中藥材干辣椒中辣椒素和二氫辣椒素含量測定方法研究

韋繼雯 閆倩玲 周云波 王紅

摘要：目的 對中藥材干辣椒中辣椒素和二氫辣椒素的反相高效液相色譜色譜法定量檢測方法的優化。方法 采用ThermoC18色譜柱（250mm×4.6mm，5um），流動相為甲醇-水（65：35），流速為1.0mL/min檢測波長280nm，柱溫40℃。結果 辣椒素及二氫辣椒素在20min內就得到更好的分離和準確的結果，線性范圍r=0.9999平均回收率為95.64%。結論 通過對流動相比例改變的檢測得到該方法準確，簡單，快速、分離效果優。規避了《中國藥典》中流動相甲醇-水（50：50）流動相黏度大，壓力高189PA，耗時長（60min）后出峰，具拖尾因子較大，峰型較差，傷柱子。可作為中藥材中辣椒素及二氫辣椒素的含量測定方法。

關鍵詞：干辣椒;辣椒素;二氫辣椒素

中圖分類號：R927.2 文獻標志碼：A 文章編號：1007-2349（2018）07-0076-03

辣椒（Capsicum frutescens L.）屬茄科辣椒屬，又名海椒、辣子、番椒、辣茄等，為植物辣椒的干燥成熟果實。收載于《中國藥典》2015年版一部中，呈圓錐形、類圓錐形、略彎曲。表面橙紅色、紅色或深紅色，光滑或較皺縮，顯油性。基部微圓，常有綠棕色、具有5裂齒的宿萼及果柄。辣椒素及二氫辣椒素屬香草胺類生物堿，是辣椒果實中的主要呈辣物質，辛、熱，歸心、脾經。溫中散寒，開胃消食，用于寒滯腹痛，嘔吐，瀉痢，凍瘡。為了高效提取辣椒中辣椒素及二氫辣椒素，本研究通過對《中國藥典》辣椒中的辣椒素、二氫辣椒素的提取方法和增加甲醇流動相比列進行選擇和優化，報道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器 安捷倫1260高效液相色譜儀（帶紫外檢測器）、ThermoC18色譜柱（250mm×4.6mm，5um）、BP211D電子分析天平（北京賽多利斯）、電熱恒溫水浴鍋、超聲波清洗器，DHG-9101-2A電熱恒溫干燥箱

1.2 材料 藥材為本地干燥尖辣椒（云南文山州硯山縣嫁依鎮）對照品 辣椒素（批號 110839-201205 97.5%中國食品藥品檢定研究院）二氫辣椒素（批號 11166-201303 98.5%中國食品藥品檢定研究院）試劑甲醇為色譜純，四氫呋喃為分析純，水為UP水。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取辣椒素5.23 mg、二氫辣椒素2.08 mg置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得。

2.2 《中國藥典》一部標準 取本品粗粉約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-四氫呋喃（1：1）混合液25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇-四氫呋喃（1：1）混合溶液補足減失的重量，搖勻、濾過，取續濾液，經0.45um濾膜濾過，即得。

優化方法：取本品粗粉約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇-四氫呋喃（1：1）混合液25mL，密塞，超聲處理30min，放冷，濾過，濾液揮干，加甲醇溶解，置10mL容量瓶中并稀釋至刻度，經0.45um濾膜濾過即得此方法通過提取過濾蒸干后，再經過甲醇溶解有效避免了一些油脂性成分及四氫呋喃峰的干擾。

2.3 色譜條件及系統適用性考察 ThermoC18色譜柱（250mm×4.6mm，5um），流動相為甲醇-水 分別為（50：50）（55：45）（60：40）（65：35）（70：30），流速為1.0mL/min 檢測波長280nm，柱溫40℃。見圖1～5。

圖1 流動相為甲醇-水（50：50）的色譜圖

圖2 流動相為甲醇-水（55：45）的色譜圖

圖3 流動相為甲醇-水（60：40）的色譜圖

圖4 流動相為甲醇-水（65：35）的色譜圖

圖5 流動相為甲醇-水（70：30）的色譜圖

通過對流動相比列的改變，可知在甲醇-水為（60：40）（65：35），圖形較好，方法簡、快速，峰形尖銳，拖尾因子小，分離效果好，結果準確、可靠等特點。見圖6～7。

