血漿熱休克蛋白90α在肺癌中表達(dá)及臨床價(jià)值

姜 源，舒 靜，陳 敏

(1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)部,四川瀘州 646000；2.西南醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)系,四川瀘州 646000)

肺癌是我國(guó)目前最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率逐年上升，且其易復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移快，早診斷、早治療是提高患者生存期的關(guān)鍵因素。目前，診斷肺癌常用的方法有支氣管鏡檢查、CT掃描、PET-CT等，但檢查均較為繁瑣且耗時(shí)長(zhǎng)。而現(xiàn)有腫瘤標(biāo)志物對(duì)肺癌針對(duì)性較差，采用多種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)可提高肺癌早期診斷及其復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的檢出率。熱休克蛋白90α(heat shock protein 90alpha，Hsp90α)是由732個(gè)氨基酸構(gòu)成，相對(duì)分子質(zhì)量為87 000，能夠輔助蛋白折疊并維持細(xì)胞多種信號(hào)傳導(dǎo)蛋白的穩(wěn)定，從而促進(jìn)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)，是構(gòu)成人體細(xì)胞的關(guān)鍵伴侶蛋白[1]。WANG等[2]研究發(fā)現(xiàn)血漿Hsp90α表達(dá)水平與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，細(xì)胞Hsp90α的分泌量隨腫瘤惡性程度增高而升高，并認(rèn)為其可以作為腫瘤早期檢測(cè)及療效評(píng)估的一種新型腫瘤標(biāo)志物。因此，筆者檢測(cè)肺癌患者血漿Hsp90α表達(dá)水平，探討其在肺癌臨床診斷和治療中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年9月至2018年4月在西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院就診的各類癌癥患者269例，其中男150例，女119例，年齡44～77歲；其中乳腺癌53例，肝癌 86例，肺癌87 例(小細(xì)胞肺癌41例，鱗癌17例，腺癌29例)，白血病43例，均經(jīng)病理診斷及其他手段確診且未經(jīng)放化療。選取肺部良性疾病患者57 例，年齡48～73歲，其中支氣管炎患者22例，慢性阻塞性肺疾病17例，肺炎18例，并排除其他嚴(yán)重系統(tǒng)疾病及惡性腫瘤。另以同期30例健康體檢人員作為健康對(duì)照組，年齡22～28歲，經(jīng)證實(shí)均無(wú)心臟、肝、腎等其他系統(tǒng)疾病。

1.2方法

1.2.1樣本采集 采用真空采血管采集待檢者空腹靜脈血4 mL，2 mL乙二胺四乙酸二鉀(ethylene diamine tetraacetic acid-K2，EDTA-K2)抗凝血分離血漿用于Hsp90α測(cè)定，2 mL無(wú)抗凝劑靜脈血分離血清用于其他指標(biāo)檢測(cè)[癌胚抗原(CEA)、糖鏈抗原125(CA125)、細(xì)胞角質(zhì)蛋白19片段(CYFRA21-1)]。均嚴(yán)格按儀器及試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。

1.2.2檢測(cè)方法 采用煙臺(tái)普羅吉生物科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)的血漿Hsp90α酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA)檢測(cè)試劑盒測(cè)定待檢者血漿Hsp90α水平。選用羅氏Elecsys2010電化學(xué)發(fā)光儀與原裝配套試劑測(cè)定血清CEA、CA125及CYFRA21-1。操作步驟嚴(yán)格按儀器及試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1不同惡性腫瘤疾病組血漿Hsp90α表達(dá)水平比較 各惡性腫瘤疾病組血漿Hsp90α表達(dá)水平均明顯高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)圖1。

