丙肝病毒核心抗原檢測在丙肝患者診斷中的應(yīng)用

古國寧 蔣小藝 張宏佳

丙型肝炎是一種臨床常見病, 其臨床特征接近于乙型肝炎, 但癥狀相對較輕, 與乙型肝炎相比, 丙型肝炎更容易出現(xiàn)肝硬化, 發(fā)展成為肝癌的幾率更大, 因此丙肝病毒的變異性較高, 所以丙肝疫苗在短期內(nèi)無法取得突破性的進(jìn)展, 患者預(yù)后普遍較差, 及早的對患者病情做出診斷, 對于改善患者預(yù)后, 降低死亡率具有重大影響［1,2］。現(xiàn)臨床上多用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法對HCV-Ab進(jìn)行檢測, 由于抗體出現(xiàn)的較晚, 存在窗口期, 在一定程度上會影響早期丙肝患者的診斷, 從而失去早期治療的時機(jī), HCV-cAg檢測丙肝的病原體, 與HCV-Ab檢測比較, 能更早的檢測出丙型肝炎。鑒于上述研究背景, 本文選擇2015年6月～2018年6月本院收治的HCV-Ab陽性感染患者55例以及同期門診體檢的HCV-Ab陰性高危者55例進(jìn)行HCV-cAg檢測研究, 現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 在醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)下開展本研究, 選擇2015年6月~2018年6月本院收治的HCV-Ab陽性感染的住院患者55例作為HCV-Ab(+)組, 同期門診體檢谷丙轉(zhuǎn)氨酶>200 U/L的HCV-Ab陰性高危者55例作為HCV-Ab(-)組。HCV-Ab(+)組女23例, 男32例；年齡36~62歲, 平均年齡(49.26±6.23)歲；體質(zhì)量指數(shù)18~26 kg/m2, 平均體質(zhì)量指數(shù)(22.14±2.05)kg/m2。HCV-Ab(-)組女21例 , 男 34例；年齡38~60歲, 平均年齡(49.14±6.14)歲；體質(zhì)量指數(shù)19~26 kg/m2,平均體質(zhì)量指數(shù)(22.04±2.14)kg/m2。兩組性別、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①自愿參加本次研究者；②年齡>18周歲者；③患者于研究前均知情, 并對知情同意書閱讀簽字者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他器質(zhì)性疾病者；②合并心力衰竭、惡性腫瘤者；③存在精神疾病、聽語障礙者；④配合度、依從性較差者；⑤存在凝血功能障礙、血液疾病者。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本處理 抽取所有研究對象空腹靜脈血5 ml, 離心處理, 速率是3000 r/min, 離心時間5 min, 分離血清, 保存在-20℃的冰箱中, 標(biāo)本確保僅凍融1次。

1.2.2 HCV-cAg檢測 采用ELISA法對HCV-cAg進(jìn)行定性分析, 采用儀器為深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司的RT-6100型的酶標(biāo)儀, HCV-cAg測定試劑盒由湖南景達(dá)生物工程有限公司提供。嚴(yán)格按照對應(yīng)說明書進(jìn)行操作, 最終在酶標(biāo)儀上用單波長450 nm讀取各孔的吸光度值(A值), 以檢測樣本的A值≥臨界值(C.O.)為檢測陽性, 檢測樣本的A值<臨界值(C.O.)為檢測陰性。

1.2.3 HCV-RNA檢測 采用核酸擴(kuò)增法對HCV-RNA進(jìn)行測定, 儀器為美國Applied Biosystems公司的 7500型實(shí)時熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)分析儀, 試劑為上海科華生物工程股份有限公司的丙型肝炎病毒核酶測定試劑盒(PCR-熒光探針法), 嚴(yán)格按照對應(yīng)說明書進(jìn)行操作。對本研究中的兩組標(biāo)本均采用核酸擴(kuò)增法檢測HCV-RNA載量來進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。以1000 copies/ml為敏感線, >1000 copies/ml為陽性。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩組HCV-cAg檢測結(jié)果, 分析HCV-cAg與HCV-RNA檢測結(jié)果符合情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組HCV-cAg檢測結(jié)果比較 HCV-Ab(+)組HCV-cAg檢出陽性率為83.64%(46/55), 高于HCV-Ab(-)組的5.45%(3/55), 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組HCV-cAg檢測結(jié)果比較(n)

