醫學實驗室不同檢測人員檢測結果的可比性探討

盧紅玉 董家書*

（1 南寧市第六人民醫院檢驗科，廣西 南寧 530003；2 廣西醫科大學第四附屬醫院檢驗科，廣西 柳州 545005）

實驗室人員可比性試驗是按照預先規定的條件，由兩個或多個檢驗人員對相同的試驗樣品進行檢測，識別實驗室檢驗人員存在的問題與確定實驗室檢驗人員能力。是判斷和監控實驗室檢驗人員能力的有效手段之一。特別是新入職人員，可用比對試驗的結果來監測培訓的效果，決定是否予以相應的授權。人員比對也是人員能力評估的一項重要的評估內容。為了評價人員間檢測結果的可比性，需對人員檢測結果進行可比性實驗，也是CNAS-CL02《醫學實驗室質量和能力認可準則》的要求[1]，也是國家認可委評審專家進入現場評審時，現場實驗內容中的一部分。由此可見，人員檢測結果比對是一項重要的實驗室活動。現將本實驗室部分可比性試驗，按專業敘述如下。

1 人員比對項目

1.1 臨床基礎檢驗專業：新鮮血液細胞學涂片分類計數；新鮮尿液有形成分顯微鏡檢查；形態學顯微攝像照片考核；女性分泌物顯微鏡檢查；血小板手工計數。

1.2 臨床免疫學檢驗專業：同一項目2人以上操作的比對。

1.3 臨床微生物學檢驗專業：新鮮臨床標本涂片顯微鏡檢查比對；抑菌圈測量；細菌分離鑒定。

1.4 基因診斷（PCR）實驗室：每年至少比對1次。定性項目檢測人員比對；定量項目檢測人員比對。

2 人員比對標本的選取、比對流程和判斷標準

2.1 臨床基礎檢驗

2.1.1 血液細胞學涂片：每6個月選取5份血液細胞分析新鮮標本，要求含中性桿狀粒細胞、中性分葉核粒細胞、嗜酸性細胞、嗜堿性細胞、淋巴細胞、單核細胞、異型淋巴細胞，其中1份含有晚幼紅細胞，另1份含少量未成熟白細胞。由3名有經驗人員分類，取均值作為靶值，將每人結果與靶值進行比較[2-3]，結果在WS/T246-2005[4]《白細胞分類計數參考方法》附錄B范圍內為合格。各類細胞5份有4份合格為通過。

2.1.2 尿液有形成分：每6個月用5份新鮮尿液標本各10 mL，用標準離心管按1000轉/分離心5 min，棄去上層，留取管底0.2 mL作為人員比對材料。各自涂片并蓋上要求規格的蓋玻片[5]鏡檢，各自報告鏡檢結果。以1名實驗室最有經驗者的結果為標準，其他人員結果分別與其比較，結果陽性不能為陰性，陰性不能為陽性，陽性在1個量級內為符合，符合率≥80%[6]為合格。

2.1.3 形態學顯微照片：每6個月由組長挑選室間質評或電子圖譜等的寄生蟲/尿沉渣/血液細胞電子圖片各15張，參比人員獨立判斷箭頭所指物質或細胞名稱，填入答題卡上交組長。判斷標準：寄生蟲/尿沉渣/血液細胞圖片與正確結果相符≥80%[7]為通過。

2.1.4 血小板（PLT）手工計數人員比對：每6個月由組長隨機選取儀器檢測后的患者新鮮標本5份（要求PLT直方圖峰正常、PLT結果后無標記），另用血常規標本采集管換裝（對于參加比對的人員來說為盲樣）。由操作人員從標本稀釋開始到結果報告獨立完成。與儀器結果比較，相對偏差≤15%[8]或絕對偏差≤20×109/L為合格。5份有4份滿足要求為比對通過。

