血清糖蛋白-2α對于重癥急性胰腺炎的診斷及預后評估價值

張成，許東偉，高澤立

(1.上海市浦東新區(qū)周浦醫(yī)院，a消化內科，b重癥監(jiān)護室，上海 201318；2.上海市浦東新區(qū)人民醫(yī)院消化內科，上海 201200)

急性胰腺炎是臨床常見的疾病，其發(fā)病率為(4.8～24.0)/10萬。約20%的患者會發(fā)展為重癥急性胰腺炎(SAP)，急性胰腺炎病死率在5%～10%左右，其中死亡者大多為SAP患者，因此SAP的診斷和預后指標受到臨床工作者的廣泛重視。盡管目前對急性胰腺炎發(fā)病機制的了解尚不完整，但是胰腺內酶原粒內儲存的特定胰蛋白酶原過早激活在急性胰腺炎發(fā)病中起到了舉足輕重的作用[1]。因此，腺泡細胞損傷造成的酶原分泌急性受損及酶源粒基底成分釋放標志著急性胰腺炎的開始[2]，而隨之發(fā)生的急性炎癥將會引發(fā)全身炎癥反應綜合征，嚴重者甚至可能導致休克。因此，腺泡細胞相關分子的滲出及炎癥細胞因子的釋放共同形成了一個潛在的急性胰腺炎特異性分子標志物。盡管新的血清標志物不斷被發(fā)現(xiàn)，血清脂肪酶分析已成為診斷急性胰腺炎的重要血清學證據(jù)。然而，脂肪酶分析并不能對急性胰腺炎嚴重程度定義。目前，C-反應蛋白和原降鈣素常用于判斷急性胰腺炎嚴重程度的分子標志物。

糖蛋白-2(GP-2)是表達在胰腺外分泌酶原顆粒上的主要膜蛋白[3]。在經典急性胰腺炎動物模型中發(fā)現(xiàn)，急性胰腺炎動物模型的GP-2顯著上升[4]。GP-2有GP-2α和GP-2β兩個亞型，兩種亞型表達量基本一致。在外分泌胰腺的刺激下，GP-2的兩種亞型均可釋放進入胰管[5]。以往研究顯示，急性胰腺炎患者血清GP-2水平遠高于正常對照組[6]。與已有的脂肪酶/淀粉酶檢測相比，GP-2診斷急性胰腺炎的準確度更高。然而，在慢性胰腺炎和胰腺癌中，GP-2水平同樣有升高趨勢[7]，因此在臨床應用于急性胰腺炎的診斷受到局限。本文通過研究SAP患者血清中的GP-2α水平變化，考察血清GP-2α水平對于SAP的診斷及預后中的評估價值，以期找到特異性更強的SAP診斷標志物。

1 資料與方法

1.1一般資料選取2012年6月至2016年6月上海市浦東新區(qū)周浦醫(yī)院消化內科入院治療的急性胰腺炎患者88例，其中SAP患者48例，輕癥急性胰腺炎(MAP)患者40例。SAP組中有6例患者入院后死亡，其中1例患者于入院第3天死亡，2例患者于入院第4天死亡，3例患者于入院第8～14天內死亡。SAP和MAP的診斷標準均符合2003年中華醫(yī)學會消化病學分會胰腺病學組制定的中國急性胰腺炎診治指南[8]。兩組患者的一般資料見表1，年齡、性別、發(fā)病時間等一般資料比較，差異無統(tǒng)學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經上海市浦東新區(qū)周浦醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，患者均簽署知情同意書。

表1 兩組患者一般資料的比較

1.2研究方法入選患者分別在入院第1、3、5、7、14天于清晨空腹抽取靜脈血5 mL，血樣不抗凝，血樣采集后2 h內，進行離心，轉速為2 000～3 000 r·min-1，離心5 min，取上清，并于-80 ℃保存，避免反復凍融。采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測血清中GP-2α和GP-2的含量。

首先使用GP-2α多克隆抗體包被96孔板過夜。然后將已知濃度的GP-2α標準品倍比稀釋，用于標準曲線的繪制。之后將空白對照液、倍比稀釋后的GP-2α標準品溶液和待測血清分別加入有GP-2α抗體包被的96孔板中(每孔50 μL)，室溫孵育1～2 h，使用磷酸鹽緩沖溶液(PBS)沖洗3次后，甩凈緩沖液，加入酶標二抗，室溫孵育30 min。加入終止液后混勻。于30 min內讀取480 mm處吸光度。根據(jù)標準品溶液吸光度繪制GP-2α的標準曲線。根據(jù)標準曲線，計算血清中GP-2α濃度。采用同樣的方法和步驟檢測患者血清中GP-2含量。根據(jù)前期方法摸索試驗結果，當患者血清中的GP-2α/GP-2濃度高于0.1 U時，即可被檢出。實驗所需GP-2α多克隆抗體、GP-2多克隆抗體/酶標二抗均從SANTA CRUZ公司購買。

