GADD45α 、CXCL14蛋白在胃癌組織中的表達及其與臨床特征的關系

潘建生,江濤,陳一杰,劉朝輝

解放軍第一八〇醫院普通外科,福建 泉州3620000

胃惡性腫瘤在全球高發,近年來中國胃癌發病率呈現逐年上升的趨勢,嚴重威脅中國公眾的生命健康.惡性腫瘤存在自我增殖、血管新生、組織遷徙、無限復制和逃避凋亡等特征,目前胃癌基礎研究的重點集中在癌基因和抑癌基因表達的失調和腫瘤微環境中的細胞因子等[1].生長停滯DNA損傷可誘導蛋白α(growth arrest and DNA damage inducible protein alpha,GADD45α)在調節細胞周期監測點、細胞凋亡、DNA修復、維持基因組穩定等方面中扮演重要角色;趨化因子是由腫瘤細胞或基質細胞分泌的一類重要細胞因子,其與受體結合后影響腫瘤細胞遷移、血管再生、成纖維細胞間質合成等,也可以結合腫瘤細胞上相關特異性受體而直接造成腫瘤細胞的增殖或者凋亡,從而調控腫瘤的發生發展[2-3].本研究探討了GADD45α、趨化因子CXCL14蛋白在胃癌組織中的表達及其與臨床特征的關系,以期為臨床提供依據和指導,現報道如下.

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015年8月至2016年12月解放軍第一八〇醫院術后胃癌組織及癌旁組織標本.納入標準:①胃癌診斷標準參考人民衛生出版社《外科學》[4]中的標準;②胃癌組織及癌旁組織標本均來源于手術后,經病理學檢測證實;③患者獲取標本前未實施放化療;④患者臨床資料完整.排除標準:①轉移性胃癌;②放化療史;③未經病理學檢測證實;④臨床資料缺失.共納入胃癌組織標本60例(胃癌組)及對應的癌旁組織標本60例(對照組).60例患者中,男35例,女25例;年齡39～77歲,平均(53.3±8.6)歲;TNM分期:Ⅰ期10例,Ⅱ期24例,Ⅲ期20例,Ⅳ期6例;浸潤深度:T1期18例,T2期20例,T3期18例,T4期4例;分化程度:高分化12例,中分化21例,低分化27例;發生淋巴結轉移30例.

1.2 免疫組織化學染色方法

對所切取標本采用10%中性福爾馬林溶液進行固定,石蠟包埋,4 μm連續切片制作5片,其中4片黏附在載玻片上進行免疫組化染色,免疫組化染色采用SP法,1片使用HE染色法,對患者GADD45α蛋白和CXCL14蛋白表達情況進行判定.

1.3 檢測結果判定標準

GADD45α蛋白主要表達于細胞質或者細胞核,CXCL14蛋白主要表達于細胞質,呈黃色、棕黃色、褐色表達.①根據著色強度評分:無色為0分,淡黃色為1分,棕黃色為2分,褐色、黑色為3分;②根據陽性細胞比例評分:陽性細胞所占比例≤10%為1分,11%～50%為2分,51%～75%為3分,>75%為4分.兩種積分相乘總分<3分為陰性,≥3分為陽性.

1.4 統計學方法

采用SPSS 16.0統-計軟件進行數據分析.計量資料以均數±標準差()表示,計數資料以率(%)表示,組間比較采用χ2檢驗;以P<0.05為差異有統計學意義.

2 結果

2.1 GADD45 α、CXCL14蛋白表達情況的比較

胃癌組標本的GADD45α、CXCL14蛋白陽性表達率分別為71.67%、78.33%,均明顯高于對照組標本的30.00%、36.67%,差異均有統計學意義(χ2=20.839、21.313,P<0.01).(表1)

表1 兩組患者GADD45α 、CXCL14蛋白表達情況的比較[n(%)]

2.2 胃癌組織中GADD45 α、CXCL14蛋白表達情況與臨床特征的關系

TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、發生淋巴結轉移的胃癌組織的GADD45α蛋白陽性表達率均高于TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期、未發生淋巴結轉移的胃癌組織,差異均有統計學意義(χ2=6.374、4.022,P<0.05);不同腫瘤分化程度、浸潤深度的胃癌組織中GADD45α蛋白陽性表達率比較,差異均無統計學意義(P>0.05).低分化、浸潤深度為T3+T4、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期的胃癌組織的CXCL14蛋白陽性表達率均高于高中分化、浸潤深度為T1+T2、TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期的胃癌組織,差異均有統計學意義(χ2=5.881、6.000、5.279,P<0.05);是否發生淋巴結轉移的胃癌組織中CXCL14蛋白陽性表達率比較,差異無統計學意義(P>0.05).(表2)

