胰島素樣生長因子結合蛋白-6在類風濕關節炎患者外周血中的表達及意義

孫莉，王曉非

（中國醫科大學附屬盛京醫院風濕免疫科，沈陽 110004）

類風濕關節炎（rheumatoid arthritis，RA）是常見的自身免疫性疾病，主要表現為對稱性小關節持續性腫痛，其發病機制復雜，至今仍在不斷探索中。滑膜炎和血管翳是RA主要的病理特征。滑膜增生、血管翳形成以及免疫細胞過度遷移、凋亡減少共同作用，導致關節局部炎癥長期持續存在，引起關節腫痛甚至畸形、活動障礙，嚴重影響患者的工作及生活，其中血管翳是骨侵蝕的關鍵因素。血管內皮生長因子（vascular endothecial growth facror，VEGF）作為促進血管形成的最重要的細胞因子，可直接促進血管內皮細胞增殖，與RA血管翳的形成密切相關［1］。胰島素樣生長因子結合蛋白-6（insulin-like growth factor binding protein-6，IGFBP-6）是胰島素樣生長因子-2（insulin-like growth factor-2，IGF-2）的主要調節因子，近年研究［2］新發現，IGFBP-6具有獨立于IGF-2的功能，包括抑制血管新生、促進細胞遷移。研究［3］發現，IGFBP-6可通過抑制VEGF的功能而抑制血管新生。KARTHIKEYAN等［4］發現RA患者血液中含有IGFBP-6抗體，提示RA體內存在IGFBP-6表達異常。但目前國內外關于IGFBP-6在自身免疫性疾病中的研究較少，本研究旨在通過檢測RA患者外周血IGFBP-6表達水平，分析IGFBP-6水平與實驗室指標和疾病活動度的相關性，探討IGFBP-6在RA發病機制中的作用和臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年5月至2018年7月于中國醫科大學附屬盛京醫院風濕免疫科住院的RA患者43例作為RA組，所有入選患者均符合2010年美國風濕病學會/歐洲抗風濕病聯盟的RA診斷分類標準，其中男12例，女31例，平均年齡為（51.9±12.5）歲，均未接受過系統治療。選擇同期我院體檢中心的健康體檢者25例作為健康對照組，其中男8例，女17例，平均年齡（46.7±10.4）歲。排除標準：合并原發性心臟、肝臟、腎臟等器質性病變患者；合并原發性血液系統疾病患者；合并腫瘤、嚴重感染等并發癥患者；合并其他自身免疫性疾病患者；妊娠期及哺乳期患者。RA組與健康對照組年齡、性別構成的差異無統計學意義（P＞ 0.05）。本研究獲得我院倫理委員會批準。

1.2 數據收集

收集RA患者的臨床資料及實驗室指標，包括腫脹關節數（swollen joint count，SJC）、壓痛關節數（tender joint count，TJC）及視覺模擬評分法（visual analogue scale，VAS）疼痛評分、C反應蛋白（C-reactive protein，CRP）、紅細胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR）、類風濕因子（rheumatoid factor，RF）、抗環瓜氨酸肽（cyclic cirullinated peptide，CCP）抗體、血紅蛋白（hemoglobin，Hb）、血小板（platelet，PLT），計算28個關節疾病活動度評分（disease activity score in 28 joints，DAS28）。

1.3 分組

根據DAS28將RA患者分為高疾病活動組（DAS28＞5.1）、中疾病活動組（DAS28 3.2～≤5.1）和低疾病活動組（DAS28≤3.2）。不同疾病活動度組間患者年齡及病程的差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.4 方法

在研究對象知情同意的前提下，分別采集RA患者及健康體檢者清晨空腹靜脈血3 mL，1 000g離心10 min后取上清液，置于PC管中-20 ℃冰箱中保存待檢。采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法同批檢測血清IGFBP-6濃度，嚴格按照試劑盒（美國Aviva Systems Biology公司）說明書程序進行操作。酶標儀450 nm波長下測光密度值，繪制標準曲線，計算IGFBP-6濃度值。

1.5 統計學分析

應用SPSS 22.0軟件進行統計學分析，計量資料以±s表示，2組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析。計數資料以率表示，2組間比較采用χ2檢驗。IGFBP-6與DAS28、CRP、ESR等指標的相關性采用Pearson相關分析法。P＜ 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 RA組和健康對照組外周血中IGFBP-6的表達水平

RA組和健康對照組外周血IGFBP-6水平分為（428.03±109.43）和（763.27±159.08）ng/mL，RA組明顯低于健康對照組，差異有統計學意義（P＜ 0.001）。

2.2 各疾病活動度組和健康對照組外周血IGFBP-6的表達水平

低、中及高疾病活動組外周血IGFBP-6水平分別為（510.73 ± 107.34）、（439.62 ± 112.91）、（382.70 ± 86.00）ng/mL，均明顯低于健康對照組，差異均有統計學意義（P＜ 0.001）。且低疾病活動組的IGFBP-6水平顯著高于高疾病活動組，差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.3 RA組IGFBP-6的表達水平與實驗室指標及DAS28的相關性

RA組中，IGFBP-6的水平與Hb呈正相關（r=0.429，P=0.004），與PLT（r=-0.378，P=0.012）、ESR（r=-0.399，P=0.008）、DAS28（r=-0.397，P=0.008）呈負相關（P＜ 0.05），與CRP（r=-0.282，P=0.067）、抗CCP抗體（r=0.137，P=0.395）和RF（r=-0.100，P=0.525）的相關性無統計學意義。

