化纖膠囊對膿毒癥大鼠凝血功能的影響*

王 叢 梁 群

（1.黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院，黑龍江哈爾濱 150040）

膿毒癥是感染導致的全身炎癥反應綜合征，其死亡率逐年增加，給患者及家屬帶來極大的痛苦，目前已經成為世界矚目的重大疾病，引起國內外的重視［1］。膿毒癥發病機制的研究一直是醫學界的研究重點，國內外專家目前已經確定其發病機制并不是單一因素引起的，與炎癥、凝血、免疫等多靶點均有關系［2］。西醫治療只能從單方面出發不能實現多靶點治療，中藥復方制劑可以摒棄西藥單一治療靶點的弊端，從整體觀念出發實現多靶點治療。近年來中醫不再停留于傳統的治療慢性疾病的模式而是更多地采用中西醫結合治療急危重病，并且得到國內外專家的認可。本文通信作者梁群教授在研究急危重癥疾病領域工作20余年，依據膿毒癥的病因病機及多年臨床經驗總結出益氣活血解毒方化纖膠囊，應用于臨床后療效顯著［3-4］。本實驗研究是在此基礎上進一步探索化纖膠囊影響膿毒癥凝血功能的機制，為中醫藥治療膿毒癥提供更有力的支持。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF級別Wister雄性大鼠40只 ［許可證號 SCXK（京）2016-0006］，體質量 180～220 g，提供單位為黑龍江中醫藥大學動物實驗中心。普通專用飼料喂養于溫度（22±4）℃，相對濕度40%～70%，自然光線的實驗室，經過1周的適應性飼養后進行實驗。

1.2 試藥與儀器 1）藥物：化纖膠囊（規格0.75 g/粒，藥物組成：黃芪 30 g，丹參 15 g，當歸 15 g，白術 15 g，黨參 15 g，川芎 15 g，茯苓 15 g，熟地黃 15 g，甘草10 g。參照中國藥典（2015版）中藥膠囊劑制作方法，由黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院藥廠制備），臨用前將膠囊內容物取出研磨成細粉末，用蒸餾水稀釋至所需濃度，D2＝D1×K2/K1×W1/W2，D 為藥物劑量，K 為常數 （大鼠為 9.1人為 1.6），W 為動物體 zhiliang1（kg），經計算每毫升藥物含量為化3.5 g（成人2倍）。2）試劑：大鼠抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）ELISA檢測試劑盒；大鼠血小板活化因子（PAF）ELISA試劑盒（由Abcam公司提供）。3）儀器：離心機型號SORVALL ST8/8R廠家：Therm電子稱，哈爾濱量具廠生產。

1.3 分組與模型制備 Wister雄性大鼠40只按隨機數字表法分為：空白組10只、假手術組10只、模型組20只。模型以10%水合氯醛（0.4 mL/100 g）腹腔麻醉后沿腹部正中線切開約2 cm切口，找到盲腸，避開其系膜血管在盲尾端2 cm處結扎，然后在結扎處遠端用18號針穿刺盲腸2次，擠出腸內容物后將盲腸還納關腹。術后大鼠出現豎毛、精神萎靡等癥狀為造模成功。假手術組：打開腹腔并尋找盲腸，分離其遠端與大腸的系膜，不施盲腸結扎術即關閉腹腔。造模成功后隨機分為化纖膠囊組與模型組，每組各10只。

1.4 干預方法 化纖膠囊干預組予化纖膠囊（用蒸餾水稀釋，質量濃度為3.5 g/mL），劑量0.5 mL/100 g灌胃給藥，每日2次，間隔至少6 h，模型組與假手術組分別給予同劑量的0.9%氯化鈉注射液。干預時間為3 d。

1.5 標本采集及檢測 造模后待大鼠麻醉蘇醒后開始進行觀察，記為實驗第1天，試驗周期為3 d，3 d后腹主動脈采血由黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院檢驗科進行檢測，AT-Ⅲ、PAF應用ELISA試劑盒檢測。檢測方法為在血中加入乙二胺四乙酸，在4℃的環境中用抗凝管以3000 r/min離心15 min后，在-80℃的冰箱內保存上清液。采血1 h內進行化驗。首先將抗凝管中的血液用離心機離心，然后應用ELISA檢測進行化驗，對各組大鼠的AT-Ⅲ、PAF進行比較。

1.6 統計學處理 應用SPSS19.0統計軟件。計量資料以（±s）表示，符合正態分布的采用獨立樣本t檢驗，不符合的用秩和檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

各組造模給藥3 d后AT-Ⅲ、PAF及凝血指標比較 見表1。空白組與假手術組比較差異無統計學意義（P>0.05），說明手術對各項指標沒有影響。化纖膠囊組、模型組與空白組比較，活化部分凝血酶原時間（APTT）、凝血酶原時間（PT）、凝血酶時間（TT）、AT-Ⅲ、PAF、纖維蛋白原（FIB）差異具有統計學意義（P＜0.05），說明模型組與化纖膠囊組的凝血功能均比空白組差。 化纖膠囊與模型組比較，APTT、PT、TT、AT-Ⅲ、PAF、FIB差異有統計學意義（P＜0.05），說明化纖膠囊干預組對膿毒癥凝血功能障礙有明顯的治療作用。

