石渠白菌母種培養(yǎng)條件初探

楊春敏 胡生華 黃建初

（廣州工商學(xué)院，廣東廣州510850）

石渠白菌又名“石渠白蘑菇”[1]，是四川省甘孜藏族自治州石渠縣的著名特產(chǎn)，每年盛夏七、八月，在海拔3800～4200 m的石渠草原上，就能發(fā)現(xiàn)石渠白菌點(diǎn)綴在牧草中。它的學(xué)名各家說(shuō)法不一，微生物專(zhuān)家畢志樹(shù)鑒定為白色白樁菇，王巍[2]將其歸為黃綠蜜環(huán)菌。白樁菇并無(wú)菌環(huán)，而黃綠蜜環(huán)菌的形態(tài)描述與石渠白菌相差甚遠(yuǎn)。筆者對(duì)其進(jìn)行分子鑒定，確定其為蘑菇屬的一種。

石渠白菌味道鮮美，經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，但是其身處高原，不耐儲(chǔ)存和運(yùn)輸，這也影響了對(duì)它的研究和開(kāi)發(fā)。筆者對(duì)石渠白菌菌絲培養(yǎng)條件進(jìn)行初步試驗(yàn)，以期為人工馴化栽培提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

新鮮石渠白菌子實(shí)體（圖1、圖2）采集于石渠縣南部草原，通過(guò)組織分離得到試驗(yàn)用母種。

圖1 石渠白菌子實(shí)體采集地

圖2 石渠白菌子實(shí)體

1.2 試驗(yàn)方法

母種培養(yǎng)基：①高原土50 g，馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1 L。②高原土100 g，馬鈴薯200 g，葡萄糖 20 g，瓊脂 20 g，水 1 L。③高原土150 g，馬鈴薯 200 g，葡萄糖 20 g，瓊脂 20 g，水 1 L。④高原土 200 g，馬鈴薯 200 g，葡萄糖 20 g，瓊脂20 g，水 1 L。⑤蔗糖 20 g，尿素 5 g，MgSO40.5 g，KH2PO40.5 g，K2HPO40.5 g，瓊脂20 g，水 1 L。⑥葡萄糖 20 g，蛋白胨3 g，酵母提取物 2 g，MgSO40.5 g，KH2PO40.5 g，K2HPO40.5 g，瓊脂 20 g，水 1 L。⑦葡萄糖 20 g，蛋白胨 5 g，MgSO40.5 g，KH2PO40.5 g，K2HPO40.5 g，瓊脂20 g，水1 L。⑧蔗糖20 g，NaNO35 g，MgSO40.5 g，KH2PO40.5 g，K2HPO40.5 g，瓊脂20 g，水 1 L。⑨蔗糖 20 g，酵母提取物 5 g，MgSO40.5 g，KH2PO40.5 g，K2HPO40.5 g，肌醇 0.0005 g，瓊脂20 g，水1 L。⑩葡萄糖10 g，麥芽糖5 g，可溶性淀粉 5 g，酵母提取物 5 g，MgSO40.5 g，KH2PO40.5 g，K2HPO40.5 g，瓊脂20 g，水1 L。?（CK）培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1 L。其中培養(yǎng)基①-④中高原土和水用于制作土壤浸出液。

將培養(yǎng)皿中的母種用1 cm打孔器沿菌絲外延打孔，將菌絲圓片分別接種于上述培養(yǎng)基中，每個(gè)培養(yǎng)皿接種1片，每個(gè)配方做5個(gè)平行。將接種的培養(yǎng)皿置于20℃的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)30 d。測(cè)定石渠白菌菌絲生長(zhǎng)速度，同時(shí)觀察菌絲形態(tài)及特征。

1.3 培養(yǎng)溫度試驗(yàn)

將培養(yǎng)皿中的母種用1 cm打孔器沿菌絲外延打孔，將菌絲圓片接種于上述篩選出的最佳培養(yǎng)基中，分別置于5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30 d，每個(gè)溫度做5個(gè)平行。測(cè)定石渠白菌菌絲生長(zhǎng)速度。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試母種培養(yǎng)基上石渠白菌菌絲培養(yǎng)結(jié)果

