消化系統腫瘤與MTHFR基因多態性相關研究

程筱雯，李　潔，徐元宏

亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolate reductase, MTHFR)在代謝葉酸的生理過程中發揮著重要作用。MTHFR 基因突變會導致機體內環境發生紊亂，包括DNA復制、甲基化修飾等發生異常，MTHFR基因第4外顯子的C677T位點的突變是最常見的，是引起編碼酶缺乏或活性下降的最常見原因。已有報道[1-2]表明由于MTHFR 基因C677T突變可導致編碼酶活性下降、DNA甲基化異常，從而促進癌癥發生。MTHFR 基因的多態性與結直腸癌、胃癌及肝癌等多種消化系統惡性腫瘤的易感性聯系緊密[2-4]。該研究旨在了解消化系統惡性腫瘤患者群體MTHFR基因C677T位點的基因多態性的頻數分布差異，并分析年齡、性別、體重指數(body mass index, BMI)對MTHFR 基因C677T位點遺傳多態性發生頻率的影響。

1　材料與方法

1.1病例資料選取安徽醫科大學第一附屬醫院干部病房外科2016年11月～2017年9月收住院且確診的消化系統惡性腫瘤患者42例，其中男29例，女13例，年齡44～89歲。

1.2標本類型外周全血(EDTA-K2抗凝)。

1.3儀器實時熒光定量PCR儀(Roche Cobas z480);芯片雜交儀(上海百傲)。

1.4試劑MTHFR基因型檢測試劑盒(上海百傲)。

1.5檢驗方法定性PCR+基因芯片法。實驗流程嚴格按試劑盒說明書操作步驟進行。

1.6統計學處理采用SPSS 20.0軟件進行分析，運用單樣本Kolmogorov-Smirnov法進行擬合優度檢驗和頻數統計尋找優勢基因型，運用χ2檢驗研究性別對基因型頻率的影響，運用單因素方差分析(One-Way ANOVA)分別研究年齡和BMI對基因型頻率的影響。

2　結果

2.1消化系統惡性腫瘤MTHFRC677T的基因型分布情況本研究中檢測MTHFR基因677位點的3種不同基因型，結果檢出野生型純合子CC型13例(30.95%)，突變雜合子型CT型24例(57.14%)，突變純合子型TT型5例(11.91%)；運用單樣本Kolmogorov-Smirnov法進行擬合優度檢驗尋找優勢基因型，結果顯示，χ2=2.469，P<0.001，說明三種基因型出現頻率不服從均勻分布，存在優勢基因，對三種基因型進行頻數統計顯示，CT型為優勢基因型，占總數的57.14%。

2.2性別、年齡、BMI對MTHFR基因C677T遺傳多態性的影響運用χ2檢驗研究性別對基因型的影響，運用One-Way ANOVA分別研究年齡和BMI對基因型的影響，結果可以認為在本次研究的42例消化道惡性腫瘤患者，MTHFR C677T 的3種不同基因型在不同性別、年齡和體重指數的發生頻率方面差異無統計學意義，見表1。

3　討論

MTHFR是調節葉酸代謝的關鍵酶，葉酸代謝障礙會導致DNA低甲基化，而DNA的低甲基化則與腫瘤的發生密切相關。MTHFR基因677位點存在遺傳多態性：野生型純合CC型，突變雜合CT型和突變純合TT型，多項對MTHFR基因多態性與人類腫瘤相關性的研究[5-6]顯示，MTHFR基因677位點的基因多態性與胃癌、結直腸癌等多種消化系統惡性腫瘤的易感性存在密切聯系，不過研究結果卻有所不同，有報道提示高T677T基因頻率發生食管癌的風險遠遠高于C677C型，認為MTHFR T677T基因型可能是食管癌的一個易感因素，而另有研究[7]認為MTHFR C677T基因多態性可能與新疆哈薩克族與漢族食管癌的易感性無關。本次研究中以安徽地區消化系統惡性腫瘤患者為研究對象，發現MTHFR基因677T位點的基因型以CT型為優勢基因型，且具有統計學意義，與已有報道不盡相同，多數研究結果顯示TT型是癌癥患者的主要型別，同時本研究初步得到的結論是性別、年齡和BMI可能不是MTHFR基因C677T位點基因遺傳多態性發生頻率的主要影響因素，出現這種差異，筆者認為可能與種族和地域的差異有關。接下來的研究方向就是擴大樣本量，建立正常對照以進一步驗證本次研究結果，同時收集流行病學相關資料，增加飲食習慣等環境因素分析、對化療藥物敏感性及患者生存率的分析，深入研究MTHFR基因677位點基因多態性與消化系統惡性腫瘤發生的相關性。基因多態性也可能造成不同個體對同一種藥物出現不同反應，所以基因多態性及多基因的聯合檢測對于制定個體化治療方案勢在必行[8]。

精準醫療是未來醫學發展的方向，對基因多態性與疾病的相關性及其機理進行深入研究，對于不同疾病的預防及個體化治療均具有重要指導意義。