，均由2名以上副主任及以上職稱醫師確診，其中男性36例，女性44例；年齡22?60歲，平均（34.28±10.06）歲；平均病程（4.27±1.03）年；紅皮型銀屑病18例，尋常型銀屑病25例，關節型銀屑病15例，局限性膿皰型銀屑病22例；患者近1個月內未口服免疫抑制劑、糖皮質激素和維A酸等藥物，近2周未進行光化學療法或者光線療法，未外用他克莫司、維生素衍生物和糖皮質激素等藥物，無臟器器質性病變和系統性紅斑狼瘡等免疫性皮膚病，肝腎功能和血常規檢測正常。

選取同期在醫院體檢健康者80例作為對照組，既往無血管炎和銀屑病等皮膚病病史，近1個月內無感染史，其中男性39例，女性41例；年齡20?59歲，平均（35.82±10.35）歲。兩組年齡、性別等臨床資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準，患者或家屬知情并簽署同意書。

1.2 主要儀器與試劑：臺式高速離心機（由美國Heal Force公司生產）、IL-26試劑盒（由美國BD公司生產）、實時熒光定量PCR儀（由美國Applied Biosystems公司生產）、RN Aiso Plus（由日本TaKaRa公司生產）、酶標儀（由美國Bio-RAD公司生產）、UltraSYBR Mixture與反轉錄試劑盒（由北京康為世紀公司生產）。

1.3 方法

1.3.1 血清IL-26含量檢測：采集兩組早晨空腹靜脈血5ml，使用EDTΑ-K3抗凝后搖勻，ELISA法檢測血清IL-26含量，具體步驟依據試劑盒說明書進行，檢測范圍8?1 000ng/L，A值酶標儀測量，波長450mm。

1.3.2 血清Thl7 mRNA含量檢測：100ml全血和200mlRNAiso Plus放入離心管內，氯仿加入后搖勻，離心機3 000rmp離心10min，取上清液移到另外離心管內，異丙醇加入后搖勾，靜置8min后離心機lOOOOrmp離心12min。上清液倒掉，加入750ml 75%乙醇，離心機lOOOOrmp離心6min后將上清液倒掉，干燥沉淀6min。無RNA酶去離子水將RNA沉淀全部溶解以后，紫外分光光度儀檢測，讀取260nm及280nmA值，A260nm/A280nm比值為1.8?2.0，并估算核酸純度。

使用SuperQuickRT Mas-ter Mix行RNA反轉錄，依據試劑盒行反轉錄反應，條件為38°C下16min，86°C下5s。

1.3.3 實時熒光定量PCR：采用UltraSYBR Mix-ture擴增目的基因，反應體積50ml；引物正義鏈與反義鏈，IL-26： 5 -GCTATCGGTTAACGTAGTAC-3，

5-TGGACTGACGAGGGAAGCG； β-actin：

5-TAAGCTCGGCCCTTACCAAT-3，

5- CTTAGCCAATTGCGTAGGGT-3； IL-22： 5-ATTCGACGTACGAACTGGTT-3，

5-TAAGTGACGCGAGCGACCTG-3； IL-17A ：5-ACCTAGCTACTGGACAGTTΑ-3，5-TCCGGTATTATGGAGTCCAG-3。反應條件，95°C下10min，95°C變性 15s，60°C 下退火lmin，60°C 下延伸lmin，40個循環。溶解曲線，95°C下15s，60°C下lmin，95°C下 15s， 60°C下 15s。內參為β-actin，2-△ct表示結果，△Ct=Ct目的基因-Ct內參。

1.4 統計學分析：采用SPSS 19.0統計軟件進行數據分析，計量資料 表示，單因素方法分析，兩兩對比檢驗；計數資料行；χ2檢驗；Pearson行相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血清IL-26、IL-22、IL-17A mRNA表達及IL-26含量比較：銀屑病組及不同分型組患者血清IL-26、IL-22、IL-17A mRNA表達量和IL-26蛋白含量均高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）；關節型銀屑病患者IL-26 mRNA表達量和血清IL-26含量高于尋常型銀屑病、紅皮型銀屑病和局限性膿皰型銀屑病，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2 相關性分析：Pearson相關分析顯示，患者疾病嚴重程度和IL-26蛋白含量呈正相關，差異有統計學意義0=0.702， PC0.05）。

3 討論

當前IL-26相關生物學功能研究不是很多，國外一些專家曾報道克羅恩病患者血清內IL-26含量上升，同時可誘引腸上皮細胞產生IL-8及TNF-α[6-7]。Dambacher等[8]研究顯示，類風濕關節炎患者關節腔積于血清內IL-26含量都上升，并且可加速單個核細胞形成TNF-α與IL-8等一些細胞因子。銀屑病患者血清IL-26作用因素目前還不太明確，IL-26受體在皮膚角質所產生細胞表層表達，同時誘發分泌IL-8，這可能為銀屑病患者發病中IL-26參與機制影響[9-12]。

本文研究顯示，關節型患者IL-26 mRNA表達量高于尋常型、紅皮型和膿皰型，差異有統計學意義，這可能因為除Thl7產生IL-26外，關節型患者發生病變關節腔內滑膜細胞也會形成IL-26。當前對于IL-22與IL-17生物學功能研究已比較深入，但IL-26生物學功能不是太清楚。IL-17包含IL-17F、IL-17E和IL-17A等，主要為IL-17A，它可以將MAPK、NF-kB信號路徑激活，進而引發多種效應，誘使中性粒細胞聚集與活化，并對炎癥組織內中性粒細胞凋亡其抑制作用[13-15]。另外，IL-17A還能夠加速形成機制金屬酶與血管生成素，進而加快修復與生成組織血管。IL-17A對TNF-α有協同影響，加速釋放TNF-α、IL-1P與IL-6，使體內炎癥程度加重。IL-22為Thl7所分泌主要炎癥因子，它可加速角質形成細胞增殖，IL-22可刺激角質形成細胞分解抗微生物氨基酸肽和基質金屬酶，同時銀屑病患者病情程度和血清IL-22含量相關[16-18]。由于IL-26和IL-22都用相似氨基酸序列，為IL-10細胞家族，同時都是Thl7所分泌，因此，IL26是否有和IL-22近似生物功能還需行更深入研究。

綜上所述，雖然本研究驗證了銀屑病患者血清內IL-26含量上升，且關節型患者含量比其他類型患者含量更高，和銀屑病病情嚴重程度為正相關，這說明IL-26可為銀屑病，特別是關節型銀屑病患者診療輔助指標。由于人力和時間等限制，本文樣本量偏少，且沒有對銀屑病起病中IL-26的相關機制進行研究，因此，IL-26若要作為關節型銀屑病患者診斷輔助指標和治療靶點，還需進一步行動物實驗和大樣本臨床研究。

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