供試母種培養(yǎng)基上石渠白菌菌絲培養(yǎng)結(jié)果見(jiàn)見(jiàn)表1。

由表1可以看出，在培養(yǎng)基①-④及培養(yǎng)基CK中，石渠白菌菌絲粗壯，顏色潔白，氣生菌絲及基內(nèi)菌絲濃密；平均生長(zhǎng)速度在0.6 mm/d以上，特別是培養(yǎng)基②，菌絲的平均生長(zhǎng)速度達(dá)到最大0.66 mm/d，說(shuō)明添加適量高原土浸出液能促進(jìn)石渠白菌菌絲的生長(zhǎng)，這可能與高原土浸出液中含有豐富的碳氮源和微量元素有關(guān)。在培養(yǎng)基⑤中，菌絲不能生長(zhǎng)，說(shuō)明尿素對(duì)石渠白菌菌絲生長(zhǎng)有抑制作用。在培養(yǎng)基⑧中，菌絲生長(zhǎng)最慢，說(shuō)明石渠白菌菌絲不能很好地利用硝酸鹽。對(duì)比培養(yǎng)基⑥、⑦、⑨、⑩，可以初步判斷在促進(jìn)石渠白菌菌絲生長(zhǎng)速度方面，葡萄糖優(yōu)于蔗糖，酵母提取物優(yōu)于蛋白胨。

表1 供試母種培養(yǎng)基上石渠白菌菌絲生長(zhǎng)情況

2.2 供試培養(yǎng)基上白菌原基形成情況

在供試母種培養(yǎng)基上石渠白菌原基形成情況見(jiàn)表2。

表2 供試母種培養(yǎng)基上石渠白菌菌絲原基形成情況

由表2可知，除了培養(yǎng)基⑤、⑦、⑧、⑩中無(wú)原基產(chǎn)生外，其余培養(yǎng)基中均發(fā)現(xiàn)有原基，其中培養(yǎng)基②和⑨5個(gè)平皿中均產(chǎn)生了原基，培養(yǎng)基②中產(chǎn)生的原基個(gè)數(shù)最多。說(shuō)明添加的土壤浸出液對(duì)石渠白菌菌絲基團(tuán)形成具有促進(jìn)作用，但過(guò)高濃度下菌絲基團(tuán)形成反而受抑制。培養(yǎng)基⑨五皿都出現(xiàn)了原基，可能是配方中添加了肌醇，肌醇可促進(jìn)細(xì)胞新陳代謝、促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育，這說(shuō)明肌醇對(duì)石渠白菌的菌絲基團(tuán)、子實(shí)體的形成起到一定促進(jìn)作用。觀察發(fā)現(xiàn)：石渠白菌母種培養(yǎng)基中原基發(fā)生點(diǎn)均集中在原接種點(diǎn)周?chē)▓D3），多皿培養(yǎng)基上出現(xiàn)白色菌絲基團(tuán)，分布較散，看起來(lái)像小菇蕾（圖4），并伴有“吐水”現(xiàn)象（圖5），同時(shí)，多皿培養(yǎng)基上菌絲出現(xiàn)“扭結(jié)”現(xiàn)象（圖6）。一般，食用菌在營(yíng)養(yǎng)適合環(huán)境下，菌絲開(kāi)始扭結(jié)形成原基并出現(xiàn)“吐水”現(xiàn)象，繼續(xù)給予一定的光照和濕度等刺激，就會(huì)發(fā)育成菇蕾，是出菇征兆[3]。由此可見(jiàn)，石渠白菌具有人工馴化的可能。

2.3 培養(yǎng)溫度試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3和圖7。由表3和圖7可知，石渠白菌菌絲可以在培養(yǎng)溫度5～30℃生長(zhǎng)，15～25℃是石渠白菌菌絲適宜的生長(zhǎng)溫度，而最適生長(zhǎng)溫度為20℃，35℃以上是石渠白菌菌絲致死溫度。

表3 不同培養(yǎng)溫度石渠白菌菌絲生長(zhǎng)速度（培養(yǎng)基②）

圖3 石渠白菌原基（培養(yǎng)基②）

圖4 接種點(diǎn)附近的白色基團(tuán)（培養(yǎng)基②）

圖5 原基及“吐水”現(xiàn)象（培養(yǎng)基②）

圖6 菌絲出現(xiàn)“扭結(jié)”現(xiàn)象（培養(yǎng)基②）

圖7 不同培養(yǎng)溫度石渠白菌菌絲生長(zhǎng)狀態(tài)（培養(yǎng)基②）

3 小結(jié)

試驗(yàn)已經(jīng)初步找到最適合石渠白菌生長(zhǎng)條件，即為母種培養(yǎng)基高原土100 g，馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1 L；培養(yǎng)的最適溫度為20℃。另外，在母種培養(yǎng)基中，石渠白菌也具有了產(chǎn)生原基的能力，這也奠定了人工馴化的基礎(chǔ)。石渠白菌是一種與牧草共生的菌根菌，人工馴化難度大，所以要對(duì)石渠白菌進(jìn)行人工栽培還有很長(zhǎng)的路要走。