EDTA-K2抗凝劑致假性血小板減少的方法

鄒小峰

摘要 目的：探討EDTA-K2抗凝劑致假性血小板減少的方法。方法：收治肛瘺患者1例，對其血小板檢驗結果異常進行探討。結果：EDTA-K2抗凝標本的血涂片15min時在顯微鏡下可看見大量的血小聚集現象。結論：血液檢測過程中使用EDTA-K2抗凝劑也會造成血小板假性降低，因此當全自動血液分析儀的血小板計數出現與臨床的診斷不相符且嚴重偏低時，檢驗人員應該及時并且積極的找出原因。

關鍵詞 EDTA-K2抗凝劑;假性;血小板減少

乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）具有對紅、白細胞形態影響極小，并可抑制血小板在體外聚集等優點，目前臨床已廣泛應用EDTA-K2抗凝劑進行血細胞計數，但會引起血小板不正常的黏附、聚集，從而導致檢測出來的血小板結果假性減少，導致對檢驗結果的錯誤理解，極易誤診，應引起注意。

資料與方法

2017年1月-2018年1月收治肛瘺患者1例，患者，男，36歲。利用SysmesXS-500i全自動血細胞分析儀做血常規檢測時血小板計數結果顯示16×10⁹/L，凝血四項正常，無任何臨床出血癥狀，瑞氏染色后鏡檢發現有血小板聚集現象。

儀器和試劑：sysmexXS-500i全自動血細胞分析儀與相關配套試劑，OLYMPUS-CX31雙目顯微鏡，EDTA-K2抗凝采血管，枸櫞酸鈉抗凝管，草酸銨稀釋液（按照《全國臨床檢驗操作規程》配制），瑞氏-吉姆薩染液。

檢測方法：①EDTA-K2抗凝：患者用EDTA-K2一次性采血管抽取靜脈血2mL充分混勻后放置15min、30min。②枸櫞酸鈉抗凝：同時為患者再用枸櫞酸鈉負壓采血管抽取靜脈血2mL（抗凝劑與血液之比1：9），在混勻后放置15min、30min。③草酸銨稀釋末梢血：抽取患者的末梢血20μL加入到0.38mL草酸銨稀釋液中，按照《全國臨床檢驗操作規程》來嚴格操作，混勻后放置15min、30min。沖入計數板人工計數。

檢測過程：利用sysmexXS-500i全自動血細胞分析儀和人工顯微鏡檢測的方法依照不同的時間段對以上各個血液樣本進行檢測分析，計數血小板數量，以上測量每份標本均采取3次測量的平均值作為最終結果。

制取血涂片染色鏡檢：同時將每例患者的血液樣本分別涂片染色，放在雙目顯微鏡下鏡檢，觀察15min、30min血小板的聚集和分布情況。

結果

血小板計數情況，見表1。

血涂片鏡檢情況：EDTA-K2抗凝標本的血涂片15min時在顯微鏡下可看見大量的血小板聚集現象，并且隨著時間的增加聚集加劇。而15min以內枸櫞酸鈉抗凝標本血小板均勻分散分布，30min時枸櫞酸鈉抗凝標本有微聚集現象。草酸銨稀釋液標本的血涂片鏡檢則在15min，30min時血小板都無明顯變化。

討論

EDTA-K2的作用：EDTA-K2抗凝劑可以和血液中的鈣離子結合成鰲合物，促使鈣離子失去原本的凝血作用，防止血液凝固。國際血液學標準化委員會（ICSH）給出的建議：EDTA-K2抗凝劑對于全血細胞的計數分析最適合，尤其適用于血小板的計數檢測[1]，它可以對血液中血細胞和血小板的聚集幾乎不產生影響。但在實際臨床使用過程中，EDTA-K2抗凝劑偶爾也會對血小板產生影響，引發血小板聚集，對血細胞分析儀的檢測產生明顯的干擾，引起血小板的假性減少。

