三聯(lián)檢測(cè)法對(duì)低原始細(xì)胞MDS與HA的鑒別診斷價(jià)值

蔣比芬

[摘要] 目的 探討骨髓細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞化學(xué)染色及骨髓活檢切片三聯(lián)檢測(cè)法對(duì)低原始細(xì)胞骨髓增生異常綜合征與溶血性貧血的鑒別診斷價(jià)值。 方法 將2015年1月～2018年1月我院接診的77例確診為骨髓髓系原始細(xì)胞<5%的MDS患者納入本研究，作為MDS組。選取溶血性貧血（HA）患者50例作為HA組。進(jìn)行骨髓細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞化學(xué)染色、骨髓活檢細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)。觀察核型異常及分子生物學(xué)異常檢測(cè)結(jié)果、骨髓原始細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅系比例、 粒系病態(tài)造血、紅系病態(tài)造血、巨核系病態(tài)造血情況、內(nèi)鐵陽性水平、鐵顆粒數(shù)、環(huán)鐵粒幼紅細(xì)胞陽性率、骨髓活檢切片檢測(cè)結(jié)果，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行聯(lián)合分析。 結(jié)果 MDS組核型異常、分子生物學(xué)異常檢出率高于HA組（P<0.05）；MDS組、HA組骨髓原始細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅系比例對(duì)比，P>0.05；MDS組、HA組粒系病態(tài)造血、紅系病態(tài)造血異常檢出率對(duì)比，P>0.05；MDS組巨核系病態(tài)造血異常檢出率高于HA組（P<0.05）。MDS組、HA組內(nèi)鐵陽性水平、鐵顆粒數(shù)對(duì)比，P>0.05。MDS組環(huán)鐵粒幼紅細(xì)胞陽性檢出率高于HA組（χ2=19.659，P<0.05）。MDS組幼稚前體細(xì)胞異常定位（abnormal localization of immature precursors，ALIP）、巨核病態(tài)造血檢出率高于HA組（P<0.05）。聯(lián)合檢測(cè)檢出率為89.61%。 結(jié)論 骨髓細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞化學(xué)染色及骨髓活檢切片三聯(lián)檢測(cè)法能夠提高低原始細(xì)胞骨髓增生異常綜合征檢出率，輔助臨床診治。

[關(guān)鍵詞] 骨髓細(xì)胞形態(tài)；細(xì)胞化學(xué)染色；骨髓活檢切片；低原始細(xì)胞骨髓增生異常綜合征；溶血性貧血；鑒別

[中圖分類號(hào)] R551.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2018）26-0116-04

The differential diagnosis value of triple detection method for low primordial cells MDS and HA

JIANG Bifen

Department of Clinical Laboratory， Zhaotong First People's Hospital in Yunnan Province， Zhaotong 657000， China

[Abstract] Objective To investigate the differential diagnosis value of bone marrow cell morphology， cytochemical staining and bone marrow biopsy slice for low myogenic myelodysplastic syndrome and hemolytic anemia. Methods 77 MDS patients with bone marrow myeloid blasts <5% admitted in our hospital from January 2015 to January 2018 were enrolled in this study as the MDS group. 50 patients with hemolytic anemia（HA） were selected as the HA group. The bone marrow cell morphology， cytochemical staining， and bone marrow biopsy cytochemical staining were performed. The test results of karyotypic abnormalities and molecular biological abnormalities， bone marrow blast count，erythroid ratio，granulocyte pathogenic hematopoiesis， erythroid pathological hematopoiesis，megakaryocytic hematopoiesis， intra-iron positive level， iron particles， and ring iron red blood cell positive rate， and the results of bone marrow biopsy slide were observed. And the results were analyzed jointly. Results The abnormality rate of karyotype and molecular biological abnormality in MDS group was higher than that in HA group（P<0.05）. There was no significant difference in the ratio of bone marrow blast cell count and red line ratio in MDS group and HA group（P>0.05）.There was no significant difference in detection rate of morbid hematopoiesis and erythroid pathological hematopoietic abnormalities between MDS group and HA group（P>0.05）. The detection rate of morbid hematopoietic abnormalities in MDS group was higher than that in HA group（P<0.05）. There was no significant difference in iron positive level and the number of iron particles between the MDS group and the HA group（P>0.05）. The positive rate of ring iron red blood cells in the MDS group was higher than that in the HA group （χ2=19.659， P<0.05）. The detection rates of abnormal localization of immature precursors （ALIP） and megakaryocytic hematopoiesis were higher in the MDS group than those in the HA group（P<0.05）. The combined detection rate was 89.61%. Conclusion The triple detection of bone marrow cell morphology， cytochemical staining and bone marrow biopsy can improve the detection rate of low-primary myelodysplastic syndrome and assist clinical diagnosis and treatment.

