加味溫膽方對(duì)心肌缺血（痰濁血瘀證）大鼠細(xì)胞凋亡及 Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3表達(dá)的影響*

張麗麗 李 雁

（黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150036）

冠心病是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化使血管狹窄或阻塞，從而導(dǎo)致心肌缺血缺氧或心肌壞死的臨床綜合證［1-2］。本病多發(fā)于50歲以上人群，男性多于女性，病理基礎(chǔ)是由于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化或斑塊不穩(wěn)定，使血流減少，出現(xiàn)心肌缺血為主要特征的臨床綜合征，它涵蓋了從不穩(wěn)定心絞痛到ST段抬高性心肌梗死和心肌缺血所致心臟性猝死的一系列臨床急癥［3］。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為冠心病屬于“真心痛”“胸痹”“胸痛”范疇，是痰濁血瘀證的起始階段，由于津血同源，痰瘀相關(guān)；痰可致瘀，痰常夾瘀。津、血均為水谷精微化生而來(lái)，津液凝煉化濁可變?yōu)樘?，血液運(yùn)行不暢可化為瘀；飲食失調(diào)，脾胃損傷，運(yùn)化失司，導(dǎo)致濕濁內(nèi)生，濕濁久聚生痰。痰濁又可阻滯氣機(jī)，致脈絡(luò)不通，氣血運(yùn)行不暢，引發(fā)血瘀［4］。因此，心肌缺血是痰濁血瘀的早期階段。心肌缺血再灌注中凋亡的發(fā)生是導(dǎo)致心肌損傷的重要機(jī)制之一［5］。心梗后細(xì)胞凋亡使心肌細(xì)胞數(shù)量持續(xù)減少，膠原支架斷裂，心肌細(xì)胞代償性肥大，心室壁變厚、擴(kuò)張，心功能障礙，最終導(dǎo)致心力衰竭。B淋巴細(xì)胞瘤-2（Bcl-2）是細(xì)胞凋亡基因的調(diào)控者，以線粒體為調(diào)控凋亡單位，Bcl-2為抗調(diào)蛋白，其同源二聚體X蛋白（Bax）為促凋亡蛋白，Bcl-2/bax的比例常被衡量凋亡水平［6］。當(dāng)Bcl-2/Bax基因表達(dá)降低時(shí)，線粒體通透性改變，進(jìn)而細(xì)胞色素釋放，凋亡誘導(dǎo)因子等可溶性膜間隙蛋白被釋放，Survivin表達(dá)水平降低，啟動(dòng)Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)和不依賴(lài)Caspase途徑的方式參與凋亡的發(fā)生［7］。加味溫膽方出自《醫(yī)宗金鑒》，由半夏、陳皮、茯苓、甘草、膽南星、竹茹、蒼術(shù)、延胡索、丹參、川芎、赤芍、牛膝、黃芪、節(jié)菖蒲組成，具有降低心肌耗氧量、舒張外周血管阻力的功效，具有化痰、祛除痰飲、解郁散結(jié) 、止痛消炎的療效，同時(shí)還能改善缺血心肌氧的供求平衡，提高心肌作功效率［8］。本研究擬探討加味溫膽方對(duì)心肌缺血（痰濁血瘀證）大鼠細(xì)胞凋亡及 Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3蛋白及基因表達(dá)的影響，為心肌缺血（痰濁血瘀證）的治療提供理論及臨床依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)SD雄性大鼠100只，體質(zhì)量（234.76±11.03）g，黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SYXK（黑）2016-0009。動(dòng)物自由攝取飼料、自由飲水，自動(dòng)控制晝夜循環(huán)（12/12 h），室溫（26.0±3.0）℃。每周稱(chēng)質(zhì)量1次。

