血小板減少及血液中微粒的臨床檢驗分析

劉 娟

（遼寧省葫蘆島市中心醫院檢驗科，遼寧 葫蘆島 125001）

血小板是血細胞中最小的成分。血小板在止血、凝血中發揮著極為重要的作用。從最近幾年的研究中可發現，血栓形成期間，各種更小的細胞微粒發揮著非常重要的作用[1]。通過檢測血小板各類微粒，有利于止血，同時還可預測、診斷血栓性疾病。本文研究分析血小板減少及血液中微粒臨床檢驗情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選我院2016年2月至2017年2月接收的冠心病36例，急性腦梗死34例，慢性腎功能衰竭38例，化療后急性白血病28例及健康體檢者50例為研究對象。所有患者年齡為10～78歲，平均年齡為（50.3±12.5）歲。男78例，女58例。健康體檢者年齡20～62歲，平均年齡為（45.6±10.2）歲。男30例，女20例。所有研究對象的基礎性資料并無實質性差異，且所有患者相關疾病的診斷均符合臨床判斷標準。

1.2 方法：應用流式細胞儀檢測所有研究對象的血小板微粒，并將3、0.8 mm作為參照標準。完成制作標本后，應用免疫熒光標記方法標記血小板為例，對照定位，檢測FCM。依據一定數量的血漿計算PMPs的絕對值，并利用N表示。

1.3 統計學分析：研究活動中產生的所有數據均利用統計學SPSS19.0專用軟件進行處理，計數資料利用χ2檢驗，計量資料以均數±標準差（±s）表示，分別采用卡方檢驗和t檢驗，以判斷兩組數據差異性，如P＜0.05表明差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 靜息血小板釋放的血小板微粒量比較：對比各組研究對象血小板微粒檢測結果，健康組參數要顯著低于其他各種，有統計學意義（P＜0.05）；但健康體檢者與化療后的急性白血病患者進行比較，兩組檢測的血小板微粒并不具有差異（P＞0.05），見表1。

2.2 活化血小板釋放血小板微粒量：相對比不同狀態下健康體檢者的血小板微粒量，明顯存在著較大的差異（P＜0.05），即靜息血小板釋放血小板微粒量為（1.3±5.5）×105mL血漿，活化血小板所釋放的血小板微粒為（1.5±8.8）×105mL血漿。

表1 各類研究對象靜息血小板釋放的血小板微粒量

3 討 論

研究表明，血液循環多由細胞顆粒提供[2]。如機體出現不同病癥，那么各類微粒數量、相關抗原成分同樣會發生改變。定量分析相關微粒，對止血原理、過程和血栓性疾病治療均具有非常重要的意義。

臨床檢驗血液細胞微粒，主要采取流式細胞術[3]。此次研究活動同樣采取該種檢驗方法。微粒膜上的表達與來源細胞相同的表面比較分子。合理選擇特異性標記分子單抗，可確定細胞來源。相對比來源細胞，微粒體積偏小。檢測采取流式細胞術發射的散射光強度，可清晰反映出顆粒的大小，同時可利用熒光標記AnnexinV顯示微粒外露的磷脂酰絲氨酸。而這些特點都能夠為FCM檢測血液中微粒提供條件，以便獲得準確的檢測結果。確認細胞表面標記分子，同時還可利用單克隆抗體制備來不斷萬神，以此提高FCM檢測定量性，且還可定性分析血液中微粒[4]。如果血小板吸附于受損的血管壁中，或受到誘導劑、高切應力的作用初心活化反應的時候，就會通過出芽的方式顯露囊泡，以此釋放或撕裂，產生直徑約為0.1～1.0 μm的血小板微粒。所暴露的磷脂表面在凝血催化活性作用下會產生促凝功能，而這就被視作為血管受損時止血時對止血過程產生影響。臨床研究發現，多種血栓性疾病的形成和相關性并發癥的產生，循環血小板微粒會顯著增高。但是循環血小板微粒升高的具體原有至今仍不清楚[5]。其中有學者指出，PMP會引起相關微循環細胞應答，而這就會成為臨床研究的熱點。血小板微粒的體積非常小，如要觀察其形態變化，那只能利用電子顯微鏡。但因含有較多的血小板膜糖蛋白，通常應用比較廣泛的就是免疫學檢測方法，如酶免疫、流式細胞術等多種方法。根據相應的單克隆抗體就能夠識別出。

機體患有某種疾病，可通過檢測微粒水平與性質的變化了解到。在現有的臨床研究水平上，微粒生物學的應用價值主要體現在以下3點：首先，在研究疾病形成機制與病理結果方面，單核細胞、血小板、血管內皮細胞活化與損傷可提供參考信息[6]。細胞活化后就會產生微粒細胞，可直接反映出細胞功能狀態，并揭示疾病的產生機制，可為臨床病情診斷提供可靠根據。其次，判斷臨床治療效率時，可將血液中微粒變化作為參考根據。最后，疾病診斷時可依據血液中微粒進行鑒別。即使血小板微粒在出血與血栓性疾病中有著非常重要的意義，但能夠應用于血小板為例檢測的方法并不是非常多。一般情況下就是利用流式細胞術與酶免疫分析方法。當前臨床上的FCM檢測血小板微粒主要采取PRP或全血法。利用此類方法可根據血小板為例來表示表達量。但如將此結果來比較試驗之間的差異，會產生不利影響。由于血小板為例攜帶與血小板相同的膜糖蛋白，對排除血小板微粒的干擾具有一定難度[7]。在此次研究活動中，選我院2016年2月至2017年2月接收的冠心病36例，急性腦梗死34例，慢性腎功能衰竭38例，化療后急性白血病28例及健康體檢者50例為研究對象。應用流式細胞儀檢測所有研究對象的血小板微粒，并將3、0.8 mm作為參照標準，比較不同組別的檢測結果。對比各組研究對象血小板微粒檢測結果，健康組參數要顯著低于其他各種，有統計學意義（P＜0.05）；但健康體檢者與化療后的急性白血病患者進行比較，兩組檢測的血小板微粒并不具有差異（P＞0.05）；相對比不同狀態下健康體檢者的血小板微粒量，明顯存在著較大的差異（P＜0.05）。即采取的是低速離心操作，預防后續標本處理期間產生血小板活化，減少人為因素對檢測結果的影響。

綜上所述，預測、診斷血栓性疾病中，血小板微粒具有非常重要的應用價值，同時還可活化血小板，可在臨床中推廣性檢驗應用。