3種培養基對動物飼料微生物檢驗的影響

鄧艷芳 王偉 徐成體 魏希杰

（1，青海省草原總站 810008；2，青海省畜牧獸醫科學院 810008）

飼料作為動物的主要食物，其質量直接關系著動物品質的高低。飼料中含有豐富的營養成分，因而飼料在加工、運輸及儲藏過程中極容易遭到微生物的感染，在降低飼料營養價值的同時也容易對動物健康造成威脅。微生物指標作為飼料標準中的一個重要內容，其實際測定過程中的培養基可以根據相關標準由實驗室自制。或者通過購買市售的商品化培養基。本文分別采用自制及購買的不同培養基對3種飼料菌落及霉菌總數進行測定，從而驗證自制及市購成品培養基對飼料微生物學檢驗結果的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗飼料分別從北京科奧協力飼料有限公司購入SPF 大小鼠生長繁殖飼料、兔維持飼料及犬維持飼料。

1.1.2 實驗試劑

平板計數瓊脂、營養瓊芝、馬鈴薯-葡萄糖瓊脂、孟加拉紅培養基葡萄糖瓊脂粉及酵母膏購于北京奧博星生物技術有限責任公司；胰蛋白胨、葡萄糖及瓊脂粉購于國藥集團化學試劑有限公司；氯霉素購于北京索萊寶科技有限公司。

1.1.3 實驗儀器

LDZH-100KBS 不銹鋼立式滅菌器（上海申安醫療器械廠）；TXB622L 電子天平（島津企業管理有限公司）；LRH-450F 生化培養箱（上海捷呈實驗儀器有限公司）；BMJ-250C霉菌培養箱（上海博訊實業有限公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 菌落總數檢驗培養基

（1） 自制平板計數瓊脂培養基

分別稱取5g 胰蛋白胨，2.5g 酵母浸膏，1.0g 葡萄糖以及15.0g 瓊脂，加水至1L，在121℃下高壓滅菌15min。

（2） 市購成品平板計數瓊脂培養基

稱取23.5g 的平板計數培養基，加水至1L，在121℃下高壓滅菌15min。

（3） 市購成品營養瓊脂

稱取32g 營養瓊脂，加水至1L，121℃下高壓滅菌15min。

1.2.2 霉菌總數檢驗培養基

（1） 自制馬鈴薯—葡萄糖瓊脂

將馬鈴薯去皮并切塊后，加入1L 的純水煮沸20min，并用紗布進行過濾。稱取300g 的馬鈴薯、20g 的葡萄糖、20g 的瓊脂及0.1g 的氯霉素，加水至1L 后高壓滅菌20min。

（2） 市購成品馬鈴薯-葡萄糖瓊脂

稱取38g 馬鈴薯-葡萄糖瓊脂，加水至1L 后在121℃下高壓滅菌20min。

（3） 市購成品孟加拉紅培養基

稱取35g 孟加拉紅培養基，加水至1L 后在121℃下高壓滅菌20min。

1.2.3 菌落及樣品總數檢驗

（1） 樣品稀釋

在無菌條件下稱取25.0g 飼料，加到裝有225ml 氯化鈉注射液的錐形瓶中，充分振蕩后制成1∶10 的樣品勻液；取1ml 1∶10 的樣品勻液加到裝有9ml 氯化鈉注射液的試管內，充分震蕩制成1∶100 的樣品勻液；取1ml 1∶100 的樣品勻液，并加入含有9ml 的氯化鈉注射液的試管內，充分震蕩形成1∶1000 的樣品勻液。分別取1ml 的氯化鈉注射液及各個稀釋樣品勻液加入無菌培養皿中，做3 次重復。

（2） 培養

分別將冷卻后的培養基傾注至平皿內，轉動平皿使其充分混合。將菌落總數檢驗培養基置于生化培養箱內在36℃下培養48h，將霉菌總數檢驗培養基置于霉菌培養箱內在28℃下培養5d。

2 實驗結果

通過對不同動物飼料菌落總數進行檢測，結果表明，3種培養基大小鼠生長繁殖飼料各個稀釋液均沒有菌落生長；兔維持飼料1∶10 的稀釋比例菌落總數均多不可數，1∶100 稀釋比例下自制平板、市購成品平板以及市購成品營養瓊脂的菌落總數分別為79.33±8.02、80.38±7.54、78.21±5.67，1∶1000 的稀釋比例下3種培養基上的菌落總數分別為29.85±2.34、30.25±2.83、27.21±2.66，各培養基上細菌總數均無統計學差異（p＞0.05）；對于犬維持飼料，1∶10 的稀釋比例下自制平板、市購成品平板及市購成品營養瓊脂的菌落總數分別為49.78±7.88、51.05±9.04、48.23±8.93，1∶100 稀釋比例下分別為15.23±4.03、16.02±2.78、14.17±3.05；1∶1000 的稀釋比例下分別為2.01±0.89、1.73±1.02、1.17±0.98，各個稀釋比例3種培養基上細菌總數均無統計學差異（p＞0.05）。

不同飼料霉菌總數檢測結果表明，對SPF 大小鼠繁殖飼料，3種不同的飼料各稀釋比例均沒有霉菌生長；兔維持飼料1∶10 稀釋比例下自制馬鈴薯-葡萄糖瓊脂、市購成品馬鈴薯-葡萄糖瓊脂及市購成品孟加拉紅培養基上霉菌總數分別為3.88±1.53、3.56±1.78、3.56±0.69，1∶100 稀釋比例下分別為0.29±0.47、0.58±0.45、0.58±0.45，3種培養基上霉菌總數均無統計學意義（p＞0.05），1∶1000 比例下3種培養基均沒有霉菌生長；對于犬維持飼料，1∶1000 比例3種培養基均無霉菌生長，1∶10的稀釋比例下3種培養基上霉菌總數分別為2.02±0.48、1.95±0.02、1.93±0.87，1∶100 稀釋比例下依次為0.24±0.44、0.53±0.49、0.23±0.47，3種培養基霉菌總數均不無統計學意義（p＞0.05）。

3 結論與討論

本實驗結果表明，對于SPF 大小鼠繁殖飼料、兔維持飼料及犬維持飼料，其不同培養基之間1∶10，1∶100 及1∶1000 3 個稀釋比例的菌落及霉菌總數均不存在統計學意義。營養瓊脂培養基測得的菌落總數略低于平板計數培養基，可能是由于平板計數培養基的營養成分更為優異。