1.2 儀器及試劑 加味溫膽方組成：由半夏12 g，陳皮 20 g，茯苓 20 g，甘草 10 g，膽南星 15 g，竹茹 20 g，蒼術(shù) 15 g，延胡索 20 g，丹參 20 g，川芎 20 g，赤芍15 g，牛膝 15 g，黃芪 30 g，節(jié)菖蒲 15 g。由黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院制劑室加工而成，制作工藝為標(biāo)準(zhǔn)制干浸膏，每克干浸膏相當(dāng)于生藥8.62 g；根據(jù)成人劑量公式換算，大鼠用藥量為成人的13.14倍，將藥粉溶入蒸餾水，以10.0 mL/kg體質(zhì)量灌胃，將藥液濃度配制成為 10.0 g/mL。 Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3 Elisa試劑盒（規(guī)格為96反應(yīng)單位，編號(hào)kit09874、kit32942、kit87643）購(gòu)自上海邦奕生物科技有限公司；Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3（規(guī)格為 10 mL，編號(hào) 45098、34509、23489、10987、09876、43098、54091、09765）一抗、二抗購(gòu)自上海信帆生物科技有限公司；DAB顯色試劑盒（規(guī)格為5mL，編號(hào)9098）、熱電MK3酶標(biāo)儀均購(gòu)自南京森貝伽生物科技有限公司；Qiagen 205311逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、ABI：4472908染料法實(shí)時(shí)熒光定量試劑盒、購(gòu)自寶生物工程（大連）有限公司；實(shí)時(shí)熒光定量Bio-Rad PCR FX653儀購(gòu)自美國(guó)BIO-RAD公司。

1.3 分組與造模 根據(jù)體質(zhì)量隨機(jī)分為5組：空白組、模型組、加味溫膽方低劑量組（5.0 mg/kg）、加味溫膽方中劑量組 （10.0 mg/kg）、加味溫膽方高劑量組（20.0 mg/kg），每組20只?？瞻捉M普通飼料喂養(yǎng)，每日0.9%氯化鈉注射液灌胃。模型組、加味溫膽方各劑量組高脂飼料配方（膽固醇1%，蛋黃粉15%，豬油15%，基礎(chǔ)飼料69%）。模型組每日0.9%氯化鈉注射液灌胃；根據(jù)預(yù)試驗(yàn)獲得大鼠加味溫膽方的藥物半數(shù)有效量（ED）約為800 mg/kg，取大鼠加味溫膽方ED的1/4（20.0 mg/kg）、1/8（10.0 mg/kg）、1/16（5.0 mg/kg）作為加味溫膽方高劑量組、加味溫膽方中劑量組、加味溫膽方低劑量組，連續(xù)灌胃7周，每周記錄體質(zhì)量，調(diào)節(jié)并維持給藥量；在第49天施冠狀動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)，麻醉后開(kāi)胸，暴露心臟，于冠狀動(dòng)脈左前降支完全結(jié)扎，心電圖監(jiān)測(cè)，以ST段弓背向上抬高評(píng)價(jià)結(jié)扎是否成功。

1.4 標(biāo)本采集與檢測(cè) 1）大鼠心肌凋亡細(xì)胞檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)束后，頸椎脫臼處死大鼠，取心臟組織（剩余心臟組織-80℃冰箱保存），進(jìn)行常規(guī)染色切片，末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT酶）介導(dǎo)的帶熒光的dUTP缺口末端標(biāo)記法（TUNEL）檢測(cè)心肌凋亡細(xì)胞；MOTIC IMAGES AOVANCED3.2圖像分析系統(tǒng)檢測(cè)的平均光密度和目標(biāo)總面積。2）免疫組化法測(cè)定Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3蛋白在心臟中的表達(dá)。5 μm的石蠟組織切片脫蠟，0.1 mol/L檸檬酸修復(fù)抗原，室溫5 min后，3%的H2O2液常溫阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶活性30 min，微波修復(fù)抗原，PBS 常規(guī)沖洗，1%的 Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3 抗體工作液（稀釋濃度 1∶200），4 ℃過(guò)夜，加入二抗（IgG），室溫60 min，加鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物，PBS沖洗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，（40%、60%、80%、90%、95%、100%）梯度酒精脫水，二甲苯透明，封片。 Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3 蛋白主要定于細(xì)胞核，呈棕黃色。3）大鼠心臟Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3蛋白及mRNA表達(dá)的檢測(cè)。將保存在-80℃冰箱中的心臟組織取出解凍。稱(chēng)取0.2 g心臟組織，加入少量液氮，在微波碾磨儀（5000 r/s）中迅速將其碾碎至粉末狀；將組織粉末轉(zhuǎn)入1 mL Eppendorf管中，加入 1.2 mL PBS（pH7.4），充分振蕩混勻，2 000 g，4℃，離心20 min。仔細(xì)收集上清液。獲取心臟組織勻漿后，采用ELISA法檢測(cè)心臟組織中的Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3蛋白表達(dá)量。提取心臟組織總RNA并檢測(cè)RNA純度和濃度。UltraSYBR One Step RNA PCR Kit說(shuō)明對(duì)待測(cè)基因進(jìn)行Real-time PCR反應(yīng)。引物序列及RT-PCR反應(yīng)體系見(jiàn)表1，表2。

