乙肝小三陽與HBV～DNA的關(guān)系分析

陽仕榮

【 磕康模骸糎TF〗分析乙肝小三陽患者（即HBsAg陽性、HBeAb陽性、HBcAb陽性）與HBV～DNA的關(guān)系。方法：選擇2016年9月-2017年9月我院所接收的300例乙肝小三陽患者和50例健康者的血清進(jìn)行研究，對其血清進(jìn)行乙肝五項和HBV～DNA的檢測。采用時間分辨免疫熒光法（TRFIA）檢測乙肝五項，并用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法（PCR）檢測HBV～DNA，分析比較乙肝小三陽患者（HBsAg陽性、HBeAb陽性、HBcAb陽性）與HBV～DNA的關(guān)系。結(jié)果：乙肝小三陽患者（HBsAg陽性、HBeAb陽性、HBcAb陽性）的檢出率是77.1%，HBV～DNA的檢出率是62.6%，其中兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較（x2=11.1511，P=0.0008），即其差異有顯著性。結(jié)論：HBeAg 呈陰性情況，可能也有病毒復(fù)制的情況，HBV～DNA和HBsAg陽性、HBeAb陽性、HBcAb陽性之間有著較好的相關(guān)性，對乙肝小三陽患者來講其可以有效的指導(dǎo)乙肝疾病的診斷、診斷及臨床療效，也有助于臨床治療方案的制訂和預(yù)后情況的判斷。

【關(guān)鍵詞】乙肝小三陽；HBV～DNA；PCR

【中圖分類號】R373.2

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號】1005-0019（2018）12-032-01

乙型病毒性肝炎是由于感染乙型肝炎病毒（HBV）引起的，乙型肝炎患者和HBV攜帶者是本病的主要傳染源。感染HBV后，由于受病毒因素、宿主因素、環(huán)境因素等影響，會出現(xiàn)不同的結(jié)局和臨床類型。臨床上，對乙型肝炎患者的血清標(biāo)志物有著多種檢測方法，所以急需尋找出一種能夠快速靈敏、又具有特異性的檢測方法。HBV～DNA是否被感染，有無進(jìn)行復(fù)制，判斷標(biāo)志就是檢測HBsAg、HBeAb和HBcAb表達(dá)情況，三者全部表現(xiàn)陽性也是乙肝小三陽患者臨床診治、療效及預(yù)后情況判定的重要依據(jù)[1]。但因為“窗口期”等問題的存在，通常乙肝病毒即HBV～DNA在機(jī)體內(nèi)的含量多少，是醫(yī)護(hù)人員用來判定病毒等復(fù)制與活躍度的重要依據(jù)，也是是否具有傳染性的直接依據(jù)，通過對HBV～DNA的定量檢測，判定患者體內(nèi)乙肝病毒的含量變化。本實驗通過研究300例乙肝小三陽病患的血清標(biāo)志物與HBV～DNA的關(guān)系，分析了臨床檢測HBV～DNA的意義。現(xiàn)將結(jié)果報告如下：

1 材料與方

1.1 一般資料 選取的300例研究對象是2016年9月至2017年9月期間，前來我院接受治療的乙肝小三陽患者。其中男200例，女100例；年齡5至78歲，平均年齡為35.6±5.9歲；其中慢性肝炎患者有172例，肝硬化患者有127例。另外有50例健康者組成的對照組，其中男29例，女21例；年齡6至76歲，平均年齡為36.9±5.8歲。所有研究對象在清晨時空腹抽取靜脈血5mL，將血清分離出來，保存在在-20℃的環(huán)境中。

1.2 方法

（1）血清標(biāo)志物的檢測

采用時間分辨免疫熒光法檢測乙肝五項，儀器采用的是由美國珀金埃爾默公司所生產(chǎn)的全自動時間分辨熒光分析儀Easycuta，輔以乙型肝炎病毒前S1（PreS1） 抗原檢測試劑盒及乙型肝炎病毒e抗原檢測試劑盒，用EU標(biāo)記物的配備專用稀釋劑對生物素抗原或EU標(biāo)記物復(fù)溶，具體的加水量及檢測步驟，均按儀器說明書上的方法進(jìn)行。

（2）HBV～DNA檢測

采取上海克隆生物高技術(shù)有限公司的乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒，用PE5700 PCR熒光檢測儀檢測，輔以熒光探針在體外擴(kuò)增與檢測。結(jié)果判斷：HBV～DNA值>1×103拷貝/mL為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 數(shù)據(jù)資料的分析選擇spss18.0進(jìn)行，計數(shù)資料用百分比形式表示為[n（%）]，數(shù)據(jù)的比較采用x2檢驗，當(dāng)P<0.05時，表明差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