3 討論

RA是常見的系統性炎癥性疾病，病情反復加重，逐漸進展，關節是最主要的受累部位，并可伴有血液、神經、心血管、皮膚、肺、胃腸道、腎臟等多器官系統表現。女性明顯多于男性，全球患病率約1%［5］，2016年我國的患病率為0.33%～0.37%［6］。RA確切的發病機制尚不十分明確，迄今尚無根治方法，控制炎癥活動、減緩疾病進展、預防關節破壞是主要治療目標。

IGFBP-6是IGF家族的重要成員，廣泛存在于人體組織細胞及體液中，能夠相對特異性與IGF-2結合，抑制IGF-2介導的促進細胞生長、增殖、分化的生理功能。既往IGFBP-6相關研究主要集中于腫瘤學。但隨著研究的深入，發現IGFBP-6能夠促進細胞遷移［7］、調節中性粒細胞活性［8］，提示IGFBP-6參與調節免疫炎癥反應。免疫紊亂是RA發病的主要機制。在RA發生發展過程中，血管新生是關節炎癥的早期關鍵事件，是促進炎癥細胞浸潤、形成和維持血管翳及導致關節慢性炎癥持續存在的重要因素，貫穿關節炎病理過程始終［9］。血管翳主要由異常增生的滑膜細胞、新生血管及炎性細胞組成，具有“類腫瘤樣”性質，能夠侵襲軟骨及軟骨下骨組織，導致關節不可逆性破壞、畸形、功能喪失。VEGF是促進血管形成的最重要的細胞因子。RA受累關節中VEGF過度表達，不僅通過直接促進血管內皮細胞增殖參與形成血管翳，也作為炎性細胞因子上調金屬蛋白酶表達，引起一系列炎癥反應。研究［2］發現，IGFBP-6可通過IGF-2獨立途徑抑制多系統腫瘤血管新生。ZHANG等［3］發現內皮細胞中低氧誘導因子-1α誘導的低氧環境可促進IGFBP-6表達，而IGFBP-6過表達反而抑制了血管生成，提示IGFBP-6可能參與低氧誘導的血管生成的負反饋調節，進一步實驗發現IGFBP-6與VEGF共同作用于血管內皮細胞時抑制了VEGF對血管生成的刺激作用，證實了IGFBP-6通過VEGF發揮抑制血管生成的功能。本研究發現RA各疾病活動組的IGFBP-6水平均顯著低于健康對照組，高疾病活動組的IGFBP-6水平明顯低于低疾病活動組，且相關分析顯示RA組外周血IGFBP-6水平與DAS28呈負相關，提示IGFBP-6可能是RA的保護性細胞因子。結合既往研究，推測RA患者IGFBP-6水平降低可能是由于體內存在異常IGFBP-6抗體［4］，而IGFBP-6由于水平下降對VEGF的抑制作用減弱，血管翳形成，導致RA關節破壞。但IGFBP-6在RA發病機制中的具體作用途徑及水平下降的原因，尚需進一步實驗證實。

RA是慢性炎癥性疾病，疾病活動度對評估預后、指導治療具有重要意義。CRP、ESR是臨床常用的經典的炎癥指標，也是RA的診斷標準之一，在RA的診斷及病情評估中具有重要地位。DAS28是目前國內外公認的RA病情評估指標，能夠綜合分析臨床表現、實驗室指標，更穩定、全面的評估RA疾病活動度。本研究發現，隨著ESR和DAS28升高，外周血IGFBP-6水平逐漸下降，結果提示外周血IGFBP-6水平可在一定程度上反映RA疾病活動度，但特異度及敏感度有待進一步探索。血液系統改變是RA常見的關節外表現，可表現為多系統受損，其中血小板升高、貧血較為常見，并多出現于RA疾病活動期。MLLER等［10］發現Hb與疾病活動度呈負相關，TEKEOLU等［11］發現PLT與疾病活動度呈正相關。本研究發現外RA組周血IGFBP-6水平與Hb呈正相關，與PLT呈負相關，側面證實了外周血IGFBP-6水平與RA疾病活動度的關系。但IGFBP-6是否直接影響Hb和PLT水平，尚需進一步探索。

自身抗體的產生既是RA的疾病特點，也在RA的發生發展過程中發揮重要作用。RF和抗CCP抗體是RA常見的自身抗體，研究［12］表明，RA患者抗CCP抗體陽性率高達75.6%，RF陽性率高達61.5%。RF是抗變性IgG的抗體，RF陽性患者多伴有關節外表現，如皮下結節、血管炎。在診斷方面，抗CCP抗體的敏感度和特異度比RF高。二者皆被納入2010年美國風濕病學會/歐洲抗風濕病聯盟的RA診斷標準。RF和抗CCP抗體不僅可用于診斷RA，其滴度高低還可以反映RA病情，研究［13］發現二者滴度與RA臨床表現、疾病活動度、疾病進程和預后密切相關。但本研究未發現IGFBP-6與RF、抗CCP抗體有相關性，可能與本研究例數較少有關，可進一步擴大樣本量繼續研究。

綜上所述，在RA患者中，外周血IGFBP-6可能在RA發生發展過程中發揮保護性作用，同時外周血IGFBP-6水平對判定RA疾病活動度具有一定意義，IGFBP-6可能是RA診斷、病情評估的輔助指標。目前臨床上有部分患者經充分治療仍不能達到病情緩解，提示仍有未知因素參與RA發病機制，而IGFBP-6可能是RA發病過程中潛在的保護因素，有望為RA的治療提供新手段。