表1 Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3 引物序列

表2 RT-PCR反應(yīng)體系

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用Epidata、SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。凋亡光密度及面積、Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3 蛋白及mRNA表達(dá)以（±s）表示，分析前進(jìn)行正態(tài)檢驗(yàn)，若滿足正態(tài)性，采用LSD-t兩兩檢驗(yàn)，若不滿足正態(tài)性，數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換后再進(jìn)行LSD-t兩兩檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α為0.05。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠心肌病理組織比較 見(jiàn)圖1。空白組心肌纖維排列整齊，間質(zhì)血管無(wú)改變，未見(jiàn)心肌細(xì)胞變性、壞死。模型組心肌纖維波浪樣改變、斷裂，心肌細(xì)胞肥大，空泡變性。加味溫膽方低劑量組見(jiàn)心肌纖維波浪樣改變較強(qiáng)，心肌細(xì)胞空泡變性。加味溫膽方中劑量組見(jiàn)心肌纖維中等程度波浪樣改變，心肌細(xì)胞中度肥大。加味溫膽方高劑量組心肌纖維排列紊亂輕微，未見(jiàn)心肌斷裂，心肌細(xì)胞輕度肥大。

圖1 各組大鼠心肌病理組織比較（HE染色，200倍）

2.2 各組大鼠心肌細(xì)胞凋亡光密度及面積比較 見(jiàn)表3，圖2。與空白組比較，模型組及加味溫膽方組各劑量大鼠心肌細(xì)胞凋亡光密度及面積均升高（P<0.05）；與模型組比較，加味溫膽方組各劑量大鼠心肌細(xì)胞凋亡光密度及面積均降低，且隨著加味溫膽方組給藥劑量的增加，凋亡光密度及面積逐漸下降，劑量-效應(yīng)關(guān)系明顯（P<0.05）。正常細(xì)胞核染藍(lán)色，凋亡細(xì)胞核呈棕色，各組心肌凋亡數(shù)目與凋亡光密度及面積符合。

表3 各組大鼠心肌細(xì)胞凋亡光密度及面積比較（±s）

表3 各組大鼠心肌細(xì)胞凋亡光密度及面積比較（±s）

與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05；與加味溫膽方低劑量組組比較，▲P＜0.05；與加味溫膽方中劑量組組比較，＃P＜0.05。下同

組 別 n 光密度 面積（μ m 2）空白組 2 0 0.2 8 2 9±0.1 3 4 9 3.1 6 6 4±0.1 3 5 6模型組 2 0 0.3 8 5 9±0.1 7 3 6* 1 2.3 3 1 1±1.3 0 0 1*加味溫膽方低劑量組 2 0 0.3 5 7 5±0.1 1 0 5*△ 8.9 3 4 7±0.1 8 9 1*△加味溫膽方中劑量組 2 0 0.3 3 7 3±0.0 0 9 8*△▲ 6.8 1 3 5±0.1 9 3 4*△▲加味溫膽方高劑量組 2 0 0.3 0 1 4±0.0 0 7 8*△▲＃ 4.4 3 3 1±0.1 7 7 6*△▲＃