圖1 不同惡性腫瘤疾病組血漿Hsp90α表達(dá)水平比較

a:P<0.05,與健康對(duì)照組比較

2.2肺癌組、肺部良性疾病組、健康對(duì)照組血漿Hsp90α水平比較 各組血漿Hsp90α水平分別為：肺癌組(133.61±64.83)ng/mL、肺部良性疾病組(50.28±26.48)ng/mL、健康對(duì)照組(47.63±14.98)ng/mL。統(tǒng)計(jì)分析顯示，與肺部良性疾病組和健康對(duì)照組相比，肺癌組血漿Hsp90α水平顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與健康對(duì)照組相比，肺部良性疾病組血漿Hsp90α表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.271),見(jiàn)圖2。

圖2 肺癌組、肺部良性疾病組、健康對(duì)照組血漿Hsp90α水平比較

a:P<0.05,與健康對(duì)照組比較

2.3Hsp90α對(duì)肺癌診斷價(jià)值評(píng)估 ROC曲線分析顯示，血漿Hsp90α在肺癌診斷中的最佳臨界值為61.37 ng/mL，當(dāng)以最佳臨界值作為cut-off值時(shí)，其靈敏度為93.10%，特異度為62.50%，ROC曲線下面積為0.857。表明Hsp90α檢測(cè)在肺癌診斷中具有較高的靈敏性，在肺癌早期診斷中具有一定臨床意義，見(jiàn)圖3。

圖3 Hsp90α診斷肺癌的ROC曲線分析

2.4多種標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺癌的靈敏度及特異度的影響 結(jié)果顯示，CEA、CA125、CYFRA21-1單項(xiàng)檢測(cè)在肺癌診斷中的靈敏度分別為58.62%、55.17%和51.72%；靈敏度最高的2項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)為CEA+CA125(74.71%)；3項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)Hsp90α+CEA+CA125的靈敏度最高(86.21%)；Hsp90α+CEA+CA125+CYFRA21-1的4項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)在所有聯(lián)合檢測(cè)中的靈敏度最高(88.51%)，見(jiàn)表1。

表1 腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺癌的靈敏度和特異度(%)

3 討 論

肺癌嚴(yán)重威脅著人類生命健康。近年來(lái)，我國(guó)肺癌的發(fā)病率和病死率已居惡性腫瘤之首，預(yù)計(jì)到2025年，我國(guó)新發(fā)肺癌病例人數(shù)將超過(guò)100萬(wàn)，盡管臨床已規(guī)范化治療，但預(yù)后仍較差，5年生存率仍較低[3-4]。血清CA153、CEA、CA125、CYFRA是輔助診斷肺癌較常用的腫瘤標(biāo)志物，但早期輔助診斷肺癌的靈敏度和特異度均欠佳[1]。

Hsp90α是機(jī)體在應(yīng)激狀態(tài)下合成的一組蛋白質(zhì)分子，主要作為分子伴侶參與蛋白的合成、折疊和調(diào)控細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)蛋白功能穩(wěn)定，是細(xì)胞內(nèi)關(guān)鍵信號(hào)通路或細(xì)胞轉(zhuǎn)錄的調(diào)控者[5]。新近研究發(fā)現(xiàn)：分泌的Hsp90α能夠激活基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)，并能協(xié)助MMP-2的成熟，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移[6-8]。此外，研究表明，癌癥患者血漿中Hsp90α的水平與腫瘤發(fā)生發(fā)展、生物學(xué)行為及預(yù)后具有顯著的相關(guān)性[2]， Hsp90α抑制劑可在腫瘤生長(zhǎng)信號(hào)通路中降解效應(yīng)蛋白，阻斷腫瘤增殖信號(hào)通路的多個(gè)靶點(diǎn)，抑制腫瘤的生長(zhǎng)，增強(qiáng)癌細(xì)胞對(duì)抗癌藥物的敏感性[9-10]，因此Hsp90α已成為抗癌藥物作用的靶點(diǎn)。本研究入組了肺癌、肝癌、白血病、良性肺部疾病和體檢者為研究對(duì)象，評(píng)估各組血漿中Hsp90α水平，以探討希望評(píng)價(jià)血漿中Hsp90α是否能作為診斷肺癌的一種新型生物標(biāo)志物。同時(shí)，筆者進(jìn)一步分析了Hsp90α聯(lián)合其他腫瘤標(biāo)記物診斷肺癌的靈敏度及特異度，以提高早期診斷肺癌的效能。

