CELL-DYN-Sapphire 與XN-9000血液分析儀有核紅細胞計數準確性的比較及應用

張 馳，李 琴，張洪波，管 青

（華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院檢驗科，湖北 武漢 430030）

有核紅細胞（nucleated red blood cell，NRBC）屬于未成熟紅細胞，因各種原因使骨髓紅系幼稚細胞被釋放而出現在外周血中。剛出生的嬰幼兒外周血中可見NRBC，隨年齡增長會從血液中消失。成人外周血一旦發現NRBC，則大多為病理狀態，提示血液疾病的可能，如各類增生性貧血、白血病、紅白血病、骨髓異常增生綜合征、髓外造血等，應追蹤檢查和診斷，并及時對患者進行治療[1-2]。長期以來，NRBC計數都依賴于顯微鏡形態學鏡檢，該法雖為金標準，但也存在形態學技術要求高、工作量大、效率低等缺陷。隨著科技的發展，現在很多血液分析儀已具備自動化檢測NRBC的功能[3-5]，有自動化程度高、檢測速度快、血樣用量少、生物危害小等優點，但各種儀器各有特點，也給檢驗人員選擇帶來了困難。本研究旨在通過評價XN-9000血液分析儀（以下簡稱XN-9000）和CELL-DYN-Sapphire血液分析儀（以下簡稱CD-Sapphire）檢測NRBC的性能，并與人工顯微鏡鏡檢進行比對，根據其檢測性能制定合適的NRBC復檢規則。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院住院患者113例，其中男62例、女51例，年齡0～73歲，包括增生性貧血49例、新生兒21例、白血病17例、肝癌5例、胃癌2例、其他19例。采用真空采血管（美國BD公司）采集所有患者靜脈血2 mL，乙二胺四乙酸二鉀抗凝，并在3 h內完成檢測。

1.2 儀器與試劑

CD-Sapphire及配套試劑、質控品（美國雅培公司）、XN-9000及配套試劑、質控品（日本Sysmex公司）、SP-1000i全自動推片機（日本Sysmex公司），Leica光學顯微鏡（德國Leica公司）、瑞氏-吉姆薩染液（珠海貝索公司）。

1.3 方法

1.3.1 儀器法 嚴格按儀器標準操作規程操作，檢測前進行保養、校準及性能評價，每天1次室內質控在控，CD-Sapphire選擇“CBC+Resistant 紅細胞[L++]通道”（難溶紅細胞模式）檢測，XN-9000選擇WNR通道[白細胞（WBC）+NRBC通道]檢測，檢測結果保留2位小數，以個NRBC/100個WBC表示。

1.3.2 鏡檢法 取乙二胺四乙酸二鉀抗凝血標本，在SP-1000i全自動推片機上制備標準血片，如血量達不到儀器制片要求，按《全國臨床檢驗操作規程》（第4版）[6]要求手工制片并染色。每份標本制片2張，由2名細胞形態學經驗豐富的主管技師每張各計數200個WBC，同時計數NRBC數量，計算均值。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 2種儀器檢測NRBC與鏡檢法NRBC計數總體結果比較

采用鏡檢法、CD-Sapphire、XN-9000檢測105例標本的NRBC，結果分別為（7.89±1.25）、（11.07±1.37）、（8.67±1.24）NRBC個/100個WBC。

2.2 2種儀器檢測NRBC的敏感性和特異性

以鏡檢法為金標準。鏡檢法計數NRBC＞0，儀器法檢測NRBC＞0為真陽性；鏡檢法計數NRBC＞0，儀器法檢測NRBC=0為假陰性；鏡檢法計數NRBC=0，儀器法檢測NRBC＞0為假陽性；鏡檢法計數NRBC=0，儀器法NRBC=0為真陰性。2種儀器的敏感性和特異性見表1。

表2 CD-Sapphire、XN-9000檢測NRBC的性能比較

2.3 2種儀器檢測NRBC與鏡檢法NRBC計數的相關性分析

相關性分析顯示2種儀器與鏡檢法的NRBC計數結果均呈正相關。CD-Sapphire與鏡檢法的回歸方程為Y=0.947X+3.604（r=0.867，P＜0.05），見圖2。XN-9000與鏡檢法的回歸方程為Y=0.968X+1.036（r=0.974，P＜0.05），見圖3。