表1 各組大鼠造模給藥3 d后凝血象化驗結果比較（±s）

表1 各組大鼠造模給藥3 d后凝血象化驗結果比較（±s）

與模型組比較，*P＜0.05；與空白組比較，△P＜0.05

組 別 n A P T T（s） P T（s） T T（s）F I B（g/L）A T-Ⅲ（%） P A F（μ g／L）空白組 1 0假手術組 1 0模型組 1 0 2 0.7 6±1.9 3 8.5 8±0.5 7 1 1.0 3±1.2 3 2 0.0 4±1.6 4 8.7 2±0.6 5 1 1.0 6±1.1 8 4 0.6 8±2.6 0△ 1 3.7 0±2.2 6△ 2 0.5 9±1.8 9△2.7 7±0.5 0 2.6 6±0.4 8 1.1 9±0.1 7△1 0 5.0 0±3.1 9 0.9 5±0.1 8 1 0 5.8 0+3.9 7 0.9 1+0.2 3 6 6.7 0+6.8 3△ 1.9 6+0.2 7△化纖膠囊組 1 0 3 1.9 1±4.2 6*△ 1 0.2 0±1.4 8*△ 1 8.0 2±2.7 9*△1.8 7±0.4 1*△8 8.7 0+8.3 6*△ 1.5 7+0.2 9*△

3 討 論

隨著醫療水平的提高許多疾病揭開了神秘的面紗，醫學難題正在被逐漸地破解，可是膿毒癥作為死亡率最高的疾病之一仍在危害人類的生命［5］。雖然膿毒癥的發病機理尚未被完全揭示，但可以確定的是膿毒癥發病與炎癥、免疫、凝血等病理生理改變有十分密切的關系［6］。目前對膿毒癥凝血功能異常的研究已受到國際上的重視，已經成為攻克膿毒癥的主要研究方向［7-8］。膿毒癥導致的凝血功能異常是多方面原因引起的，既有凝血系統的異常，也有抗凝系統和纖溶系統的異常，并且各因素之間相互促進。

近些年中西醫結合治療急危重病逐漸得到國內外的認可［9-11］。本文通信作者梁群教授從事急危重癥研究20多年，在運用中藥治療膿毒癥方面提出自己的一些觀點［12］。關于膿毒癥梁教授認為嚴重膿毒癥階段的中醫基本病機為“瘀血阻絡”，基本病因為外感六淫毒邪，膿毒癥的毒邪侵犯人體后激發人體正氣抗邪從而導致邪正紛爭，虛實錯雜，最終形成膿毒癥之復雜病機［13］。六淫之中屬寒邪致病最重，寒邪主收斂凝滯，寒邪侵襲人體，使得血凝脈瘀。膿毒癥往往伴隨發熱，熱邪煎熬血液使其變得黏稠，形成熱壅血瘀。內熱熾盛、熱灼津液、灼傷血脈，致使血不能循經運行，溢出脈外成瘀血。疾病發生耗傷正氣，正氣虛損，不能固攝脈絡之血，血不循經導致血溢脈外，出現離經之血即為瘀，最終膿毒癥出現瘀血阻絡。化纖膠囊是梁教授結合臨床經驗和中醫學的基本理論針對膿毒癥正虛毒損、瘀滯絡脈的病因病機，運用活血、解毒、扶正的藥物可發揮其多靶點治療的特點，彌補了膿毒癥在臨床治療上的不足［14-15］。化纖膠囊中黃芪為君，益氣扶正要藥；臣以黨參、丹參、當歸、川芎；佐以白術、茯苓、熟地黃；黨參與黃芪合用增加其益氣扶正之功，丹參、當歸、川芎共奏活血解毒通經之效。茯苓助白術利水，增加健脾益肺之功，熟地黃滋陰養血，加之甘草調和藥性，共同調節患者氣血與臟腑功能。

AT-Ⅲ的變化影響著血液的凝固情況，AT-Ⅲ含量增加可以控制膿毒癥時血液高凝的情況。PAF的含量升高代表血液出現高凝狀態。本實驗以“氣行則血行”的理論為指導，應用益氣中藥使血液得以按經脈循行，加之活血化瘀解毒中藥改善血液高凝狀態，維持血液循環穩定使得凝血功能正常。本實驗證實益氣活血解毒方化纖膠囊使膿毒痛大鼠PAF含量降低、AT-Ⅲ升高，化纖膠囊組的 APTT，PT，TT，AT-Ⅲ，PAF，FIB 均優于模型組，使凝血功能得到改善。應用中藥制劑改善凝血安全有效，避免應用常規西藥抗凝劑引起的副作用。本實驗研究為中藥制劑治療膿毒癥凝血功能異常又提供了有力的依據，為中醫藥治療急危重癥打下堅實基礎，且為中藥治療膿毒癥的研究做出了貢獻。