圖6 流動相為甲醇-水（65：35）辣椒素、二氫辣椒素對照品的色譜圖

圖7 流動相為甲醇-水（65：35）辣椒素樣品的色譜圖

由于辣椒成分較復雜，故對提取方法、色譜條件進行了優化，本次研究對優化后的方法進行了色譜條件及系統適應性、線性關系、精密度、重復性、回收率進行了考察。

2.4 方法學考察

2.4.1 分離效果 流動相為甲醇-水（65：35）時，分離度為9.57，理論塔板數為10000以上，見色譜圖7。

2.4.2 線性關系 分別吸取對照品溶液5、10、15、20、25ul注入液相色譜儀，記錄色譜峰以進樣量X（ug/mL）為橫坐標，峰面積Y（mAU）為縱坐標，繪制標準曲線并進行回歸方程計算，辣椒素為Y=29.314X-0.9439，r=0.9999 ;二氫辣椒素為Y=12.513X+1.9029，r=0.9995 根據回歸方程表明進樣量與峰面積呈良好的線性關系見圖8。

圖8 辣椒素、二氫辣椒素標準曲線圖

2.4.3 精密度 精密吸取上述對照品溶液10ul，注入液相色譜儀，進行6次平行測定，結果表明該儀器的精密度良好，測定結果比較滿意。見表1。

表1 辣椒素和二氫辣椒素精密度試驗結果

2.4.4 重現性 取同一批樣品6份，按照2.3方法處理，取10ul注入液相色譜儀，依法測定，結果表明此方法的重復性好，結果比較滿意。見表2。

表2 辣椒素和二氫辣椒素重現性試驗結果

2.4.5 加標回收試驗結果 稱取本品粗粉約0.25g6份，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，兩個一組為平行樣，分別加入2.5mL、5mL、10mL上述對照品溶液，加入甲醇-四氫呋喃（1：1）混合液25mL，混勻，密塞，超聲處理30min，放冷，濾過，濾液揮干，加甲醇溶解，置10mL容量瓶中并稀釋至刻度，經0.45um濾膜濾過，即得。取10ul注入液相色譜儀，依法測定，色譜條件：ThermoC18色譜柱（250mm×4.6mm，5um），流動相為甲醇-水（65：35），流速為1.0mL/min 檢測波長280nm，柱溫40℃。見表3。

表3 辣椒素和二氫辣椒素回收率試驗結果

由回收率試驗結果得出準確度較好，以辣椒素、二氫辣椒素為對照品，利用加入甲醇-四氫呋喃（1：1）混合液提取，蒸干加甲醇定容，流動相甲醇：水（65：35）方法有效可行。

3 討論

本研究利用甲醇-四氫呋喃（1：1）混合液提取，通過蒸干再以甲醇為溶劑定容可以有效扣除背景值。通過對流動相比例改變的檢測得到在甲醇-水為（60：40）（65：35），辣椒素及二氫辣椒素在20min內就得到更好的分離和準確的結果，圖形較好，峰型變得尖銳，拖尾因子小。該方法準確，簡單，快速、分離效果優。同時操作簡便，重復性好，靈敏度高，使檢測人員無需再對檢測流動相進行摸索、調整并縮短檢測時間。可以用于中藥材干辣椒中辣椒素及二氫辣椒素的含量測定方法。《中國藥典》中使用的流動相為甲醇-水（50：50），流動相黏度大，壓力高189bar，耗時長（60min）后出峰，峰型較差、拖尾嚴重，又傷柱子。而流動相優化后改變了流動相濃度，壓力為93bar，出峰時間保留在20min內有效出峰時間。

隨著科學技術的不斷發展，中藥化學成分含量測定、提取分離的方法在不斷地改進更新，更多技術含量高的方法被廣泛應用，相信這些新技術的推廣應用，將會使生產成本降低、產品質量得到提高。

參考文獻：

[1]中國藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015：370.

[2]曹莉，黃多臨.HPLC法測定不同產地辣椒中辣椒素和二氫辣椒素的含量[J].中國民族民間醫藥，2016，25（12）：8-13.

（收稿日期：2018-06-12）