2 結果

2.1三組血清GP-2α測定結果比較研究選取的48例SAP患者中42例患者治愈并出院，死亡6例(死亡組)，病死率為12.5%。各組血清GP-2α水平見表2。采用兩因素重復測量方差分析對三組患者血清GP-2α水平進行分析，發(fā)現(xiàn)交互作用顯著(F=91.36，P<0.01)。再對每個時間點上的不同組別患者GP-2α水平進行多變量方差分析。兩兩比較血清GP-2α顯示：入院第1天死亡組顯著高于MAP組和SAP組(P<0.01)，SAP組與MAP組比較差異無統(tǒng)計學意義(P=0.186)。入院第3天和第5天死亡組和SAP組顯著高于MAP組(P<0.01)，同時死亡組顯著高于SAP組(P<0.05)。入院第7天，由于死亡組患者例數(shù)過少，不納入統(tǒng)計，SAP組顯著高于MAP組(P<0.01)。第14天，死亡組無病例，SAP組與MAP組差異有統(tǒng)計學意義，SAP組顯著高于MAP組(P<0.01)。

表2 三組血清GP-2α測定結果

注：“—”表示此項無數(shù)據(jù)

2.2GP-2α與GP-2水平診斷價值比較分別對入院第3天的患者GP-2α水平和GP-2水平進行ROC回歸曲線分析，結果見圖1。GP-2α預測SAP的AUC為0.938，GP-2預測SAP的AUC為0.762，兩者對于SAP均具有一定預測價值，但GP-2α的特異性更高。

圖1 GP-2α與GP-2水平診斷SAP的ROC曲線

2.3不同臨床類型急性胰腺炎患者血清GP-2α水平比較此外，本研究還對不同類型SAP患者血清GP-2α水平(表3)進行了單因素重復測量方差比較，結果顯示，急性胰腺炎患者血清GP-2α水平在不同時間點差異有統(tǒng)計學意義(F=99.98，P<0.05)，但急性胰腺炎類型與入院天數(shù)之間無交互作用(F=2.37，P=0.06)。在每個時間點分別進行的單因素方差分析顯示，在同一時間點內，不同類型急性胰腺炎患者血清GP-2α水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3 討論

SAP是一種常見的消化道疾病，是一種多因素引起的全身炎癥反應綜合征。一旦發(fā)展到重癥，往往出現(xiàn)胰腺壞死和多器官功能衰竭等，治療相當困難。如何能在急性胰腺炎發(fā)作的早期盡快判定病情輕重度，及時給予有效的干預與治療，有助于降低患者病死率，對臨床工作非常重要。

血清淀粉酶是目前診斷急性胰腺炎常用指標，在一定程度上對急性胰腺炎的診斷有著不可替代的地位[9]，但淀粉酶的高低不一定反映病情輕重，且其水平變化通常不超過1 周，對預后的評估價值較弱。近期研究發(fā)現(xiàn)，GP-2可能是急性胰腺炎的重要分子標志物[10]。GP-2與消化酶原共同分泌至小腸中，隨后起到抗菌、免疫調節(jié)和調節(jié)腺泡內吞的作用。胰腺自溶是引起急性胰腺炎病理反應的重要機制之一，將會引起包括GP-2在內的胰腺內酶源粒成分大量釋放。

GP-2α是GP-2的亞型之一，通過羰基-磷脂酰肌醇錨定在膜表面，一旦胰腺分泌受到刺激，GP-2α就會轉運到腺細胞的頂端質膜上，從而分泌到胰導管。當胰腺出現(xiàn)炎癥或破壞時，GP-2α則可以釋放入血清中，導致血清濃度升高[3]。

研究發(fā)現(xiàn)，在經典的大鼠急性腎盂腎炎模型中，GP-2在模型誘導后的第24小時仍處于高水平，而淀粉酶水平卻已經恢復[4]。臨床實驗也發(fā)現(xiàn)，GP-2的敏感性顯著高于淀粉酶和脂肪酶[6]。此外，臨床研究還發(fā)現(xiàn)，在急性胰腺炎患者中，入院后第6天GP-2α仍處于高水平狀態(tài)[11]，但GP-2在MAP、胰腺癌的患者中也會有一定程度升高，因此尋找特異性較高的標志物十分重要。

我們的研究發(fā)現(xiàn)，在入院后第3、5、7、14天，SAP患者的血清GP-2α水平均顯著高于MAP患者。在愈的SAP組患者入院后血清GP-2水平逐漸升高，于第3～5天達到峰值，隨后逐漸下降，在第14天仍顯著高于MAP組患者。對于死亡的SAP患者，GP-2α升高后不再降低。更重要的是，與最新文獻報道相同[12]，GP-2α的預測價值高于GP-2，具有更高特異性。

表3 不同類型急性胰腺炎患者血清GP-2α水平

綜上所述，GP-2α在SAP診斷方面特異性高，維持時間較長，對疾病的預后有一定的判斷價值，因此是一項很有潛力的診斷指標。