對桑菊飲制備工藝的研究

劉 卓，劉 莉，蘭明紅，沈 巍，霍 軍

（海軍航空大學一基地錦西場站醫院，遼寧 葫蘆島 215000）

中藥的療效不僅與藥材的質量及炮制方法有關，還與其煎煮工藝密切相關。李時珍稱“凡服湯藥，雖品物專精，修治如法，而煎藥者魯莽造次，水火不良，火候失度，則藥亦無功”。 清代醫家徐靈胎稱“煎藥之法最宜深講，藥之效與不效，全在于此”。桑菊飲方劑出自清朝吳瑭的《溫病條辨》卷一，屬于辛涼解表劑，具有宣肺止咳、疏風清熱之功效，常用于治療外感風熱、咳嗽初起之證[1]。此方劑中的桑葉、菊花為君藥，主要的有效成分是蘆丁和綠原酸，均具有抗炎、抗病毒等作用[2-3]。為了進一步探討制備桑菊飲的最佳煎煮工藝，筆者按照《溫病條辨》中所記載的古代煎煮法、臨床醫療機構煎煮法、古今結合煎煮法和正交試驗優選出的煎煮法分別制備桑菊飲，并按照2010版《中國藥典》中規定的方法測定使用上述4種煎煮法制備的桑菊飲中蘆丁和綠原酸的含量[4-6]。然后，對用這四種方法制備的桑菊飲進行綜合評價，從中選出制備桑菊飲的最優煎煮工藝。現報告如下。

1 儀器與試劑

1.1 研究儀器

本次研究使用的儀器為高效液相色譜儀(由美國RerkinElmer公司提供，型號為Altus A10)、PDA檢測器、Empower3數據處理系統、360EP 125SM型電子分析天平（由德國Sartorius賽多利斯提供），數控超聲波清洗器(由昆山市超聲儀器有限公司提供，型號為HS6150)，水浴鍋(由鞏義市英峪予華儀器廠提供)， WX-9A祝爾康煎藥壺(由廣州文新電器有限公司提供)。

1.2 研究試劑

1）分析試劑：甲醇的純度為色譜純，水為重蒸水，其他試劑的純度均為分析純。2）對照品：蘆丁對照品(批號為100080—200306)和綠原酸對照品(批號為110753—200413)，均由中國藥品生物制品檢定所提供。3）桑葉、菊花、薄荷等飲片均購于安泰堂中藥飲片有限公司，并由甘肅省中醫院質檢部鑒定為正品。

2 方法與結果

2.1 處方

本次研究所用處方出自清朝吳瑭《溫病條辨》卷一，即由桑葉7.5 g、菊花3 g、杏仁6 g、薄荷2.5 g、連翹5 g、桔梗6 g、生甘草2.5 g、蘆葦6 g八味藥組成。

2.2 制備桑菊飲的方法

2.2.1 方法A 按照《溫病條辨》中記載的桑菊飲煎煮法“水二杯，煮取一杯，日二服”制備，方法是：按照處方比例分別稱取三份藥材，分別將藥材放入電磁壺中，在每份藥材中加入400 ml的水，煮沸后再煎煮15 min，取濾液200 ml，備用。

2.2.2 方法B 按照臨床醫療機構所用的煎煮法制備桑菊飲，方法是：按照處方比例分別稱取三份藥材，分別將藥材放入電磁壺中，第一煎在藥材中加9倍量的水（360 ml）浸泡30 min，煮沸后再煎煮15 min，過濾取藥汁；第二煎在過濾后的藥渣中加入4倍量的水（160 ml），煮沸后再煎煮10 min，過濾取藥汁；合并兩次所得的藥汁，備用。

2.2.3 方法C 結合方法A和方法B制備桑菊飲，方法是：按照處方比例稱取三份藥材，將藥材放入電磁壺中，第一煎在每份藥材中加入7倍量的水（280 ml）浸泡30 min，煮沸后再煎煮7 min，取藥汁140 ml；第二煎在過濾后的藥渣中加入3倍量的水（120 ml），煮沸后再煎煮8 min, 取藥汁60 ml；合并兩次所得的藥汁，備用。

2.2.4 方法D 按照正交試驗優選出的煎煮法制備桑菊飲，方法是：按照處方比例稱取三份藥材，將藥材放入電磁壺中，第一煎在每份藥材中加入10倍量的水（400 ml）浸泡30 min，煮沸后再煎煮30 min，濾出藥汁；第二煎在過濾后的藥渣中加入10倍量的水（400 ml），煮沸后再煎煮30 min，濾出藥汁；合并兩次所得的藥汁，備用[7]。

2.3 對用這四種方法制備的桑菊飲進行綜合評價

2.3.1 對桑菊飲中蘆丁和綠原酸的含量進行檢測[8-9]

2.3.1.1 色譜條件 1）色譜柱：Waters Symmetry C 18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)。2）流動相：甲醇(A)-0.1%的磷酸溶液(B)。3）洗脫程序：0～10 min、A為30%，30 min、A為5O%，40 min、A為60%。4）流速：1 ml/min。5）柱溫為35℃。6）檢測波長：350 nm。7）進樣量：l0μl。