血小板假性減少：引起血小板假性減少的原因：乙二胺四乙酸抗凝劑引起的血小板聚集，假性血小板減少發生率0.09%～0.21%[2]。有觀點認為由于乙二胺四乙酸作用于血液，使血液中出現冷抗血小板自身抗體，這種免疫介導的冷抗體直接作用于血小板膜糖蛋白Ⅱ b/Ⅲ a上，產生衛星現象，導致血小板產生互相聚集現象。另一種觀點認為EDTA-K2依賴性假性減少癥可能與血漿中存在的抗血小板抗體和/或抗心磷脂抗體等自身抗體有關，但無任何生理、病理意義，也與藥物無關，多發生于糖尿病、腫瘤、炎癥及不明原因的疾病中[3]。此外，兒科患者經常會因為采血不暢使得采血過程中血小板產生聚集和黏附性改變，而EDTA-K2抗凝劑進一步與血小板產生作用，產生更加明顯的聚集[4]。

糾正EDTA-K2誘導的血小板聚集的方法：在日常的檢測工作中，可以導致血小板聚集減少的外部因素有很多，其中，在檢測時因抗凝劑的使用、采血不當以及混勻不及時是較為常見的原因。因此在檢驗科的日常工作中，常常會遇到血小板檢驗結果與真實結果不符合的情況，需盡量杜絕由于采集標本時人為操作不正確引起血小板聚集導致的血小板假性減少。當采集血液標本嚴格按規程進行而又無任何臨床出血癥狀，數值<50×10⁹/L的時候，檢驗人員要予以重視，要認真查找造成這種結果的原因。可以采用枸櫞酸鈉抗凝劑進行對比，也可以用草酸銨末梢稀釋血手工計數血小板，同時加做血涂片鏡檢觀察其血小板的分布和聚集狀況，以佐證檢驗結果的符合性[5]。

通過以上研究可以發現，血液檢測過程中使用EDTA-K2抗凝劑也會造成血小板假性降低，因此當全自動血液分析的血小板計數出現與臨床診斷不相符的嚴重偏低時，檢驗人員應該及時并且積極地找出原因，要把POCT方面的因素考慮在內。具體可以通過更換抗凝劑，或是采取人工計數法，以及血涂片染色鏡檢綜合分析判斷血小板計數減少的“真假”，從而保證檢驗結果的準確性。對于類似的問題，檢驗人員要保持高度的責任感，不能輕易通過審核，避免因抗凝劑的緣故引起結果假性偏低，而出具給臨床醫生和患者不真實的報告單。

通過對上述情況的分析，說明要想成為一名合格的檢驗工作者，需做好以下4點：①時刻保持一顆嚴謹的心態，在遇到異常結果時，特別是與臨床明顯不符合時要多加思考，不能僅憑當日的質控符合要求草率通過審核而發出不真實的報告。②作為檢驗人員，需要積極與臨床醫生溝通，通過溝通幫助我們詳細了解實際情況，有助于找到分析的思路。③做好自身的實踐知識儲備，全面系統了解各個項目的檢測原理和干擾因素，在實踐中不斷學習和總結。④高度的責任心放在工作首位。

參考文獻

[1]劉俊閃.EDTA-K2抗凝劑致血小板假性減少現象及糾正方法的分析[J].臨床醫藥文獻電子雜志，2015，3（2）：1442.

[2]陳言偉，張一民，董娟.EDTA-K2依賴性血小板減少癥1例分析[J].中國誤診學雜志，2011，11（4）：849.

[3]李艷，孫家祥.EDTA-K2抗凝劑致血小板假性減少的原因及糾正方法探討[J].海南醫學，2013，24（21）：3187-3189.

[4]劉君，劉紫云.10例EDTA-K2抗凝致假性血小板減少分析[J].寧夏醫科大學學報，2011，12（33）：1212-1213.

[5]朱建奎，張春玲，薛健.抗凝劑EDTA-K2導致血小板假性減少原因分析[J].吉林醫學，2010，31（33）：6018.