圖2 各組大鼠心肌細(xì)胞凋亡情況（TUNEL染色，400倍）

2.3 各組大鼠 Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3 蛋白表達(dá)水平的比較 見(jiàn)表4，圖3～6。與空白組比較，模型組及加味溫膽方組各劑量BCL-2、Survivin降低，Bax、Caspase-3升高（P<0.05）；與模型組比較，加味溫膽方組各劑量組 Bcl-2、Survivin 升高，Bax、Caspase-3 降低，且隨著加味溫膽方組給藥劑量的增加，Bcl-2、Survivin逐漸升高，Bax、Caspase-3逐漸降低，劑量-效應(yīng)關(guān)系明顯 （P<0.05）。 免疫組化法下，Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3 陽(yáng)性表達(dá)為棕褐色，各組 Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3陽(yáng)性表達(dá)情況與個(gè)蛋白表達(dá)水平符合。

表4 各組大鼠Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3蛋白表達(dá)水平比較（ng/g，±s）

表4 各組大鼠Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3蛋白表達(dá)水平比較（ng/g，±s）

組 別 n空白組 2 0模型組 2 0加味溫膽方低劑量組 2 0 B c l-2 B a x S u r v i v i n C a s p a s e-3 1 8 3.6 7±1 5.6 3 1 3 9.4 6±5.5 7 1 4 5.7 7±6.4 6 4 7.1 3±1 5.9 5 7 1.1 4±1 6.7 8* 1 7 9.7 5±7.3 7* 6 7.8 6±6.9 8* 1 8 7.6 6±9.4 7*1 0 3.7 3±1 3.6 5*△ 1 6 9.3 5±8.8 8*△ 8 9.4 5±6.9 8*△ 1 3 4.1 4±1 2.7 4*△加味溫膽方中劑量組 2 0 1 2 3.1 7±9 9.6 9*△▲ 1 4 6.3 1±1 2.7 6*△▲ 1 2 0.1 5±1 0.6 9*△▲ 6 3.2 3±1 0.7 3*△▲加味溫膽方高劑量組 2 0 1 5 2.5 8±1 3.7 4*△▲＃ 1 4 2.8 1±9.6 0*△▲＃ 1 3 7.6 3±1 2.7 3*△▲＃ 5 7.4 5±8.7 6*△▲＃

圖3 各組大鼠心臟Bcl-2表達(dá)情況（免疫組化染色，400倍）

圖4 各組大鼠心臟Bax表達(dá)情況（免疫組化染色，400倍）

2.4 各組大鼠 Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3 mRNA表達(dá)水平的比較 見(jiàn)表5。與空白組比較，模型組及加味溫膽方組各劑量Bcl-2、Survivin mRNA降低，Bax、Caspase-3 mRNA升高（P<0.05）；與模型組比較，加味溫膽方組各劑量組Bcl-2、Survivin mRNA升高，Bax、Caspase-3 mRNA降低，且隨著加味溫膽方組給藥劑量的 增 加 ，Bcl-2、Survivin mRNA 逐 漸 升 高 ，Bax、Caspase-3 mRNA逐漸降低，劑量-效應(yīng)關(guān)系明顯（P<0.05）。

圖5 各組大鼠心臟Survivin表達(dá)情況（免疫組化染色，400倍）

圖6 各組大鼠心臟Caspase-3表達(dá)情況（免疫組化染色，400倍）

表5 各組大鼠 Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3 mRNA 表達(dá)水平比較（ng/g，±s）

