高效液相色譜法測定動物性食品中磺胺類藥物多殘留

我國食品安全在四個方面存在風險，其中獸藥濫用是當前食品安全源頭污染的主要來源，我國獸藥應用依然處于無序狀態。磺胺類藥物是一種廣譜抗菌藥，其性質穩定、產量大、品種多、價格低、使用簡便、供應充足等優點，在獸醫臨床和畜牧養殖業中作為飼料添加劑或動物疾病治療藥物廣泛應用。但是磺胺類藥物會引起人過敏性反應，并有“三致”作用。隨著社會的發展，磺胺類藥物的不合理使用，使其在動物性食品中殘留引起食品安全問題已備受關注，成為食品安全監管領域的重點工作之一，而各類檢測方法也隨之應運而生。

本實驗旨在建立一種高效液相色譜法測定動物性食品中磺胺類藥物多殘留的測定方法。該方法操作簡單、快速、穩定、精密度高，適用于基層食品安全檢測部門實驗室應用。

實驗部分

主要儀器與裝置。高效液相色譜儀紫外檢測器Alliance 2695- TUV（美國Waters公司）；MS105分析天平感量0.000001g，ME802E天平感量0.01g（瑞士Xcjkzxer Toledo公司）；渦旋振蕩器MS1 MiniShaker（德國IKA公司）；離心機Multifuge X1R（美國Thermo公司）；均質機Scientz- 11L（寧波新芝生物科技股份有限公司）；旋轉蒸發儀N- 1200BV- WD（日本理化器械株式會社）；氮吹儀N- EVAP（美國Organomation公司）；固相萃取裝置20POS（美國Waters公司）。

主要試劑與材料。磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲噁唑、磺胺異噁唑、磺胺二甲氧噠嗪對照品：Dr.Ehrenstorfer GmbH。含量均≥99.0%；乙酸乙酯（色譜純）、乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純）、甲酸（色譜純）：Thermo；鹽酸（分析純）、正己烷（分析純）：北京化工廠；超純水：默克Mlix Essential5+Milli- Q Reference純水和超純水聯用系統。

標準溶液的配制。以測得峰面積為縱坐標，對應的標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。求回歸方程和相關系數。

色譜分析條件。色譜柱：ODS- 2HYPERSIL：C18 5μm 250mm×4.6mm；紫外檢測波長：270nm；進樣量：100μL；柱溫：35℃；流速：1mL/min；梯度洗脫。

前處理方法。稱取5.00g經切碎勻漿的鮮豬肝樣品于50mL聚四氟乙烯離心管中，加入10g無水硫酸鈉和乙腈20mL，參照《食品安全國家標準動物性食品中13種磺胺類藥物多殘留的測定高效液相色譜法》（GB 29694- 2013）進行樣品前處理，過0.22μm的針筒有機濾膜，于進樣瓶中供高效液相色譜測定。

結果與討論

檢測器的選擇。本實驗單獨采用紫外檢測器，其中10個峰按先后順序分別是：磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲噁唑、磺胺異噁唑、磺胺二甲氧噠嗪。

精密度試驗。根據《實驗室質量控制規范食品理化檢測》（GB/T 27404- 2008）附錄F.2的要求，結合《食品安全國家標準動物性食品中13種磺胺類藥物多殘留的測定高效液相色譜法》（GB 29694- 2013）。精密度實驗選用30.0μg/kg、60.0μg/kg、120.0μg/kg三個水平進行，重復測定6次。實驗結果表明，在紫外譜圖中峰面積的RSD<5%。本法測定的精密度較好，實驗結果見表1。

方法的線性范圍、回收率和檢出限。將前文中配制好的10～5000μg/L范圍的系列混合標準溶液在前文所述的高效液相色譜條件下測定，以各藥物的峰面積對質量濃度進行線性回歸，得到10種磺胺類藥物的線性方程及相關系數。在鮮豬肝樣品中加入混合標準溶液（分別加15、30、60μL，即30.0、60.0、120.0μg/ kg3個水平）按上述前處理和檢測方法進行測定，每個添加濃度重復6次，結果見表2。從表2可見，在10～5000μg/L質量濃度范圍內10種抗菌藥的線性關系良好，加標回收率范圍80.53%～100.71%，可以滿足日常分析的要求，10種磺胺類物質在本方法的回收率和檢出限見表2。

樣品前處理步驟主要參考GB/T29694-2013，實驗表明完全按照標準進行前處理，加標回收較不穩定。本實驗參考文獻，試驗選擇比較了乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯等溶劑對10種磺胺的提取效果。結果表明乙腈提取可以沉淀蛋白，提取液中油脂含量也較少，對于目標檢測物提取效率較高且濃縮凈化較容易。因此選擇用乙腈作為提取溶劑，超聲提取5min，確定儀器的最佳工作條件為梯度洗脫；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；紫外檢測波長：270nm；進樣量：100μL。在此最佳條件下，10種磺胺類藥物的回收率90%左右，RSD小于5%，相關系數達到0.999。隨機抽取超市售賣的鮮豬肝3份，用所建立的方法進行檢測，均未檢出本文所分析的10種磺胺類藥物。該方法操作簡單、精密度高、線性范圍寬，適用于基層食品安全實驗室對于動物性食品中磺胺類藥物多殘留的日常監測。

作者簡介：

劉麗（1986-），女，北京，北京市西城區食品藥品監督管理局，食品工程師，研究生，從事食品藥品檢測工作。