2.3.1.2 制備對照品溶液 分別精密稱取0.85 mg的綠原酸對照品和1 mg的蘆丁對照品，將其放入10 mL的容量瓶中，加入甲醇至預設刻度，制成每0.085 mg/ml的綠原酸對照品溶液和0.1 mg/ml的蘆丁對照品溶液。

2.3.1.3 制備供試品溶液 精密吸取用四種方法所制的桑菊飲各2 ml，分別將其放入5 ml的容量瓶中，加入甲醇定容至預設刻度，搖勻后作為供試品溶液。

2.3.1.4 線性關系考察 分別精密吸取綠原酸對照品貯備液0.05 mL、0.1 mL、0.15 mL、0.3 mL、0.4 mL，將其分別放入l mL的容量瓶中，加入甲醇稀釋至預設刻度后搖勻，使藥液的濃度分別為 4.25 μg/mL、8.5 μg/mL、12.75 μg/mL、25.5 μg/mL、34 μg/mL。精密吸取濃度為0.1 mg/ml的蘆丁對照品溶液0.005 mL、0.01 mL、0.015 mL、0.03 mL、0.4 mL，分別將其放入l mL的容量瓶中，加入甲醇稀釋至預設刻度后搖勻，使藥液的濃度分別為0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、1.5 μg/mL、3.0 μg/mL、4.0 μg/mL。分別吸取上述對照品溶液各10 μL，加入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定藥液的峰面積值，以峰面積均值(Y)為縱坐標，進樣的濃度(X)為橫坐標，繪制標準曲線，得出綠原酸的回歸方程Y=14.079X-4.4328，r=0.999 5(n=5)，蘆丁的回歸方程Y=1633.7X+17.898，r=0.999 2（n=5）。結果顯示：綠原酸的進樣量在4.25～34 μg/mL的范圍內、蘆丁的進樣量在0.5～4 μg/mL的范圍內可呈現出良好的線性關系。

2.3.1.5 樣品含量的測定 分別精密吸取10 μL的供試品溶液注入到液相色譜儀中，每個樣品均平行進樣2次，使用外標兩點法計算樣品中綠原酸的含量和蘆丁的含量。結果見表1。

2.3.1.6 對樣品進行綜合評估 分別精密吸取10 ml的樣品藥液，將其放在已干燥至恒重的蒸發皿中，再將其放入溫度為105℃的烘箱中干燥3 h，取出后放入干燥器內冷卻30 min，迅速精密稱重，計算浸出物的得率[10]。按照綠原酸和蘆丁的2次進樣指標，對樣品藥液進行綜合評分。綜合加權評分公式：綜合評分=(綠原酸平/綠原酸max+蘆丁平/蘆丁max)×80+浸出物平／浸出物max×20[11]。將干膏率、綠原酸和蘆丁作為指標，對四組樣品藥液進行綜合評估。結果顯示：用古今結合法制備的桑菊飲中綠原酸和蘆丁的含量明顯高于用其他3種煎煮法制備的桑菊飲；用正交試驗優選的煎煮法制備的桑菊飲其浸出物的得率最高；用古今結合法制備的桑菊飲的綜合評分最高。結果見表1。

表1 對用4種方法制備的桑菊飲進行綜合評估的結果

2.3.2 對用古今結合法制備桑菊飲進行驗證試驗的結果以古今結合法為煎煮工藝標準，制備3批樣品后，對其進行驗證試驗。結果顯示：用古今結合煎法制備的桑菊飲的綜合評分最高，且用此法煎煮所得三批湯劑進行驗證試驗的結果相比無差異。這說明，此工藝穩定可行，可將其作為制備桑菊飲的標準化煎煮工藝。結果見表2。

表2 對用古今結合法制備桑菊飲進行驗證試驗的結果（%）

3 討論

筆者通過查閱文獻，發現目前對桑菊飲煎煮方法的研究僅局限于單一的煎煮法，未對不同的煎煮方法進行相互對比研究。在《溫病條辨》中未明確記載桑菊飲的煎煮時間，只注明“水二杯，煮取一杯……”；在現代中藥研究中對解表藥的煎煮要求為“用武火迅速煮沸，改用文火維持lO～15 min即可”[12]；在臨床醫療機構煎藥室的質量管理規范中要求“解表類中藥不宜久煎，煮沸后再煎煮15～20 min…第二煎的煎煮時間應當比第一煎的時間略縮短”；在金仲達等[13]通過正交試驗法優選的桑菊飲煎煮工藝為“浸泡30 min加8倍量的水，煎煮2次，每次煎煮30 min”。古代與現代的中藥煎煮方法在煎藥器具、浸泡時間、煎煮次數、煎煮方法方面均存在一定的差異[14]。本次研究的結果證實，與其他煎煮法相比，用古今結合煎法制備桑菊飲的效果最為理想，可較好地保留湯劑中藥物的有效成分。因此，可將此煎煮法作為制備桑菊飲的標準化煎煮工藝。