為了檢測(cè)Hsp90α與惡性腫瘤的相關(guān)性，筆者分別檢測(cè)了惡性腫瘤疾病組(肺癌、白血病、肝癌、乳腺癌)及健康對(duì)照組血漿中Hsp90α表達(dá)水平。結(jié)果顯示，惡性腫瘤疾病組血漿Hsp90α水平均顯著高于健康對(duì)照組(P<0.01)。 此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，肺癌組血漿Hsp90α水平顯著高于肺部良性疾病組和健康對(duì)照組(P<0.01)。這些結(jié)果表明，Hsp90α水平在惡性腫瘤血漿中明顯升高，具有良好的廣譜性，可以作為早期診斷惡性腫瘤的通用指標(biāo)。

此外，本研究構(gòu)建了ROC曲線，結(jié)果顯示，血漿Hsp90α在肺癌診斷中的最佳臨界值為61.37 ng/mL，當(dāng)以最佳臨界值作為cut-off值時(shí)，其靈敏度為93.10%，特異度為62.50%，ROC曲線下面積為0.857，這表明血漿Hsp90α具有較好的靈敏度，但特異度不高，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[2,11]。為進(jìn)一步提高肺癌的診斷效能，筆者還評(píng)估了單項(xiàng)腫瘤標(biāo)記物及多項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)在肺癌診斷中的靈敏度和特異度。CEA是一類具有人類胚胎抗原決定簇的酸性糖蛋白，是最早診斷肺癌的常用腫瘤標(biāo)志物之一，其作為肺癌標(biāo)志物的靈敏度為35%～77%[12]；CA125作為一種糖類抗原，是廣泛應(yīng)用于上皮性卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌診斷的腫瘤標(biāo)志物。研究結(jié)果顯示，肺癌患者血清CA125水平增高明顯，且CA125的增高程度與肺癌組織病理分期呈正相關(guān)[13]。CYFRA21-1為細(xì)胞角蛋白-19的片段，其水平在上皮組織來(lái)源的腫瘤組織中明顯增高，是診斷非小細(xì)胞肺癌較敏感的腫瘤標(biāo)志物[14]。本研究結(jié)果顯示，在肺癌診斷中單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)的靈敏度分別為CEA(58.62%)、CA125(55.17%)和CYFRA21-1(51.72%)；CEA+CA125在2項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)中靈敏度最高(74.71%)；在3項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)中靈敏度最高的為Hsp90α+CEA+CA125(86.21%)；均低于4項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物(Hsp90α+CEA+CA125+CYFRA21-1)聯(lián)合檢測(cè)的敏感性(88.51%)。因此，血漿Hsp90α可以作為一個(gè)潛在的肺癌腫瘤標(biāo)志物，具有輔助診斷肺癌的作用，聯(lián)合其他肺癌標(biāo)志物檢測(cè)可顯著提高肺癌的檢出率。

研究表明，在腫瘤進(jìn)展的不同階段，血漿Hsp90α的表達(dá)情況也有相應(yīng)改變[15]。因此，后續(xù)研究將對(duì)血漿Hsp90α在肺癌病理分期、治療及預(yù)后判斷等方面的應(yīng)用作進(jìn)一步探討。總之，血漿Hsp90α是一個(gè)潛在的肺癌腫瘤標(biāo)志物，具有輔助診斷肺癌的作用，其聯(lián)合肺癌標(biāo)志物檢測(cè)可顯著提高肺癌的檢出率，為肺癌的早期診斷、治療和預(yù)后判斷提供有力的依據(jù)。