300例乙肝小三陽患者中HBV～DNA的總檢出率是62.6%（188/300），HBsAg、HBeAb和HBcAb表現(xiàn)陽性（小三陽）的有145例，占比48.3%，陰性有74例，占比24.7%。在HBV～DNA呈陽性的188人中，HBsAg、HBeAb和HBcAb表現(xiàn)陽性的為77.1%（145/188），在HBV～DNA呈陰性的112人中，HBsAg、HBeAb和HBcAb陰性的檢出率為66.1%（74/112），HBsAg、HBeAb和HBcAb與HBV～DNA的檢出率不一致，將兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較（x2=11.1511，P=0.0008），即其差異有顯著性。

3 討論

乙型肝炎診斷指標(biāo)最常用的是血清標(biāo)志物HBV～DNA的檢測數(shù)據(jù)，它能夠反映出乙肝病毒在機(jī)體內(nèi)免疫反應(yīng)的情況，但不能夠直接將機(jī)體內(nèi)HBV～DNA復(fù)制情況反映出來。臨床上HBV～DNA血清標(biāo)志物具有復(fù)雜性，根據(jù)檢測結(jié)果難以準(zhǔn)確判斷HBV～DNA有無感染及其復(fù)制情況。時間分辨免疫熒光法檢測通常需要病原體在1015～1017個之間，才能將陽性檢測出來，但如果在感染后的“窗口期”，通常有假陰性結(jié)果出現(xiàn)。PCR依靠熒光定量的方法，將被感染后的病原體其發(fā)病時間、數(shù)量及病情狀況，兩者之間建立了關(guān)系[2]。

研究乙肝小三陽血清標(biāo)志物與HBV～DNA兩者之間的相關(guān)性，對乙型肝炎在臨床上的診斷、治療效果及預(yù)后情況有著極其重要的意義。在本實驗中，通過采取TRFIA和PCR兩種手段，對300例乙肝小三陽患者HBsAg、HBeAb和HBcAb與HBV～DNA表達(dá)情況進(jìn)行檢測。結(jié)果表明，乙肝小三陽患者中HBsAg、HBeAb和HBcAb陽性的檢出率是77.1%，HBV～DNA的檢出率是62.6%。大多認(rèn)為若HBeAg呈陽性，HBV～DNA其復(fù)制一般呈積極活躍態(tài)。這項實驗的結(jié)果說明，即使HBeAg呈陰性也不能表說明HBV～DNA完全終止其復(fù)制或血清中的病毒消失，該結(jié)論也與以往的研究結(jié)果一致[3]。HBV～DNA的檢出率與HBsAg、HBeAb和HBcAb的檢出率不一樣，其原因可能是HBV～DNA與HBsAg、HBeAb和HBcAb在檢測中，其表達(dá)的含義沒有完全一致。在臨床上，以往的觀念認(rèn)為，抗病毒治療取得療效的依據(jù)就是，慢性乙型肝炎病人HBeAg呈現(xiàn)陰性后，傳染性變?nèi)跚也∏橐驳靡院棉D(zhuǎn)。本實驗中，在HBeAg呈陰性的患者中，利用信號敏感的DNA擴(kuò)增，血清中大約可以檢測出40%左右的病毒在進(jìn)行復(fù)制。在HBeAg呈陰性的乙肝小三陽患者面前，HBV～DNA是否存在復(fù)制情況，可作為疾病發(fā)展與預(yù)后情況的重要指標(biāo)，判斷出抗病毒的效果[4]。

在本實驗中，HBsAg、HBeAb和HBcAb陽性表達(dá)情況和HBV～DNA相關(guān)性極高，表明HBsAg、HBeAb和HBcAb陽性和HBV～DNA其復(fù)制情況是一致的，但其陽性的檢出率是77.1%，HBV～DNA的檢出率是62.6%，二者的檢出率有顯著性差異，這也說明，在臨床的判斷上，乙肝病毒其復(fù)制情況與其在機(jī)體內(nèi)的活躍程度，不能僅僅只依靠HBsAg、HBeAb和HBcAb陰陽性情況，正確的方法是對HBV-DNA采用定量檢測的熒光PCR方法[5]。

血清標(biāo)志物中HBV～DNA含量的多少是病毒是否繼續(xù)復(fù)制最直接最重要的標(biāo)志，也是判斷感染程度的有效方法，熒光PCR方法可以在DNA程度上，識別在體內(nèi)的潛伏情況與活躍情況，故此可認(rèn)定為HBV～DNA有否感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)。血清學(xué)標(biāo)志物在此基礎(chǔ)上，對于乙肝小三陽患者，通過熒光PCR方法對HBV～DNA動態(tài)觀測其數(shù)量，可以有效的指導(dǎo)乙肝疾病的診斷、診斷及臨床療效，也有助于臨床治療方案的制訂和預(yù)后情況的判斷。

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