酶聯免疫吸附法和電化學發光免疫法檢測血清HBsAg結果的比較

劉麗娜，高 陽

［作者單位］451100河南新鄭，新鄭市人民醫院檢驗科（劉麗娜，高陽）

乙型肝炎病毒（hepatitis Bvirus，HBV）感染率較高，感染后該病毒持續復制導致疾病遷徙、容易反復且難以治愈，最終發展成為肝硬化、肝衰竭，HBV已經嚴重危害人類健康［1］。合理的使用抗病毒藥物是治療HBV感染的主要手段［2］。目前檢測肝組織內cccDNA是判斷抗HBV療效及患者預后的金標準，但該檢測屬于有創檢測，對患者的損傷較大，在臨床上普及較困難［3］。有研究表明，血清HBsAg作為肝內cccDNA血清學的替代指標，血清HBsAg水平的變化貫穿在整個病程中，準確地檢測血清HBsAg水平的變化可以預測疾病進展、觀察治療效果［4］。酶聯免疫吸附法（ELISA）和電化學發光免疫法（CLIA）是常用的血清HBsAg水平檢測方法，在臨床上均被廣泛應用，為了解兩種檢測方法的優缺點，現將兩種檢測方法的準確性、精密度和靈敏度進行比較，報告如下。

1 資料與方法

1.1 血清標本 由衛生部臨檢中心提供標準血清盤50份，其中陽性標本30份，陰性標本20份，陽性率為60%。由北京中科質檢生物技術有限公司提供HBsAg血清（液體）標準物質，濃度為2IU/ml和1IU/ml兩種規格，產品編號分別為GBW（E）090071（GY-004）和 GBW（E）090071（GY-003）。

1.2 試劑與儀器 ELISA法使用安圖PHOMO酶標儀，HBsAg使用上海科華試劑盒，CLIA法檢測儀器為德國羅氏E411全自動電化學發光儀，試劑與該儀器配套。

1.3 測定方法 （1）分別使用ELISA法和CLIA法對HBsAg標準血清盤進行HBsAg檢測，每次檢測均行內部質控，計算兩種方法陽性檢出率，與標準血清陽性率做對比。（2）將HBsAg血清（液體）標準物質（2 IU/ml、1 IU/ml）分裝 20 份，10 份冷凍保存每天監測一次，進行批間重復性試驗；另外10份同批檢測，進行批內重復性試驗。（3）將HBsAg血清（液體）標準物質（1 IU/ml）按倍比稀釋（1.0、0.5、0.25、0.125、0.063、0.032），將稀 釋 后 的 標 本 分 別 使 用ELISA法和CLIA法檢測，檢測重復5次，平均值作為檢測結果，將能測出的最低濃度作為檢出限。

1.4 統計學方法 選用SPSS 22.0進行分析，計數資料組間采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 準確性比較 ELISA法和CLIA法檢測陽性率均為65%，與標準血清盤提供情況相符，差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.2 精密度比較 CLIA法批內CV值、批間CV值均小于ELISA法，差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 ELISA法和CLIA法檢測HBsAg的變異系數值比較（%）

2.3 靈敏度比較 ELISA法在0.5 IU/ml時為陽性，0.25 IU/ml時為陰性，即ELISA法檢出限為0.5 IU/ml；CLIA 法 0.063 IU/ml為陽性，在 0.032 IU/ml為陰性，CLIA法檢出限為0.063 IU/ml。CLIA法檢出限低于ELISA法。見表2。

表2 ELISA法和CLIA法檢測HBsAg靈敏度比較（IU/ml）

3 討論

我國是HBV感染高流行區，約有1.2億人攜帶HBV，在HBV攜帶者中約有25%患者發展為慢性肝病，最終惡化成肝硬化甚至肝癌，該病毒通過血液、體液傳播，傳播范圍廣，嚴重影響人們的生活［5］。隨著現代醫學的發展，許多藥物對抑制HBV的復制、減輕肝臟炎癥、控制疾病有很好的作用，可以阻止疾病進展，減輕感染HBV對生活帶來的影響［6］。HBsAg的出現常伴隨HBV病毒的存在，對HBsAg檢測可以反映體內HBV病毒復制的情況，其檢測方式分為定性及定量兩種方式［7］。定性檢測可判斷是否有HBV病毒感染，定量檢測對于判斷治療效果、確定治療方案及治療時間有重要指導價值。目前定量檢測在臨床上的作用越來越受重視，血清HBsAg水平可以作為HBV攜帶者觀察病情變化的指標。

ELISA法是將酶標記物作為檢測的指示物，通過以抗原和抗體的結合發生特異性結合反應為基礎的研究［8］。HBV病毒的抗原抗體復合物與酶標記物結合后，通過酶的催化作用，使含量較少的抗原或抗體能在短時間內被標識出來。該方法作為一種傳統方法，具有價格便宜操作簡便的優點，在我國HBV病毒感染篩查中被廣泛應用。但由于該操作流程較多，每步的操作都會影響最終的結果，ELISA法在樣本濃度過高或過低時會出現假陰性的現象，在臨床應用中發現同一份標本在不同的實驗室中測出不同結果，甚至在同一實驗室中不同時間點不同人操作也會出現不一樣的結果。這也降低了檢測結果的可信度，給患者和臨床醫務人員帶來了不必要的麻煩。CLIA法是將免疫技術與電化學檢測結合到一起的一種免疫分析方法，這種方法是以化學發光物質作為標記物，利用抗原和抗體免疫前后電化學發光信號的改變進行的［9］。CLIA法利用電化學引發的特異性發光技術在電極表面的作用，提高了檢測的靈敏度和線性范圍，且該檢測過程極大地降低了交叉污染，具有靈敏度高、特異性強的優點，在醫學方面有廣泛的應用前景。

該研究中，ELISA法和CLIA法在血清HBsAg檢測陽性率方面無統計學差異（P＞0.05），與殷蓓琦等［10］CLIA法陽性檢測率高于ELISA法的結果不符，這可能與該研究樣本量較小、血清HBsAg濃度分布不均有關。另外ELISA法平均批內CV為8.64%，批間CV為16.39%；CLIA法平均批內CV為1.62%，批間CV為5.21%，這說明CLIA法比ELISA法精密度好，這與韓春俐等［11］將ELISA法和CLIA法用于檢測HIV病毒的研究結果一致。研究結果顯示CLIA法的檢出限低于ELISA法，即CLIA法的靈敏度更高，在低濃度的樣本測定中優勢明顯，熊海燕等［12］使用兩種方法檢測孕婦乙肝表面抗原的研究結果也與該研究觀點一致。