肺移植缺血再灌注損傷肺保護的研究

姜文波，劉爭楊，楊 睿，姜平秀

（大慶龍南醫院，黑龍江 大慶 163453）

肺移植手術已成為治療終末期肺病的唯一有效手段。盡管已有許多改進措施，做為肺移植術后常見并發癥，缺血再灌注損傷（IRI）或原發性移植肺衰竭仍是導致手術失敗的主要原因之一。IRI是急性肺損傷的一種，通過研究缺血再灌注肺損傷的發生機制、所能采取的肺保護措施的研究（自由基清除劑的應用、鈣拮抗劑的應用、與NO有關的炎癥介質等），為臨床肺移植在缺血再灌注損傷的控制上提供啟示和借鑒，進而提供理論依據，更為肺移植術技術的逐漸完善奠定基礎。

1 研究內容

應用大鼠離體肺灌注模型，依據肺移植術后再灌注肺損傷的可能機制，給予相關預處理，與對照組比較得出肺缺血再灌注損傷的研究可能預期結果。依據現有條件，我們將對以下三項內容進行試驗及研究。

（1）研究應用自由基清除劑（free radical scavenger，FRS）后對肺移植術后缺血再灌注損傷是否有減輕；（2）研究鈣拮抗劑的運用后對肺移植術后缺血再灌注損傷是否有緩解；（3）研究通過補充外來源NO（靜脈滴注硝酸甘油或NO氣體），對于肺移植術后缺血再灌注損傷是否有緩解。

2 擬解決的問題

（1）正確建立合理大鼠的離體肺灌注模型；（2）病理切片制作技術，western-blot技術，酶聯免疫吸附試驗技術等的應用；（3）小動物呼吸機的使用，保證實驗動物的存活率，減少或避免因操作失誤導致的失敗。

3 創新點

缺血再灌注損傷在全國范圍內已研究很多，但我省目前仍為空缺（經過查新報告可證明），對于肺移植術后肺缺血再灌注損傷的研究目前省內亦是空缺，現已證明肺移植術后影響術后早期肺功能的主要因素。

4 研究方法

4.1 實驗動物

選用實驗動物中心提供的SD雄性大鼠32只，體重250～300 g，隨機配對成16對。

4.2 對照組分組

自由基清除劑（維生素C）組、鈣通道拮抗劑（地爾硫卓）組、補充外源性NO（硝酸甘油和NO氣體）組

4.3 檢測指標和方法

（1）動脈血氣取移植肺靜脈血0.3 mL，行血氣分析。（2）病理（冰凍）切片：經固定、沉糖、冰凍、切片、染色、封片等處理后，觀察不同組別雙肺組織光鏡下形態學改變。光鏡下觀察肺泡的結構、中性粒細胞的浸潤、毛細血管內紅細胞的數目以及肺泡水腫、出血、滲出的程度等。（3）濕干重比（W/D）測定肺組織用電子天平稱重為濕重。60℃烘96 h后稱重為干重，計算濕干重比。（4）蛋白印跡（Western blot）分析：取不同組別移植左肺組織，測定不同組別肺泡表面活性物質蛋白（SPA、SPB）、細胞凋亡指標（bcl-2、bax）的改變。（5）酶聯免疫吸附實驗：檢測不同組別移植術后的左肺組織氧化應激指標（SOD、MDA）和炎性因子（TNF-a，IL-6）的變化及不同。

5 實驗方案

5.1 實驗動物

選用實驗動物中心提供的SD雄性大鼠32只，體重250～300 g，實驗前12小時禁食水。

5.2 動物分組

分四組（如前述）。

5.3 動物操作及取材

（1）模型建立：動物麻醉，術中呼吸管理，游離供體左肺動脈、靜脈，血管腔內分別置人18號（內徑1.3ram）、16號（內徑1.5 mm）的套管，外用6～0絲線結扎固定。游離左主支氣管，于隆凸處結扎，切除氣管及心臟、右肺組織，左肺于4℃的Euro-collins溶液保存4 h（自取下供體心肺組織開始計時），直至移植。移植前于近結扎處剪斷支氣管，置人塑料軟管（內徑1.6 mm）外用6～0絲線固定。

（2）受體手術：麻醉及氣管插管均同供體，吸人體積百分比為100的氧氣。大鼠右側臥位于手術臺上，于第5肋間進胸，暴露并切斷左肺下韌帶，暴露左肺門，游離左肺動、靜脈和左主支氣管，以3～0絲線盡量靠遠端結扎左主支氣管、左肺動脈及左肺靜脈的2個分支。供體肺各套管分別套人相應的結構，以6～0絲線固定套管。套管順序為先動脈，后支氣管，最后靜脈。剪斷受體肺門遠端，剪下受體之左肺。依次開放靜脈、動脈和支氣管。

6 統計學方法

所有數據均以（±s表示，采用SPSS 13.0軟件包進行統計學分析。驗收指標：應用大鼠離體肺灌注模型，依據肺移植術后再灌注肺損傷的可能機制，分別應用自由基清除劑（free radical scavenger，FRS）、鈣通道拮抗劑（地爾硫卓）、NO（硝酸甘油或NO氣體），通過得出結論了解應用自由基清除劑對肺移植術后缺血再灌注損傷的影響。