國產(chǎn)地氯雷他定片的溶出曲線考察

陳承貴，李美芳，龐發(fā)根，李玉蘭，王鐵杰

（廣東省深圳市藥品檢驗(yàn)研究院·深圳市藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 深圳 518057）

地氯雷他定（desloratadine）是美國先靈葆雅公司在1988年開發(fā)的強(qiáng)力長效三環(huán)類抗組胺藥，是氯雷他定主要活性代謝物（去乙氧羧基氯雷他定），對H1受體具有強(qiáng)效和高選擇性的阻斷作用，還具有不依賴于組胺H1受體獨(dú)特的抗炎活性和作用機(jī)制，主要用于治療過敏性鼻炎和慢性特發(fā)性蕁麻疹［1-2］。地氯雷他定是2016年國家藥品評價(jià)性抽驗(yàn)選定品種，劑型包括片劑、分散片、膠囊、干混懸劑和糖漿劑。溶出度是固體制劑的重點(diǎn)評價(jià)項(xiàng)目，目前國內(nèi)外均將該指標(biāo)作為仿制藥與原研產(chǎn)品比較的重要評價(jià)項(xiàng)目。根據(jù)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［3-7］，國內(nèi)不同標(biāo)準(zhǔn)中溶出度檢查均為小杯法，溶出介質(zhì)和轉(zhuǎn)速等條件不盡相同，很難區(qū)分國產(chǎn)藥品之間及國產(chǎn)藥品與原研藥品之間的質(zhì)量差異。依據(jù)《國家藥品安全“十二五”規(guī)劃》要求，本研究中針對地氯雷他定片開展仿制藥一致性評價(jià)，為全面提高仿制藥的質(zhì)量提供參考。通過研究國產(chǎn)制劑與原研制劑溶出曲線一致性，使各企業(yè)對產(chǎn)品自身質(zhì)量有較全面的了解，為企業(yè)提高產(chǎn)品質(zhì)量提供改進(jìn)方向與參考。

1 儀器與試藥

儀器：AT 7smart型溶出儀（瑞士 Sotax公司）；XS205DU型電子天平（瑞士梅特勒公司）；ZKT-18F型真空脫氣機(jī)（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；Alliance 2695-2998型高效液相色譜儀（美國沃特世公司）。

試藥：磷酸二氫鉀、無水磷酸氫二鈉、氯化鈉、醋酸、醋酸鈉、鹽酸（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）；甲醇（色譜純，德國默克公司）；三氟乙酸、三乙胺（色譜純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；水（實(shí)驗(yàn)室自制）；地氯雷他定對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為100919-200902，純度為 99.7%）；地氯雷他定片（原研片劑，默沙東公司，批號為M021462，規(guī)格為每片5 mg）；地氯雷他定片（廠家1，批號為150825，規(guī)格為每片5 mg；廠家2，批號為AG20150802，規(guī)格為每片5 mg；廠家3，批號為1606030，規(guī)格為每片 5 mg；廠家 4，批號為 150501，規(guī)格為每片 5 mg；廠家 5，批號 150201，規(guī)格為每片 2.5 mg）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶出試驗(yàn)方法

2.1.1 溶出介質(zhì)

根據(jù)《普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》及參考日本“藥品品質(zhì)再評價(jià)”工程，采用不同pH的4種溶出介質(zhì)［8-9］，分別為 pH 1.2鹽酸溶液（取氯化鈉2.0 g，加水適量使溶解，加鹽酸7 mL，再加水稀釋至1 000 mL，即得），pH 4.0 醋酸鹽緩沖液［0.05 mol／L 醋酸溶液 -0.05 mol／L 醋酸鈉溶液（16.4 ∶3.6，V／V）比例混合，即得］，pH 6.8磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀3.4 g和無水磷酸氫二鈉3.55 g，加水適量使溶解，定容至1 000 mL，再稀釋1倍，即得），水；同時(shí)增加國內(nèi)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn) 2種溶出介質(zhì)，分別為0.01 mol／L鹽酸溶液和0.1 mol／L 鹽酸溶液，溶出介質(zhì)均為 500 mL［10］。