2.4 2種儀器與鏡檢法NRBC計數的一致性分析

Bland-Altman差異圖顯示，CD-Sapphire與鏡檢法計數結果差異的95%一致性界限為（-11.05～17.41）個NRBC/100個WBC，偏移為3.18個NRBC/100個WBC，見圖4；XN-9000和鏡檢法計數結果差異的95%一致性界限為（-5.08～6.64）個NRBC/100個WBC，偏移為0.78個NRBC/100個WBC，見圖5。XN-9000與鏡檢法的一致性優于CD-Sapphire。

圖1 CD-Sapphrie與鏡檢法NRBC計數的相關性

圖3 XN-9000與鏡檢法NRBC計數的相關性

圖4 CD-Sapphrie與鏡檢法NRBC計數的偏移分析

圖5 XN-9000與鏡檢法NRBC計數的偏移分析

2.5 2種儀器的NRBC鏡檢規則的建立

選擇儀器法檢測NRBC＞0的數據，再以鏡檢法作為參考繪制ROC曲線（鏡檢法≥1個NRBC/100WBC為陽性）。CD-Sapphire和XN-9000的曲線下面積分別為0.85和0.96。見圖6。

當CD-Sapphire設定NRBC≥3.70個NRBC/100個WBC為鏡檢規則時，敏感性（81.9%）和特異性（77.8%）最佳，NRBC檢出的假陽性率為22.63%，假陰性率為20.76%；當XN-9000設定NRBC≥2.42個NRBC/100個WBC為鏡檢規則時，敏感性（82.6%）和特異性（94.4%）最佳，NRBC檢出的假陽性率為7.60%，假陰性率為18.10%。根據ISO 15189的要求，血常規指標鏡檢的復檢規則必須符合假陰性率≤5%[7-8]，所以當CD-Sapphire設定NRBC≥1.38個NRBC/100WBC為鏡檢規則時，假陽性率為55.56%，假陰性率為4.17%；當XN-9000設定NRBC≥1.26個NRBC/100個WBC為鏡檢規則時，假陽性率為22.20%，假陰性率為4.20%。見表3。

圖6 CD-Sapphire、XN-9000結果的ROC曲線

表3 CD-Sapphire和XN-9000檢測NRBC不同鏡檢規則下檢測性能的比較

3 討論

外周血中NRBC的出現代表一種病理狀態，對大多數血液分析儀WBC計數與分類計數有一定干擾。因此，NRBC的準確檢測有著較為廣泛的意義。采用全自動血液分析儀進行NRBC檢測是近年來的新技術，逐漸應用于臨床[9]。CDSapphire是美國雅培公司生產的新一代血液分析儀，在傳統電阻抗和流式細胞術基礎上，增加了半導體激光和核酸熒光染色技術，并采用多角度偏振光散射來檢測NRBC[10-12]。XN-9000血液分析儀采用WNR通道（即WBC/嗜堿性粒細胞和NRBC檢測通道）檢測NRBC，該通道專用于WBC、嗜堿性粒細胞和NRBC計數，并針對WBC增加了NRBC自動修正功能。

本研究以鏡檢法NRBC計數為金標準，與CD-Sapphire和XN-9000檢測NRBC的結果進行比對分析。CD-Sapphire與XN-9000在檢測NRBC方面與鏡檢法都具有良好的相關性，但XN-9000與鏡檢法相關性（r=0.974）優于CDSapphire（r=0.867）。XN-9000檢測NRBC的敏感性和特異性（98.61%和90.24%）略好于CD-Sapphire（95.83%和56.10%），曲線下面積為0.96，也高于CD-Sapphire（0.85）。Bland-Altman差異圖顯示XN-9000與鏡檢法有更好的一致性（偏移為0.78個NRBC/100個WBC）。為避免NRBC干擾WBC計數的結果，對于出現NRBC的血液標本應進行人工顯微鏡鏡檢[12-13]。所以根據不同種類血液分析儀的性能制定各自合適的NRBC鏡檢規則十分必要。本研究結果顯示，在滿足假陰性率≤5%的條件下，XN-9000和CD-Sapphire NRBC鏡檢閾值差別不大，分別為≥1.26個NRBC/100個WBC和≥1.38個NRBC/100個WBC，但XN-9000假陽性率（22.20%）要低于CD-Sapphire（55.56%），可減少無效復檢的數量。因此，各實驗室應根據自身特點和需求，選擇適合本實驗室的血液分析儀。