組 別 n空白組 2 0模型組 2 0加味溫膽方低劑量組 2 0 B c l-2 B a x S u r v i v i n C a s p a s e-3 m R N A 1.9 4±0.1 1 1.4 5±0.1 3 1.7 6±0.1 7 1.1 3±0.2 1 0.5 6±0.1 3* 2.1 3±0.1 9* 0.9 8±0.1 2* 2.1 8±0.1 9*0.9 1±0.1 8*△ 1.8 7±0.1 4*△ 1.0 9±0.1 7*△ 1.8 7±0.1 8*△加味溫膽方中劑量組 2 0 1.4 9±0.2 0*△▲ 1.6 9±0.2 1*△▲ 1.1 2±0.1 6*△▲ 1.5 2±0.0 9*△▲加味溫膽方高劑量組 2 0 1.7 2±0.1 1*△▲＃1.5 9±0.1 0*△▲＃1.4 2±0.2 0*△▲＃ 1.3 2±0.1 0*△▲＃

3 討 論

研究報(bào)道，2013年我國(guó)心肌缺血（痰濁血瘀證）患病率為414/10萬(wàn)，患者總?cè)藬?shù)高達(dá)120萬(wàn)人，而絕大部分患者（約72%～79%）出現(xiàn)不同心肌收縮、舒張功能障礙，繼發(fā)引起輸出量不足，患者3年內(nèi)的生存率極低，則患者生存期中位數(shù)約為4.8年，因此對(duì)心肌缺血（痰濁血瘀證）發(fā)病機(jī)制及藥物干預(yù)的研究尤為重要［9-10］。

凋亡的心肌細(xì)胞在細(xì)胞外降解，被巨噬細(xì)胞和鄰近細(xì)胞吞噬，因此，凋亡在調(diào)節(jié)細(xì)胞和組織構(gòu)造方面具有重要作用。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)證實(shí)，應(yīng)用抗凋亡藥物、細(xì)胞因子或采用基因治療可減輕心肌缺血再灌注損傷。心肌細(xì)胞凋亡被認(rèn)為是心肌缺血痰濁血瘀證發(fā)病過(guò)程中的重要環(huán)節(jié)，其與一系列凋亡因子、抗凋亡因子的紊亂表達(dá)密切相關(guān)［11］。 Bcl-2、Bax是調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞凋亡的重要調(diào)控因子，Bcl-2是抑制細(xì)胞凋亡蛋白，Bax是促進(jìn)細(xì)胞凋亡蛋白。Bcl-2和Bax可通過(guò)化學(xué)氫鍵彼此形成異二聚體或與同源二聚體，Bcl-2和Bax兩者蛋白基因表達(dá)水平比例的多少是決定細(xì)胞是否凋亡的重要因素。在細(xì)胞中，當(dāng)Bax表達(dá)量較高時(shí)，Bcl-2與Bax通過(guò)磷酸二酯脫氫鍵形成同源二聚體Bcl-2/Bax，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，當(dāng)Bcl-2表達(dá)量較高時(shí)，則通過(guò)氫鍵形成異源二聚體Bcl-2/Bax，抑制細(xì)胞凋亡［12-13］。研究還發(fā)現(xiàn)［14］，Bcl-2、Bax 還可與自身形成二聚體，當(dāng)Bcl-2通過(guò)自身結(jié)構(gòu)域BH3形成Bcl-2/Bcl-2，維持凋亡分子在細(xì)胞的恒定，抑制細(xì)胞進(jìn)入凋亡程序，而當(dāng)Bax/Bax同源二聚體占優(yōu)勢(shì)時(shí)，可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，Bax/Blc決定了細(xì)胞接受凋亡信號(hào)后細(xì)胞的存活與否，對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生有重要意義。Survivin是Bcl-2、Bax調(diào)控下的重要凋亡抑制基因，Bcl-2/Bax的比例直接決定了Survivin的激活或抑制，Survivin通過(guò)內(nèi)源性及外源性途徑抑制細(xì)胞凋亡，Survivin直接抑制Caspasc-3和Caspasc-7的活性，來(lái)阻斷各種刺激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過(guò)程，Survivin也可通過(guò)P21間接抑制Caspase；Survivin與細(xì)胞周期調(diào)控因子CDK4結(jié)合，導(dǎo)致CDK2/cyclin-E激活和核糖體（Rb）磷酸化，Rb磷酸化后啟動(dòng)細(xì)胞進(jìn)入周期，加快G1/S期的轉(zhuǎn)換進(jìn)而阻斷凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路［15-16］。近年來(lái)，隨著對(duì)心肌缺血（痰濁血瘀證）研究的深入，多項(xiàng)研究表明，心肌細(xì)胞過(guò)度凋亡以及 IL-3、Fas、Bax、Caspase-3、Caspase-7、Caspase-8、TNF、Survivin等細(xì)胞因子的異常表達(dá)與心肌缺血（痰濁血瘀證）密切相關(guān)。大鼠動(dòng)物試驗(yàn)已證實(shí)，通過(guò)藥物抑制心肌細(xì)胞的凋亡能有效治療心肌缺血 （痰濁血瘀證），減輕其損傷［17-18］。

