黔東南州豬肉中四環素類藥物殘留的風險評估

王安波，孫思，楊梅，劉文鋒，汪儉

（黔東南州農產品質量安全檢測中心，貴州凱里556000）

四環素類藥物（tetracyclines，TCs）為廣譜抑菌劑，對革蘭氏陰性菌、陽性菌及螺旋體等均有較強的抑制作用，被大量應用于畜禽養殖中。若短時間內大量攝入TCs，會引起人體急性中毒，若長期攝入TCs殘留超標的產品，TCs會在體內不斷蓄積，當藥物濃度達到一定量時，人體會慢性中毒或多種器官發生病變[1]。美國、歐盟及我國均規定了畜產品中四環素類藥物的最大殘留限量為100 μg/kg[2]。常用檢測方法有：GB 21317-2007《動物源性食品中四環素類獸藥殘留量檢測方法液相色譜-質譜/質譜法與高效液相色譜法》、農業部1025號公告-12-2008《雞肉、豬肉中四環素類藥物殘留檢測液相色譜-串聯質譜法》。

豬肉是我國消費量最大的肉類產品，獸藥殘留是影響其安全性的重要因素之一。造成獸藥殘留超標的根本原因是生豬養殖長期以農戶散養和小規模豬場為主，存在技術落后、安全意識薄弱、用藥不規范、不遵守休藥期等問題[3]。目前關于豬肉中TCs殘留的研究著重于開發檢測方法，且已有的研究僅對研究區域豬肉中TCs殘留的水平進行描述，缺乏對豬肉中TCs殘留的風險進行評估和分析[4]。因此本研究選擇黔東南州4個市縣為研究區域，隨機采集200份樣品，通過檢測樣本中土霉素、金霉素、四環素殘留量來評價黔東南州豬肉產品中TCs獸藥的殘留水平及風險水平，為正確引導消費和科學監管提供數據支撐和科學依據。

1 材料

1.1 材料來源

2017年1月～12月共選擇17個養殖企業及8個養殖大戶共25個采樣地點進行豬肉的采集，每6個月進行一次取樣監測，選擇黔東南州凱里市、黃平縣、三穗縣、臺江縣 4 地作為采樣區域，（500±1）g，共 200 份。

1.2 主要試劑及儀器

1.2.1 主要試劑

甲醇、乙腈（色譜純）：美國TEDIA公司；檸檬酸、乙二胺四乙酸二鈉、甲酸、磷酸氫二鈉（分析純）：天津市廣成化學試劑有限公司；實驗室用水為一級水。

1.2.2 儀器

超高效液相色譜-串聯質譜儀（H-Class/TQ-S Micro）：美國 Waters公司；百分之一天平（PL2002）：瑞士梅特勒-托利多公司；旋渦混合器（Lab Dancer）：德國IKA公司；高速冷凍離心機（H2050R）：德國Biofuge公司生產；純水/超純水一體機（Option Q15）：上海威立雅水處理技術有限公司。

2 方法

2.1 樣品的前處理與檢測方法

樣品的前處理按照農業部1025號公告-12-2008《雞肉、豬肉中四環素類藥物殘留檢測液相色譜-串聯質譜法》對待測樣品進行萃取和凈化。采用超高效液相色譜-串聯質譜儀法進行檢測。

2.1.1 儀器條件

色譜條件：色譜柱為ACQUITY UPLC HSS T3 2.1×10 mm，1.8 μm，流動相：A為0.1%甲酸水溶液；B 為乙腈，柱溫為20℃，流速為0.3 mL/min。進樣量為2 μL，洗脫梯度見表1。

表1 四環素類藥物的洗脫梯度Table 1 The gradient elution of tetracyclines

2.1.2 最低檢測限與最低定量限

向空白樣品中添加標準溶液確定最低檢出限和最低定量限。性噪比S/N＞3者定為方法檢測限，性噪比S/N＞10者定為方法定量限[5]。

2.1.3 線性關系的考察

精密吸取10 μg/mL工作儲備液用流動相分別稀釋至 5、10、50、100、200 ng/mL 作為混合標準工作液。以標準溶液濃度為橫坐標，對應峰面積為縱坐標繪制標準曲線，計算回歸方程和相關系數。

2.1.4 準確度與精密度

向空白樣品中分別添加 50、100、200 μg/kg 3 個不同濃度水平的標準溶液，各濃度進行6個試驗平行，重復3次，按上述條件進行測定，計算回收率及相對標準偏差，以此考察本試驗的精密度與準確度。

2.1.5 豬肉中3種四環素類藥物殘留檢測

2017年1月～12月在貴州省黔東南州境內4個區域：17個養殖企業及8個養殖大戶每6個月進行一次取樣監測，選擇黔東南州凱里市、黃平縣、三穗縣、臺江縣4地作為采樣區域隨機采集的200份豬肉樣品。經上述前處理方法后，采用超高效液相色譜-串聯質譜法進行檢測。

2.2 風險評估

本文采用食品安全指數（international foundation for science，IFS）對豬肉中3種四環素類獸藥的殘留風險進行評估，計算公式[4]：IFS=（R×F）/（SI×bw）。式中：IFS為食品安全指數；R為豬肉樣品中獸藥藥物殘留的濃度（μg/kg）；F 為人們每日豬肉消費量（kg/人×1/d）。根據中國肉類協會2015年的統計數據顯示，2014年中國人均豬肉消費量為41.5 kg，因此，本文中F值按0.1 kg/人×1/d 計算（41.5/365=0.114 kg）；SI為各藥物的每日允許攝入量（allowable daily intake，ADI）值，土霉素為3 μg/（kg·d）[6]；bw為人體平均體重kg，本文按60 kg計算。