[Key words] Bone marrow cell morphology； Cytochemical staining； Bone marrow biopsy slice； Low primordial myelodysplastic syndrome； Hemolytic anemia； Identification

骨髓增生異常綜合征（myelodysplastic syndrome，MDS）是一類造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病，患者主要表現(xiàn)為難治性全血細(xì)胞減少情況[1]。臨床診斷MDS主要是通過骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)，輔助核型檢測(cè)，得到診斷結(jié)果，但低原始細(xì)胞MDS核型輔助檢測(cè)效果欠佳，而且容易和溶血性貧血混淆，發(fā)生誤診[2-4]。為提高低原始細(xì)胞MDS的診斷準(zhǔn)確性，我院開展了骨髓細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞化學(xué)染色及骨髓活檢切片三聯(lián)檢測(cè)法在該診斷方面的應(yīng)用，探討其診斷效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2015年1月～2018年1月我院接診的77例確診為骨髓髓系原始細(xì)胞<5%的MDS患者納入本研究，作為MDS組。選取溶血性貧血（Hemolytic anemia，HA）患者50例作為HA組。MDS組：男40例，女37例，年齡19～70歲，平均（48.15±6.33）歲；血紅蛋白（haemoglobin，Hb）水平（74.84±15.36）g/L，白細(xì)胞（white blood cell，WBC）水平為（4.44±1.08）×109/L；Plt水平為（88.29±25.37）×109/L。HA組：男27例，女23例，年齡21～70歲，平均（48.96±7.15）歲；Hb水平（75.98±17.24）g/L，WBC水平為（4.79±1.22）×109/L；Plt水平為（194.18±38.78）×109/L。兩組患者的基線資料水平對(duì)比，性別分布、年齡分布、Hb水平、WBC水平對(duì)比，P>0.05；Plt水平對(duì)比，P<0.05。

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合WHO分類診斷標(biāo)準(zhǔn)，確診為MDS；知情同意，簽署知情同意協(xié)議書；不明原因的肝、脾、淋巴結(jié)腫大；不明原因的發(fā)熱、骨痛。

排除標(biāo)準(zhǔn)：明顯出血傾向的患者；晚期孕婦；小兒及難合作者；穿刺部位有炎癥或畸形。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 骨髓細(xì)胞形態(tài) 細(xì)胞遺傳學(xué)分析：取患者骨髓液5 mL，經(jīng)肝素抗凝后，培養(yǎng)24 h以上，獲得中期分裂細(xì)胞，進(jìn)行核型分析，每位患者分析20個(gè)分裂相。

分子生物學(xué)分析：取患者EDTA抗凝骨髓液3 mL，提取骨髓標(biāo)本中的RNA。反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增，完成分子生物學(xué)分析。

骨髓形態(tài)學(xué)分析[5]：油鏡下計(jì)數(shù)，觀察每個(gè)標(biāo)本的骨髓涂片細(xì)胞250個(gè)，其中，髓系細(xì)胞比例指的是骨髓中髓系原始細(xì)胞250個(gè)有核細(xì)胞中的比例，紅系比例指的是骨髓中有核紅細(xì)胞在250個(gè)有核細(xì)胞中的比例。