2.1.2 溶出條件

依據(jù)2016年國家評價(jià)性抽驗(yàn)“地氯雷他定”品種的探索性研究［11］，參照美國藥典 （USP 40-NF 35）中地氯雷他定片各論項(xiàng)下的溶出度項(xiàng)目規(guī)定，設(shè)置地氯雷他定片原研片劑溶出度條件為槳法，轉(zhuǎn)速為 50 r／min［10］。

2.1.3 取樣時(shí)間

溶出介質(zhì)pH 6.8磷酸鹽緩沖液和水取樣時(shí)間點(diǎn)為5，10，15，20，30，45，60，90，120，150 min，其余 4 種溶出介質(zhì)下的取樣時(shí)間點(diǎn)為 5，10，15，20，30，45，60 min。

2.2 溶出量測定

2.2.1 溶液制備

取樣品6片，按擬訂條件試驗(yàn)，分別取溶液5 mL，取液，補(bǔ)加同溫度同體積相同溶出介質(zhì)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取地氯雷他定對照品適量，精密稱定，用溶出介質(zhì)溶解并稀釋至每1 mL約含10 μg（規(guī)格為2.5 mg的每 1 mL約含 5 μg）的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 色譜條件［11］

色譜柱：ZorbaxEclipseXDB-C8柱（150mm ×4.6mm，5 μm），用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相：0.5%三氟醋酸溶液（用三乙胺調(diào) pH至6.3）-甲醇（45 ∶55）；檢測波長：240 nm；流速：1.0 mL ／min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20 μL。精密量取供試品溶液和對照品溶液20 μL，分別注入色譜儀，記錄色譜圖，見圖1。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算每片的溶出量。

2.2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：取地氯雷他定對照品適量，精密稱定，分別加入擬訂的6種溶出介質(zhì)，溶解并稀釋至每1 mL含0.5mg的溶液，作為貯備液，分別精密量取1.00，2.50，5.00，10.00，25.00，50.00，100.00，200.00 mL，置500 mL容量瓶中，分別加入上述6種溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，按擬訂色譜條件測定，以對照品溶液質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y1=22 745X1-24 003，r=1.000 0（n=8）；Y2=44 373X2-92 808，r=0.999 9（n=8）；Y3=43423X3-83039，r=0.9999（n=8）；Y4=45790X4-19 847，r=1.000 0（n=8）；Y5=44 007X5-30 212，r=0.999 9（n=8）；Y6=44 927X6+2 881.3，r=1.000 0（n=8）。結(jié)果表明，6種溶出介質(zhì)中地氯雷他定質(zhì)量濃度在1.02～204.20μg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

圖1 高效液相色譜圖

重復(fù)性試驗(yàn)：取地氯雷他定對照品適量，精密稱定，分別用上述6種溶出介質(zhì)溶解并稀釋至每1 mL含10 μg的溶液，依法測定，重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果的RSD均小于1.0%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取地氯雷他定對照品適量，精密稱定，分別用上述6種溶出介質(zhì)溶解并稀釋至每1 mL含10 μg的溶液，分別于 0，2，4，6，8，10，18，20 h 時(shí)依法進(jìn)行測定。結(jié)果的RSD均小于1.0%（n=8），表明供試品溶液在20 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品分別溶解于上述6種溶出介質(zhì)，加入相當(dāng)供試品溶液含量80%，100%，120%的對照品溶液（各3份）考察。結(jié)果地氯雷他定在上述6種溶出介質(zhì)的加樣回收率分別為98.49%，99.81% ，99.50% ，98.82% ，100.18% ，100.52% ，RSD分別為 0.30%，0.50%，0.90%，1.00%，0.80%，0.30%（n=9），表明回收率較好。

2.3 濾膜過濾影響試驗(yàn)