表2 不同臨床特征胃癌組織中GADD45α 、CXCL14蛋白表達情況(n=60)

3 討論

胃癌屬于中國常見的消化道惡性腫瘤,目前發病機制尚不清楚,胃癌的發生與其他惡性腫瘤一樣,涉及多個基因的突變,是DNA損傷的結果.胃黏膜的生理位置決定了其容易受到多種因素的損傷,這可能是胃癌高發的原因,許多因素均可以引起胃黏膜及腺體細胞DNA的損傷,如電離輻射、吸煙、飲酒、環境污染、基因毒性劑等[3-4].正常的人體細胞內存在十分有效的DNA修復系統,可以修復DNA損傷,維持基因組的穩定和細胞的正常功能.一旦修復系統功能出現障礙,DNA損傷就會持續存在,錯誤信息積累會導致細胞更容易惡變[5].目前研究發現DNA修復有多種方式,這些修復方式在不同層面上起到互補的作用,共同完成修復任務.分析胃癌發生和發展過程中DNA損傷修復基因的表達情況可能有助于了解胃癌的發病機制[6].近年來有學者報道DNA損傷可以使細胞遺傳性狀發生改變,從而使細胞各種生命活動的調控機制發生紊亂,這種紊亂不斷堆積的結局是基因突變、抑癌基因失活、原癌基因激活,所以認為這是導致惡性腫瘤發生的重要原因,正常情況下DNA受損時細胞通過多種DNA修復途徑對抗損傷的發生,保持了基因組的穩定性和完整性,遏制惡性腫瘤的發生和發展[7-8].在人體內有多種基因修復方式和途徑,它們能對不同形式的DNA損傷傳遞相應的修復信號,從而啟動對應的修復途徑[9],本研究即通過觀察GADD45α、CXCL14蛋白這兩個DNA修復相關因子在胃癌患者中的表達情況,以期尋求胃癌患者治療的新途徑.

GADD45基因為生長抑制及DNA損傷誘導基因,最初從紫外線照射的細胞中分離得到,是對細胞增殖呈負性調控的應激反應基因家族,GADD45基因在細胞周期監測、DNA損傷修復、細胞凋亡以及信號轉導等方面發揮著重要的調控作用,與腫瘤發生、發展和轉歸關系密切[10].GADD45α蛋白屬于該基因家族的一種,是生長抑制及DNA損傷誘導蛋白質基因家族的成員,也是首個被發現的抑癌基因p53的下游靶基因,其表達下調是腫瘤細胞逃脫程序性死亡的必要條件,通過抑制其活性能夠抵消抑制核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)活化所引發的細胞凋亡[11-12].趨化因子是一類趨化細胞定向移動的小分子分泌蛋白,根據氨基端最初的兩個半胱氨酸的位置可以分為4類,這些趨化因子可以引起淋巴細胞的定向遷移,在胚胎發育、血管生成、炎癥、腫瘤、艾滋病等機體多種生理和病理過程中發揮重要作用.研究證實,趨化因子及其受體網絡參與腫瘤的發生及轉移,腫瘤組織中復雜的趨化因子體系影響著腫瘤細胞的生長、轉移、血管形成以及白細胞的浸潤等過程[13].CXCL14蛋白能夠趨化單核細胞、B細胞、樹突狀細胞和自然殺傷(natural killer,NK)細胞等多種免疫細胞[14];同時CXCL14也可通過減少血管平滑肌細胞趨化性及降低腫瘤微脈管系統形成從而抑制腫瘤血管形成[15].本研究顯示,胃癌組標本的GADD45α、CXCL14蛋白陽性表達率分別為71.67%、78.33%,均明顯高于對照組標本,說明GADD45α、CXCL14蛋白在胃癌患者體內呈高表達.TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、發生淋巴結轉移的胃癌組織的GADD45α蛋白陽性表達率均高于TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期、未發生淋巴結轉移的胃癌組織;低分化、浸潤深度為T3+T4、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期的胃癌組織的CXCL14蛋白陽性表達率均高于高中分化、浸潤深度為T1+T2、TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期的胃癌組織.本研究優勢在從分子水平對胃癌患者體內GADD45α、CXCL14蛋白表達情況進行了分析,提示了胃癌的發生發展過程復雜,與多種分子參與調解并影響表達水平有關,通過對兩種蛋白表達情況的檢測有助于胃癌的早期診斷及其預后的早期預測,以兩者為靶點的治療可能是胃癌治療的新途徑.但是本研究納入患者數量有限,而且對胃癌細胞學和基因學的研究還需要進一步證實.

綜上所述,胃癌組織中GADD45α、CXCL14蛋白表達上調,并且與臨床特征具有一定的關系.