TTF- 1在肺腺癌組織中的表達及其與臨床特征的關系

高煒，徐艷霞，劉圓圓，徐媺

青島市腫瘤醫院中西醫結合科，山東青島266042

肺癌是一種常見的惡性腫瘤，近年來，肺癌的發病率持續上升，病死率居高不下，是嚴重威脅人類生命健康的惡性腫瘤之一[1-2]。早期肺癌患者并無明顯癥狀，大多數患者僅出現一些常見的呼吸道癥狀，如咳嗽、胸悶等，大部分患者就診時已處于晚期，錯過了最佳治療時機，患者的5年生存率較低[3]。早期發現、及時診斷、盡快治療是降低肺癌患者病死率的根本方法[4]。甲狀腺轉錄因子-1（thyroid transcription factor-1，TTF-1）是一種在肺組織表面活性蛋白表達過程中起重要作用的轉錄因子，其在多數肺腺癌中均有表達，因此，TTF-1在臨床上廣泛應用于肺腺癌的常規病理診斷，但是目前對于TTF-1的表達與腫瘤發生、發展關系的研究較為少見[5]。本研究采用免疫組織化學染色法檢測肺腺癌組織和癌旁正常組織中TTF-1的表達情況，并分析TTF-1表達與肺腺癌患者臨床特征的關系，旨在為肺腺癌的血清學診斷提供新的參考指標，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2016年3月至2017年3月于青島市腫瘤醫院接受手術治療且經手術病理證實的肺腺癌患者的臨床資料。納入標準：①肺腺癌的診斷標準參考2015版《中國原發性肺癌診療規范》[6]；②年齡為19～79歲；③均經手術后病理學檢查證實為肺腺癌；④標本采集前未接受過放化療、免疫治療等；⑤臨床資料齊全。排除標準：①伴有嚴重的肝腎功能不全；②既往有放化療史、免疫治療史；③轉移性肺癌。根據納入和排除標準，本研究共納入75例肺腺癌患者，收集患者的肺腺癌組織標本75例及其相應的癌旁正常組織（距離病灶邊緣3 cm）標本75例。75例肺腺癌患者中，男47例，女28例；年齡為41～78歲，平均年齡為（58.2±12.2）歲；解剖部位：中央型24例，周圍型51例；病灶直徑：≥5 cm 29例，＜5 cm 46例；TNM分期：I期16例，Ⅱ期29例，Ⅲ期22例，Ⅳ期8例；組織分化程度：高分化24例，中分化25例，低分化26例；有淋巴結轉移46例，無淋巴結轉移29例；表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）陽性36例，EGFR陰性39例。

1.2 免疫組織化學染色

將所有組織標本均采用10%中性福爾馬林固定，并均經石蠟包埋后作連續切片，切片厚度為3～4 μm，嚴格按照說明書的步驟進行蘇木精-伊紅染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色），并在5個高倍視野（×400）光鏡下觀察。將切片進行脫蠟，用pH為6.0的檸檬酸鹽緩沖溶液在高溫、高壓的環境下進行抗原修復，再加入3%的過氧化氫消化約10 min，去除內源性過氧化物酶，在組織切片上滴加一抗，并在37℃環境下孵育1 h，再采用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，加二抗在37℃環境下孵育0.5 h，用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，沖洗完成后采用二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）法顯色，顯色后進行脫水、透明、封片和鏡檢。

1.3 免疫組織化學染色結果判定

TTF-1定位于細胞核，當出現黃色、棕黃色、褐色顆粒時提示為TTF-1蛋白陽性表達。根據染色強度評分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色、黑色為3分。根據陽性細胞數目所占百分比評分：陽性細胞數目所占百分比≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。根據染色強度評分和陽性細胞數目所占百分比評分的乘積判斷免疫組織化學染色結果，＜3分為TTF-1蛋白表達陰性（-），≥3分為TTF-1蛋白表達陽性。其中，3～5分為TTF-1蛋白表達弱陽性（+）；6～9分為TTF-1蛋白表達中等陽性（++）；＞9分為TTF-1蛋白表達強陽性（+++）。

1.4 統計學方法

采用SPSS 16.0軟件對數據進行統計分析。計量資料采用均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數或率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 肺腺癌組織和癌旁正常組織中TTF- 1陽性表達率的比較

肺腺癌組織中TTF-1的陽性表達率為77.3%（58/75），明顯高于癌旁正常組織中的10.7%（8/75），差異有統計學意義（χ2=67.641，P＜0.01）。（表1）