考察地氯雷他定在6種溶出介質(zhì)下濾膜對主成分是否吸附，以地氯雷他定對照品分別溶解于上述6種溶出介質(zhì)，考察濾膜過濾樣品溶液 5，10，15，20，30，35 mL等不同體積的影響。結(jié)果在上述6種溶出介質(zhì)下，濾膜過濾不同體積的樣品溶液均無影響，地氯雷他定峰面積的RSD均小于1.0% （n=6）。

2.4 溶出儀自動(dòng)取樣系統(tǒng)影響試驗(yàn)

考察在6種溶出介質(zhì)下溶出儀自動(dòng)取樣系統(tǒng)及管路對地氯雷他定主成分是否有吸附或損失，以地氯雷他定對照品分別溶解于上述6種溶出介質(zhì)考察，徹底清洗AT 7smart型溶出儀，排空所有管路，然后將各種溶出介質(zhì)溶解的對照品溶液獨(dú)自置于AT 7smart型溶出儀溶出杯中，一一考察，中間溶出介質(zhì)交替時(shí)，也需徹底清洗溶出儀整個(gè)系統(tǒng)。結(jié)果在上述6種溶出介質(zhì)下，溶出儀自動(dòng)取樣系統(tǒng)及管路均無影響，地氯雷他定峰面積的RSD均小于 1.0% （n=6）。

2.5 體外溶出評價(jià)方法

采用美國食品藥物管理局（FDA）推薦的f2因子法［9］，根據(jù)實(shí)際情況判斷溶出曲線的相似性。f2相似因子法是非模型依賴性比較法中最具代表性的評價(jià)方法，計(jì)算簡單，結(jié)果可靠，廣泛運(yùn)用于評價(jià)藥物制劑體內(nèi)釋藥行為的相似性。根據(jù)公式（1）計(jì)算f2。其中，n為預(yù)測的點(diǎn)數(shù)，Ri與Ti分別為在t時(shí)間點(diǎn)參比制劑與受試制劑的平均累積溶出百分率。f2表示參比制劑與受試制劑體外釋藥行為的相似性，因此稱為相似因子。一般認(rèn)為，當(dāng)f2≥50，即可認(rèn)為受試制劑與參比制劑的體外釋藥行為無顯著性差異；或者仿制制劑與參比制劑在15 min的平均溶出量不低于85%時(shí)，也可認(rèn)為溶出曲線相似。

2.6 溶出曲線研究

原研片劑溶出試驗(yàn)：初步了解在6種溶出介質(zhì)下的溶出行為，在溶出介質(zhì)水和pH 6.8磷酸鹽緩沖液條件下溶出量在60 min內(nèi)均未達(dá)到85%以上，增加溶出時(shí)間至150 min，滿足連續(xù)兩點(diǎn)溶出量均達(dá)到85%以上，且差值在5%以內(nèi)，以此作為這2種溶出度截止時(shí)間點(diǎn)的依據(jù)；其余溶出介質(zhì)基本能在60 min內(nèi)滿足連續(xù)兩點(diǎn)溶出量均達(dá)到85%以上，且差值在5%以內(nèi)，以此作為這4種溶出介質(zhì)下溶出度截止時(shí)間點(diǎn)的依據(jù)。詳見圖2 A。

pH 1.2鹽酸溶液下溶出行為：原研片劑在30 min內(nèi)溶出量呈合理遞增趨勢，其他廠家片劑在15 min溶出較快，拐點(diǎn)明顯，原研片劑在15 min內(nèi)未達(dá)到85%，采用f2相似因子法對其進(jìn)行評價(jià)，結(jié)果廠家3的f2=51.1≥50，說明兩者在pH 1.2鹽酸溶液中溶出行為相似。詳見圖2 B。

pH 4.0醋酸鹽緩沖液下溶出行為：原研片劑與受試片劑在15 min內(nèi)溶出量均未達(dá)到85%，采用f2相似因子法對其進(jìn)行評價(jià)，結(jié)果廠家4的f2=57.6≥50，說明兩者在pH 4.0醋酸鹽緩沖液中溶出行為相似。詳見圖2 C。