1.2.2 細(xì)胞化學(xué)染色 細(xì)胞化學(xué)染色[6]：骨髓內(nèi)鐵染色，將骨髓片置于甲醛蒸汽中固定3 min，然后把濃度為40 g/L的亞鐵氰化鉀和4%的鹽酸等體積混合，加熱至56℃；把骨髓片放入其中，保留30 min，取出骨髓片，流水沖洗，堿性復(fù)紅應(yīng)用液復(fù)染5 min，蒸餾水沖洗，空氣中自然晾干，鏡檢。鐵可染色為藍(lán)色顆粒表明陽性。

1.2.3 骨髓活檢細(xì)胞化學(xué)染色 取活組織塊，大小約2 mm×15 mm，經(jīng)Bouin氏液固定，時(shí)間為1 h，然后酒精梯度洗脫，包埋劑包埋，切片3 μm厚，經(jīng)蘇木素-吉姆薩-酸性品紅染色[7]。油鏡下觀察。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察核型異常及分子生物學(xué)異常檢測(cè)結(jié)果、骨髓原始細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅系比例、粒系病態(tài)造血、紅系病態(tài)造血、巨核系病態(tài)造血情況、內(nèi)鐵陽性水平、鐵顆粒數(shù)、環(huán)鐵粒幼紅細(xì)胞陽性率、骨髓活檢切片檢測(cè)結(jié)果，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行聯(lián)合分析。

分子生物學(xué)異常評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：和既定引物序列不匹配或不完全匹配表明分子生物學(xué)異常，即無擴(kuò)增產(chǎn)物或擴(kuò)增產(chǎn)物和理論結(jié)果明顯異常。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，檢出率為計(jì)數(shù)資料，以百分率表示，組間比較用χ2檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)水平為計(jì)量資料，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 核型異常及分子生物學(xué)異常檢測(cè)結(jié)果比較

MDS組核型異常、分子生物學(xué)異常檢出率高于HA組（P<0.05）。見表1。

2.2 骨髓原始細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅系比例比較

MDS組、HA組骨髓原始細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅系比例對(duì)比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

2.3 粒系病態(tài)造血、紅系病態(tài)造血、巨核系病態(tài)造血情況比較

MDS組、HA組粒系病態(tài)造血、紅系病態(tài)造血異常檢出率對(duì)比，P>0.05；MDS組巨核系病態(tài)造血異常檢出率高于HA組（P<0.05）。見表3。

2.4 內(nèi)鐵陽性水平、鐵顆粒數(shù)比較

MDS組、HA組內(nèi)鐵陽性水平、鐵顆粒數(shù)對(duì)比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表4。

2.5 環(huán)鐵粒幼紅細(xì)胞陽性率比較

MDS組環(huán)鐵粒幼紅細(xì)胞陽性檢出30例，陽性率為38.96%，HA組環(huán)鐵粒幼紅細(xì)胞陽性檢出2例，陽性率為2.60%。MDS組環(huán)鐵粒幼紅細(xì)胞陽性檢出率高于HA組（χ2=19.659，P<0.05）。

2.6 骨髓活檢切片檢測(cè)結(jié)果比較

MDS組幼稚前體細(xì)胞異常定位（abnormal localization of immature precursors，ALIP）、巨核病態(tài)造血檢出率高于HA組（P<0.05），見表5。

2.7 聯(lián)合分析

MDS組，骨髓細(xì)胞形態(tài)檢測(cè)，巨核系病態(tài)發(fā)生率為19.48%（15/77），內(nèi)鐵染色環(huán)核鐵粒幼紅細(xì)胞陽性率為38.96%（30/77），骨髓活檢切片ALIP發(fā)生率為68.83%（53/77），巨核病態(tài)檢出率為51.95%（40/77），聯(lián)合檢測(cè)檢出率為89.61%。