表1 肺腺癌組織和癌旁組織中TTF- 1的表達情況

2.2 肺腺癌組織中TTF- 1表達與肺腺癌患者臨床特征的關系

中高分化、有淋巴結轉移、TNM分期為I+Ⅱ期肺腺癌患者肺腺癌組織中TTF-1的陽性表達率均明顯高于低分化、無淋巴結轉移、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期肺腺癌患者肺腺癌組織中TTF-1的陽性表達率，差異均有統計學意義（P＜0.01）；不同病灶直徑、EGFR表達的肺腺癌患者肺腺癌組織中TTF-1陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征肺腺癌患者肺腺癌組織中TTF- 1蛋白的陽性表達情況比較（ n=75）

3 討論

近年來，肺癌的發病率和病死率均呈現逐年上升的趨勢，目前已成為全球病死率最高的惡性腫瘤[7-8]。目前認為，吸煙是引發肺癌的最重要的高危因素，同時，輻射、肺部感染和遺傳等也是引發肺癌的重要因素[9-10]。已有研究證明，長期且大量吸煙的人群患肺癌的概率是不吸煙人群的10～20倍，吸煙者的年齡越小，肺癌的發病率越高[11-12]。肺癌患者在患病早期多無特殊癥狀，常表現為胸部脹痛、咳痰、低熱和咳嗽等癥狀，往往在胸部放射檢查中偶爾發現[13]。肺癌晚期癥狀則表現為呼吸困難、體重驟減、咳嗽嚴重、咯血等。目前，肺癌的治療主要包括化療、放療和外科手術治療，盡管近年來放療、化療和外科手術治療等技術不斷提高，但大多數患者在就診時已處于肺癌晚期，腫瘤多已發生了轉移，患者失去了最佳的治療時機，導致肺癌的5年生存率未明顯提高[14]。有研究發現，原發性肺腺癌多起源于Ⅱ型肺泡上皮和支氣管無纖毛分泌細胞（即clara細胞），Ⅱ型肺泡上皮細胞功能復雜，除了分泌表面活性物質、Ⅳ型膠原（基底膜成分）和一些重要的酶類物質外，還具有分裂增殖的能力[15]。

TTF包括TTF-1和TTF-2兩種亞型[16]。TTF-l是在胚胎期和發育成熟的甲狀腺、肺上皮細胞中表達的一種38 kD的轉錄因子。TTF-1基因位于人染色體14q13位點，含有3個外顯子和1個內含子[17]。有研究表明，肺組織中，TTF-1控制表面蛋白A（surface protein A，SPA）、表面蛋白B（surface protein B，SPB）、表面蛋白C（surface protein C，SPC）和clara細胞分泌蛋白基因[18]。TTF-1是一種在肺的表面活性蛋白表達過程中起重要作用的轉錄因子，在多數肺腺癌中都有表達[19]。關于TTF-l的表達與NSCLC患者生存期關系的機制尚不十分清楚，已有研究表明，TTF-1蛋白的表達可用于鑒別肺腺癌與肺鱗癌、原發性肺癌與轉移性肺癌，尤其在原發性肺癌的診斷中，TTF-1的表達具有較高靈敏度和特異度[20-21]。

目前對TTF-1的表達與腫瘤發生、發展關系的研究并不多見。本研究采用免疫組織化學染色法檢測肺腺癌組織和癌旁正常組織中TTF-1蛋白的表達情況，并分析肺腺癌患者TNM分期、組織分化程度、病灶直徑、淋巴結轉移情況、EGFR表達情況與肺腺癌組織中TTF-1蛋白表達的關系。本研究結果顯示，在肺腺癌組織及癌旁正常組織中均可以發現TTF-1蛋白的陽性表達，提示TTF-1蛋白可能參與肺腺癌的發生、發展。肺腺癌組織中TTF-1蛋白的陽性表達率明顯高于癌旁正常組織（P＜0.01），提示TTF-1在促進肺癌發生的過程中發揮了重要作用，表明其對肺癌的診斷具有一定的價值。此外，本研究結果還顯示，中高分化、有淋巴結轉移、TNM分期為I+Ⅱ期肺腺癌患者肺腺癌組織中TTF-1蛋白的陽性表達率均明顯高于低分化、無淋巴結轉移、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期肺腺癌患者，差異均有統計學意義（P＜0.01），提示TTF-1與腫瘤分化程度、TNM分期、淋巴結轉移情況關系密切。不同病灶直徑、EGFR表達的肺腺癌患者肺腺癌組織中TTF-1蛋白的陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），提示TTF-1蛋白的陽性表達對病灶大小和EGFR的表達無影響。

綜上所述，TTF-1蛋白在肺腺癌組織中陽性表達率高，并且與患者的TNM分期、淋巴結轉移情況及組織分化程度密切相關。TTF-1蛋白在肺腺癌的發生、發展過程中發揮了重要的作用，對于肺腺癌患者的診斷及病情評估具有一定的參考價值，值得臨床深入探討。