超數(shù)排卵處理對(duì)小鼠子宮組織結(jié)構(gòu)的影響

顧紅霞，鄒晨鵬

（贛州農(nóng)業(yè)學(xué)校，贛州 341100）

0 引言

子宮是一個(gè)中空的肌質(zhì)性器官，富有伸展性，是胎兒生長(zhǎng)發(fā)育和娩出的器官。子宮借子宮闊韌帶附著于腰下部和骨盆腔側(cè)壁，大部分位于腹腔內(nèi)，小部分位于骨盆內(nèi)，在直腸和膀胱之間，前端與輸卵管相接，后端與陰道相通。子宮闊韌帶為寬而厚的腹膜褶，含有豐富的結(jié)締組織、血管、神經(jīng)及淋巴管，其外側(cè)有子宮圓韌帶。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)組織

超數(shù)排卵處理后的子宮10個(gè)和未經(jīng)處理的子宮10個(gè)。

1.1.2 試劑與藥品

70%、80%、90%、95%酒精及無(wú)水酒精、二甲苯、甲醛、蘇木素液、1%的鹽酸酒精、伊紅水溶液、蒸餾水。

1.1.3 主要儀器

包埋機(jī)：型號(hào)KD-BM，浙江省金華市利迪儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)生產(chǎn)。

切片機(jī)：型號(hào)RM2235，上海萊卡儀器有限公司生產(chǎn)。推片機(jī)：型號(hào)TP-1，上海醫(yī)療儀器廠產(chǎn)品。

烘片機(jī)：型號(hào)KD-H，浙江省金華市利迪儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)。

顯微鏡及圖像采集系統(tǒng)：型號(hào)OLYMPUS-BH2，沈陽(yáng)市互利康醫(yī)療器械公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 子宮組織切片制作

（1）取材。取出超數(shù)排卵處理和未處理的小鼠子宮各10個(gè)，放在10%的福爾馬林溶液中固定5～7 d，制作切片前于相同部位切取組織塊。

（2）脫水。組織塊用自來(lái)水沖洗4～6 h，然后再用不同濃度的酒精逐級(jí)脫水。脫水的時(shí)間如下：①70%酒精，4～6 h（也可長(zhǎng)期保存）；②80%酒精，4～6 h；③90%酒精，4～6 h；④95%酒精Ⅰ、Ⅱ各4～6 h；⑤無(wú)水酒精Ⅰ、Ⅱ各 2 h。

（3）透明。酒精與石蠟不能混和，因此脫水后的材料在浸蠟前必須經(jīng)過透明。透明劑既可替代組織中的酒精，又能溶解石蠟，有利于石蠟的滲入。二甲苯是常用的一種透明劑。將脫水后的材料經(jīng)1∶1無(wú)水酒精與二甲苯→二甲苯（Ⅰ）→二甲苯（Ⅱ），各級(jí)時(shí)間為0.5～2 h，使組織達(dá)到透明為止。

（4）浸蠟和包埋。透明后的組織塊做好標(biāo)記，放入包埋機(jī)中，依次在石蠟Ⅰ（56 ～58 ℃）和石蠟Ⅱ（58～60 ℃）中浸蠟，各2 h，取出后再用60 ℃的蠟包埋，待蠟和組織塊完全冷卻，修整蠟塊。

（5）切片、貼片和烘片。將修整好的蠟塊置于切片機(jī)上進(jìn)行切片，厚度為5 mm。選擇較好的切片置于45 ℃恒溫水浴鍋中進(jìn)行展片，2～3 min即可，用洗好的載玻片輕輕取出展好的切片，并將其放到烘片機(jī)上烘2～4 h。

（6）脫蠟、染色。將載有切片的載玻片依次放入下面的液體中進(jìn)行脫蠟。①二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5～10 min；②無(wú)水酒精1 min；③90%酒精1 min；④80%酒精1 min；⑤70%酒精1 min；⑥蒸餾水3～5 min；⑦蘇木素液7～10 min；⑧1%鹽酸酒精分色1～3 s；⑨自來(lái)水洗5～15 min；⑩伊紅水溶液1～3 min；k70%酒精2 min；l80%酒精2 min；m90%酒精2 min；n95%酒精Ⅰ、Ⅱ各2 min；o無(wú)水酒精Ⅰ、Ⅱ各5 min；p蒸餾水3 min；q二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明各5 min。