3 討論

MDS的發(fā)病病因復(fù)雜，臨床難以和HA等血液系統(tǒng)良性疾病進(jìn)行很好的區(qū)分，誤診情況時(shí)有發(fā)生，延誤治療[8]。MDS患者血象會(huì)表現(xiàn)為嚴(yán)重貧血等，骨髓象表現(xiàn)為紅系明顯增生，尤其是低原始細(xì)胞MDS，無明顯檢測(cè)特異性，臨床診斷難度較高。提高其診斷準(zhǔn)確率，對(duì)于輔助臨床治療具有重要意義。

本文研究結(jié)果顯示，MDS組和HA組在一般資料方面，僅血小板水平對(duì)比存在差異，但血小板水平并非低原始細(xì)胞MDS的特異表征，不能確診為該病癥。在進(jìn)行核型分析和分子生物學(xué)檢測(cè)結(jié)果方面，盡管MDS組檢出率相對(duì)較高，但依然僅為20.78%、19.48%，檢出率較低。兩組患者骨髓原始細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅系比例、粒系病態(tài)造血、紅系病態(tài)造血異常檢出率、內(nèi)鐵陽性水平、鐵顆粒數(shù)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，因此，依然難以區(qū)分。

已有研究認(rèn)為，骨髓細(xì)胞病態(tài)造血在診斷MDS方面有明顯意義[9-11]。本文研究結(jié)果顯示，MDS組巨核系病態(tài)造血異常檢出率高于HA組（P<0.05）。骨髓細(xì)胞病態(tài)造血在診斷MDS方面有較高的價(jià)值，可以作為診斷MDS的特征之一。但依然不是診斷MDS的獨(dú)特指征。一般認(rèn)為，HA患者巨核系病態(tài)發(fā)生情況較少，可根據(jù)這一情況進(jìn)行二者的區(qū)別診斷[12]。但在診斷MDS方面，其結(jié)果顯示僅為51.95%，依然缺乏特異性。故而配合細(xì)胞化學(xué)染色、骨髓活檢切片以期提高檢測(cè)準(zhǔn)確率。

MDS和HA患者存在鐵攝入系統(tǒng)紊亂和鐵代謝系統(tǒng)紊亂，使得紅細(xì)胞異常，幼紅細(xì)胞中鐵顆粒增加[13]。兩組患者經(jīng)檢測(cè)，這方面并無區(qū)別。而MDS組環(huán)鐵粒幼紅細(xì)胞陽性檢出率高于HA組（χ2=19.659，P<0.05）。但檢出率依然不是很高。在對(duì)患者進(jìn)行骨髓活檢切片分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MDS組ALIP、巨核病態(tài)造血檢出率高于HA組（P<0.05）。其診斷意義相對(duì)較高。而通過聯(lián)合檢測(cè)，檢出率達(dá)89.61%，明顯提高了MDS檢出率。

MDS是一組異質(zhì)性疾病，其發(fā)病起源于造血干細(xì)胞，臨床表現(xiàn)為病態(tài)造血，表現(xiàn)為難治性血液病[14]。其發(fā)病機(jī)制尚不十分明顯，繼發(fā)性MDS主要和烷化劑、放射線、有機(jī)毒物等有關(guān)。部分MDS患者存在原癌基因突變、染色體異常等情況，患者中性粒細(xì)胞超氧陰離子水平、堿性磷酸酶水平偏低[15-16]。臨床可將MDS分為難治性貧血、環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞性難治性貧血、難治性貧血伴原始細(xì)胞增多轉(zhuǎn)變型、慢性粒-單核細(xì)胞性白血病五大類型，在診斷方面，還需要進(jìn)一步深入研究，提高其診斷準(zhǔn)確性。

總之，骨髓細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞化學(xué)染色及骨髓活檢切片三聯(lián)檢測(cè)法能夠提高低原始細(xì)胞骨髓增生異常綜合征檢出率，輔助臨床診治。

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（收稿日期：2018-04-30）