加味溫膽方具有改善血管舒縮功能、抗凝、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、抑制血小板凝聚、調(diào)節(jié)血脂、擴(kuò)張血管、調(diào)節(jié)血壓等藥理學(xué)功效，從中醫(yī)學(xué)角度上，具有化痰活血、益氣養(yǎng)心的功效，能生新血，散瘀血于脈道［19-20］。本研究結(jié)果顯示，空白組心肌纖維排列整齊，間質(zhì)血管無(wú)改變，未見(jiàn)心肌細(xì)胞變性、壞死。模型組心肌纖維波浪樣改變、斷裂，心肌細(xì)胞肥大，空泡變性。加味溫膽方低劑量組見(jiàn)心肌纖維波浪樣改變較強(qiáng)，心肌細(xì)胞空泡變性。加味溫膽方中劑量組見(jiàn)心肌纖維中等程度波浪樣改變，心肌細(xì)胞中度肥大。加味溫膽方高劑量組心肌纖維排列紊亂輕微，未見(jiàn)心肌斷裂，心肌細(xì)胞輕度肥大。結(jié)合心肌細(xì)胞凋亡結(jié)果與空白組比較，模型組及加味溫膽方組各劑量大鼠心肌細(xì)胞凋亡光密度及面積均升高；與模型組比較，加味溫膽方組各劑量大鼠心肌細(xì)胞凋亡光密度及面積均降低，且隨著加味溫膽方組給藥劑量的增加，凋亡光密度及面積逐漸下降，劑量-效應(yīng)關(guān)系明顯；說(shuō)明加味溫膽方能減輕冠心病大鼠的病理?yè)p傷，有效抑制心肌細(xì)胞凋亡，加味溫膽方高劑量效果尤為明顯。而心肌缺血（痰濁血瘀證）大鼠Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3mRNA及蛋白表達(dá)結(jié)果，與空白組比較，模型組及加味溫膽方組各劑量Bcl-2、Survivin mRNA、 蛋白表達(dá)水平降低，Bax、Caspase-3 mRNA、蛋白表達(dá)水平升高；與模型組比較，加味溫膽方組各劑量組Bcl-2、Survivin mRNA、蛋白表達(dá)水平降低升高，Bax、Caspase-3 mRNA、蛋白表達(dá)水平降低，且隨著加味溫膽方組給藥劑量的增加，Bcl-2、Survivin mRNA、蛋白表達(dá)水平逐漸升高，Bax、Caspase-3 mRNA、蛋白表達(dá)水平，劑量-效應(yīng)關(guān)系明顯，說(shuō)明加味溫膽方能促進(jìn) Bcl-2、Survivin mRNA、蛋白的表達(dá)，抑制 Bax、Caspase-3 mRNA、蛋白的表達(dá)，進(jìn)而抑制心肌細(xì)胞凋亡，且具有明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。

綜上所述，加味溫膽方能減輕冠心病大鼠的病理?yè)p傷，抑制心肌缺血（痰濁血瘀證）大鼠細(xì)胞凋亡，其機(jī)制與加味溫膽方能促進(jìn)Bcl-2、Survivin mRNA、蛋白的表達(dá)，抑制Bax、Caspase-3 mRNA、蛋白的表達(dá)有關(guān)。