（7）封片。中性樹膠滴到組織上，蓋上蓋玻片，平置晾干，每組制片30張。

1.2.2 顯微鏡下觀察

在顯微鏡下觀察子宮的組織結(jié)構(gòu)，拍攝照片并做好相關(guān)記錄。

2 結(jié)果與分析

未經(jīng)過超數(shù)排卵處理的小鼠，子宮黏膜表面較平整，子宮內(nèi)膜上皮是單層柱狀上皮，上皮細(xì)胞成矮柱狀，少數(shù)腺體有彎曲，有腔的腺體很少，分布稀疏，子宮腺不發(fā)達(dá)，子宮壁相對(duì)比較薄，見圖1、圖2。超排后，在激素的作用下子宮開始發(fā)育，子宮壁厚度增加，子宮內(nèi)膜胚性結(jié)締組織迅速增生變厚，上皮為假?gòu)?fù)層柱狀上皮，上皮細(xì)胞變得較高較密，腺體較彎曲，腺腔增大，腺體發(fā)達(dá)，有稀少分泌物，腺體分布較密，見圖3、圖4。子宮壁表面不完整，這是由于子宮內(nèi)膜增厚，上皮細(xì)胞變密，子宮黏膜內(nèi)的子宮腺非常發(fā)達(dá)，腺腔增大、彎曲、增生，分泌更加旺盛，血管迅速增長(zhǎng)，間質(zhì)疏松并有水腫，因此，切出的片表現(xiàn)不完整，有像突起和皺褶一樣的結(jié)構(gòu)。

圖1 對(duì)照組子宮 40×

圖2 對(duì)照組子宮 40×

圖3 超排處理組子宮 40×

圖4 超排處理組子宮 40×

3 討論

3.1 對(duì)子宮組織結(jié)構(gòu)的影響

超排后雌激素水平達(dá)到高峰，小鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞和子宮腺細(xì)胞均為高柱狀，細(xì)胞排列整齊，可見核分裂象，子宮腺較發(fā)達(dá)，子宮壁變厚[1]。

3.2 對(duì)子宮內(nèi)膜的影響

超數(shù)排卵處理后，小鼠子宮內(nèi)膜形態(tài)表現(xiàn)與對(duì)照組明顯不同，鏡下可見內(nèi)膜表層細(xì)胞呈鋸齒狀，宮腔間隙較寬，被復(fù)粘膜層子宮腺發(fā)育，固有膜寬大，肌壁厚，見圖3、圖4；而對(duì)照組小鼠子宮腔呈裂隙狀，粘膜層平坦，被復(fù)上皮由柱狀單層立方組成，子宮腺少，固有膜窄，肌壁薄，見圖1、圖2。

超數(shù)排卵處理后，F(xiàn)SH激素促進(jìn)子宮內(nèi)膜腺的分泌，引起附植現(xiàn)象的出現(xiàn)。

胚泡附植過程中，子宮內(nèi)膜細(xì)胞內(nèi)的水解酶，可消化子宮液中的大分子物質(zhì)為胚泡提供發(fā)育的營(yíng)養(yǎng)。同時(shí)，水解酶還在胚泡疏松附植、穿入和子宮內(nèi)膜的蛻膜化過程中具有重要作用[2]。

3.3 對(duì)子宮腺的影響

超排后子宮切片上皺褶增加，表明超排在時(shí)大量激素的作用下子宮腺的發(fā)育更充分，子宮腺體增加，子宮腺體較大蜷曲，出現(xiàn)許多分支管狀腺，腺體腔隙增大導(dǎo)致切片上子宮黏膜不完整[3]，說(shuō)明超排處理時(shí)的激素對(duì)子宮壁的結(jié)構(gòu)以及子宮腺的發(fā)育有促進(jìn)作用，可以滿足超排后更多胚胎附植的需要。

4 結(jié)論

試驗(yàn)通過對(duì)小鼠子宮組織切片的觀察，經(jīng)試驗(yàn)組與對(duì)照組的比較，發(fā)現(xiàn)經(jīng)超數(shù)排卵激素的處理，子宮內(nèi)膜發(fā)生變化，主要表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜上皮增生、腺體加長(zhǎng)、腺腔加大、彎曲增多，子宮內(nèi)膜的結(jié)締組織和成纖維細(xì)胞發(fā)育，子宮壁變厚可以為胚胎的著床和發(fā)育提供良好的環(huán)境。