2.2 HCV-cAg與HCV-RNA檢測結(jié)果符合情況 HCV-Ab(+)組中HCV-cAg陽性患者46例, HCV-Ab(-)組中HCV-cAg陽性患者3例, 共49例。HCV-cAg與HCV-RNA的檢測結(jié)果陽性符合率為94.00%(47/50), 陰性符合率為96.67%(58/60),總符合率為95.45%(105/110)。見表2。

表2 HCV-cAg與HCV-RNA檢測結(jié)果符合情況(n)

3 討論

當(dāng)前, 臨床普遍認(rèn)為丙肝與肝癌、肝硬化的發(fā)生有著極為密切的聯(lián)系, 丙肝患者機(jī)體中HCV復(fù)制活躍, 具有較強(qiáng)的傳染性, HCV可以通過密切接觸、靜脈吸毒、輸血等方式傳播, 一般HCV感染是持續(xù)性的終生感染, 將近20%的HCV感染患者在10～20年后會發(fā)展成為肝硬化, 10年內(nèi)的生存率較低, 因此HCV復(fù)制活躍的患者, 應(yīng)及早的進(jìn)行抗病毒治療,最大限度延緩疾病發(fā)展［3,4］。HCV感染早期臨床癥狀較輕,極易被患者忽視, 往往會導(dǎo)致疾病錯過最佳的治療時機(jī)。當(dāng)前臨床診斷肝炎病毒的常用方法有HCV-RNA、丙肝病毒重組免疫印跡法(HCV-RIBA), 但是上述檢測方法對實(shí)驗(yàn)室要求嚴(yán)格, 且操作步驟復(fù)雜, 成本較高, 具有一定的局限性, 在基層醫(yī)院根本無法開展。

人體感染了HCV要經(jīng)歷窗口期, 一般HCV-Ab在HCV感染后的2～6個月內(nèi)才能檢出, 而在感染HCV后的14～35 d,就可檢出HCV-cAg［5,6］。HCV-cAg是HCV早期感染的重要標(biāo)志, 一般是與HCV-RNA同時出現(xiàn), 感染后的14～70 d是檢測HCV-cAg的最佳時段［7］。HCV-cAg檢測操作方便、價格低廉、對實(shí)驗(yàn)室要求較低, 明顯縮短了檢測的窗口期, 對于早期診斷患者疾病, 反映HCV復(fù)制情況具有一定的積極意義。本文研究示：HCV-Ab(+)組HCV-cAg檢出陽性率為83.64%(46/55), 高于HCV-Ab(-)組的5.45%(3/55), 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HCV-cAg試劑盒的檢測結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)HCV-RAN的檢測結(jié)果的陽性符合率為94.0%(47/50), 陰性符合率為96.67%(58/60), 總符合率為95.45%(105/110)。證實(shí)了HCV-cAg檢測在丙肝患者疾病診斷中的可行性、有效性、及可靠性性, 值得作為丙肝患者首選的病情檢測方法, 在臨床中借鑒、參考價值較高。但是本文仍舊存在一定的不足,例如樣本研究容量較小, 研究時限過短等, 對結(jié)果一般性有所影響, 因此對于HCV-cAg檢測在丙肝診斷中的應(yīng)用價值,仍舊需要臨床進(jìn)一步擴(kuò)大樣本研究容量, 延長研究時段, 開展大量多中心、前瞻性、大規(guī)模的隨機(jī)試驗(yàn)加以驗(yàn)證。

綜上所述, 丙肝患者采納HCV-cAg檢測, 可為臨床醫(yī)師診斷丙肝患者提供一定的參考依據(jù), 與HCV-RAN的總檢出符合率高, 能盡早診斷丙型肝炎患者, 盡可能避免患者錯過最佳的治療時機(jī), 臨床應(yīng)用價值較高, 值得信賴并進(jìn)一步推廣。