IFS小于1表示所檢測的四環素類藥物對人們的健康造成的危害效應并不明顯，所檢測的四環素類藥物殘留對人們健康的風險是可以接受的；IFS遠小于1（IFS＜0.01）表示所檢測獸藥藥物對人們的健康不會造成危害效應，安全狀態可以接受；IFS大于1表示檢測的獸藥藥物對人們健康的風險超出了可接受的限度，所檢測的獸藥藥物對人們的健康造成的危害效應是明顯的，出現這種情況就應該進入風險管理程序[3]。

3 結果與分析

3.1 標準曲線和線性范圍

在選定的色譜條件下，將配制好的5 ng/mL～200 ng/mL混合標準工作液進行測定，所得藥物濃度在5 ng/mL～200 ng/mL范圍內與其色譜峰面積呈線性關系，見表2。

表2 四環素類藥物的回歸方程和相關系數Table 2 The regression equations and correlation coefficients of tetracyclines

由表2可知，其線性范圍滿足測定要求，該方法穩定、可靠。

3.2 檢測限與定量限

在上述方法操作條件下，根據2.1.2所述理論測得3種四環素類在豬肉中的檢出限為2 μg/kg，定量限為8 μg/kg。

3.3 準確度和精密度

向空白樣品中添加3個不同濃度四環素類藥物進行回收率試驗，見表3，可以看出3種平均回收率（n=6）為75.6%～86.1%，RSD為2.5%～3.5%。

表3 豬肉中添加四環素類藥物回收率和精確度Table 3 The recovery results of positive sample

3.4 豬肉中四環素類藥物殘留現狀

豬肉中獸藥藥物的殘留水平見表4。

表4 黔東南州豬肉產品中四環素類獸藥的殘留水平Table 4 Residual levels of tetracyclines in the pork products of qiandongnan prefecture

如表4所示，豬肉產品中檢出土霉素4份，檢出率為2.00%，金霉素、四環素均未檢出。土霉素檢出殘留濃度為 5.47 μg/kg～8.21 μg/kg，均值為 6.84 μg/kg 未超過國家規定的最高殘留限量（100 μg/kg）。

3.5 豬肉產品中獸藥藥物殘留的風險評估

黔東南州豬肉產品中四環素類藥物殘留的每日膳食暴露量及食品安全指數如表5所示。

表5 四環素類藥物的每日膳食暴露量及食品安全指數Table 5 The daily meal exposure of tetracyclines in the pork products of qiandongnan prefecture

通過應用食品安全指數的計算公式對豬肉產品中四環素類藥物進行風險評估，黔東南州豬肉產品中四環素類藥物死亡的每日暴露量均值為1.13×10-2μg/kg bw×1/d，最大值為 1.37×10-2μg/kg bw×1/d，最小值為0.91×10-2μg/kg bw×1/d，均低于最大允許攝入量3 μg/kg bw×1/d[6]；黔東南州豬肉中四環素類藥物殘留的食品安全指數均值為0.06×10-3，最小值為0.05×10-3，最大值為0.08×10-3，遠遠低于1。這表明黔東南州豬肉樣品中四環素類藥物的殘留對人體的潛在危害水平是可以接受的，不會對人群產生不良作用，相關部門不必進入風險管理程序。

4 討論

隨著我國畜牧業的快速發展，抗生素的廣泛的使用和普及為畜牧業的發展做出了重要的貢獻。但是四環素類藥物的濫用所造成的過量殘留問題，對人體健康構成極大的威脅。四環素類藥物的殘留問題已經成為了影響畜產品質量安全的最主要因素，亦是社會各界和各級政府關注的焦點[7]。因此，畜產品中四環素類藥物殘留的風險評估已成為當務之急。

未檢出四環素和金霉素，抽檢的四個市縣中均有土霉素檢出：黃平縣2份，三穗縣1份，臺江縣1份。檢出率為2.00%，且所減測出的獸藥殘留濃度范圍為5.47 μg/kg～8.21 μg/kg，均未超過國家規定的最大殘留限量，與其他地區相比黔東南州豬肉產品中四環素類藥物的殘留水平不高[8-9]。

IFS是用來評價食品中某種危害物對消費者健康影響的指數，通過計算其結果可以評估食用該食品后對人體安全狀態的影響，從而指導相關部門采取相應措施，降低風險[10]。本研究中，土霉素食品安全指數均值為 0.06×10-3，最小值為 0.05×10-3，最大值為 0.08×10-3，遠遠低于1。表明黔東南州豬肉產品中土霉素殘留對人體的健康不會造成危害，是能夠接受的。

結果說明，黔東南州內豬肉產品中四環素類獸藥的殘留問題較小。豬肉中有土霉素藥物殘留的檢出，說明土霉素是黔東南州豬肉產品中四環素殘留的最主要的獸藥，雖然其殘留濃度沒有超過國家規定的最大殘留限量，也不會對人體健康造成危害，但仍是影響豬肉產品質量安全的隱患因子[11]。因此，仍然需要引起政府足夠的重視，加強對生豬養殖中土霉素的監管力度，降低此藥物對黔東南州豬肉產品質量安全影響的風險水平，確保豬肉產品質量安全。