2.1.5 女性分泌物顯微鏡檢查比對：每6個月用5份女性分泌物標本進行比對，標本要求新鮮采集。比對人員各自涂片鏡檢，記錄結果，與1名經驗豐富者檢測的結果為參照。霉菌、滴蟲、線索細胞、革蘭陰性雙球菌的檢測結果陽性不能出現陰性，陰性不能出現陽性，清潔度、白細胞、上皮細胞可上下1個計量級。符合率≥80%為合格。

2.2 臨床免疫學檢驗：每半年選取2份陰性臨床標本（其中1份其他標志物最好陽性）和3份陽性臨床標本，以及試劑盒陰陽性對照、空白、弱陽性質控物同時檢測，陰陽性檢測符合率≥80%為合格[9]。

2.3 臨床微生物檢驗

2.3.1 抑菌圈測量[10]：從分離培養18～24 h的血平板上，挑選單個菌落直接在無菌管中用無菌生理鹽水制成接種物，將濁度調整為0.5麥氏單位濃度，接種物在15 min內接種MH平板。用無菌棉簽蘸取菌液在管內壁上方旋轉擠壓，將多余菌液擠去，在平板上均勻涂布，最后用棉簽涂布平板四周邊緣1圈，靜置3～5 min，將紙片分片器置于培養皿上，平穩而全面按下柱塞并釋放紙片，檢查紙片是否貼穩。將貼好紙片的平板置35 ℃培養箱孵育16～18 h。每位工作人員用游標卡尺測量藥敏試驗的抑菌圈直徑，每個抑菌圈測量3次，記錄結果。所得數據采用方差分析，如結果顯示差異有統計學意義，則用t檢驗分析。判斷：直徑差異無統計學意義。

2.3.2 顯微鏡形態學檢查人員比對[11]：選取一般細菌、抗酸桿菌和真菌檢查的臨床涂片標本各5份，進行涂片染色鏡檢。比較工作人員間的符合率，符合率≥80%為合格。

2.3.3 培養結果判讀和結果報告比對：選取5份臨床培養標本，不同工作人員對標本培養結果進行判讀和報告，人員間5份有4份結果一致為滿足要求。

2.4 PCR實驗室

2.4.1 定性項目：選取3份陽性（低、中、高各1份）和2份陰性標本，進行提取DNA和上樣擴增，嚴格按相應項目的SOP操作。陰陽相符為比對通過。

2.4.2 定量項目：選取3份陽性（低、中、高各1份）和2份陰性標本，進行提取DNA和上樣擴增，嚴格按相應的SOP操作。比對人員與參比人員比，至少有4份樣本的偏倚≤7.5%。

3 人員比對意義

3.1 質量改進：實施人員比對，能發現影響結果可比性的一些關鍵因素。如PLT人工計數沖池后的靜置時間不足、非PLT顆粒的區分有的未掌握；形態學基礎差[12]、平時培訓又不足；人員操作未嚴格按規定程序進行；所用設備未經校準；耗材質量欠佳等。總之，認真分析比對過程中的每一個環節，找出影響結果的關鍵點，采取有效的措施進行控制，從而提高檢測結果質量，實現人員間檢測結果的可比性。

3.2 實驗室認可必備：現場評審時，實驗室需提供人員比對資料，還需進行現場人員比對實驗，提供原始數據和比對結果、結論。這樣，平時的比對相當于現場比對的演練。通過比對，發現問題，解決問題，進而在平時工作中少出問題，現場實驗時有底氣。

4 總 結

人員檢測結果的可比性，是實驗室質量要求。具體如何實施，對于一些實驗室來說有些迷惘，需要考慮比對哪些項目，標本選取要求，比對周期，判斷標準等。本實驗室在經歷了ISO15189實驗室認可的3次現場評審，積累了一定的經驗，比對流程也經歷了一定的完善。人員比對，能發現人員存在的問題，流程存在的問題，儀器設備、耗材存在的問題，針對問題采取改進措施和有效手段進行控制，達到提升檢測結果質量的目的。