圖2 平均溶出曲線

pH 6.8磷酸鹽緩沖液下溶出行為：原研片劑與受試片劑溶出行為差異性更為明顯，不同廠家的處方、生產(chǎn)工藝、原輔料控制、質(zhì)量控制等不同，溶出行為顯然會有很大差異，根據(jù)FDA研究歸納的BCS分類，地氯雷他定為BCS分類Ⅰ類藥物，即高溶解性且高滲透性藥物，pH的改變影響溶出行為，因此該溶出介質(zhì)下溶出行為的差異為不同廠家的藥品提供區(qū)分。采用f2相似因子法進(jìn)行評價(jià)，顯示廠家3和廠家4溶出行為較相似。詳見圖2 D。

水下溶出行為：溶出行為分歧性較大，區(qū)分性明顯，呈現(xiàn)3種情況：第1種溶出過程急劇增加，出現(xiàn)明顯拐點(diǎn)（如廠家2和廠家5）；第2種溶出過程相當(dāng)緩慢，溶出量較低（如廠家1）；第3種溶出行為和原研片劑較相似，逐步緩量溶出，符合人體吸收要求。詳見圖2 E。

0.01 mol／L鹽酸溶液下溶出行為：觀察溶出曲線，溶出拐點(diǎn)最明顯的是廠家2，原研片劑在15 min內(nèi)未達(dá)到85%，采用f2相似因子法對其進(jìn)行評價(jià)，結(jié)果廠家3和廠家 4的f2≥50，說明兩者在 0.01 mol／L鹽酸溶液中溶出行為相似。詳見圖2 F。

0.1 mol／L鹽酸溶液下溶出行為：原研片劑與受試片劑在15 min內(nèi)均達(dá)到85%以上的溶出量，根據(jù)《普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》中要求，當(dāng)受試制劑和參比制劑在15 min內(nèi)的溶出量≥85%時(shí)，可以認(rèn)為兩者溶出行為相似，無須進(jìn)行f2的比較，詳見圖2 G。

3 討論

3.1 溶出介質(zhì)選擇

國產(chǎn)地氯雷他定片各規(guī)格現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中溶出度均采用第三法，各廠家執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)選定的溶出介質(zhì)和轉(zhuǎn)速等條件不盡相同，不能很好地評價(jià)各廠家產(chǎn)品質(zhì)量的優(yōu)劣。本研究中對溶出方法、溶出條件和檢測方法進(jìn)行了系統(tǒng)研究，考察了原研片劑和國內(nèi)5個(gè)廠家的片劑在6種溶出介質(zhì)下的溶出曲線，對抽驗(yàn)地氯雷他定片的體外溶出了行為做出較為全面的分析和評價(jià)［11-14］。

3.2 溶出條件選擇

曾考察小杯法、轉(zhuǎn)速50 r／min與 75 r／min、不同溶出介質(zhì)、溶出介質(zhì)體積250 mL，槳法、轉(zhuǎn)速50 r／min、不同溶出介質(zhì)、溶出介質(zhì)體積500 mL，結(jié)果顯示，小杯法雖然提高了溶出藥物的濃度，但與普通杯的槳法相比，其攪拌時(shí)產(chǎn)生的剪切應(yīng)力及一些物理參數(shù)有較大的差異，其攪拌程度要比普通杯槳法更劇烈，考慮小杯法通用性不強(qiáng)；同時(shí)，參照美國藥典片劑與口崩片、片劑進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定和地氯雷他定藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果（地氯雷他定口服后30 min可測得其血漿濃度），對國產(chǎn)地氯雷他定片溶出曲線研究方法選為槳法、溶出介質(zhì)體積 500 mL、轉(zhuǎn)速 50 r／min［11-13］。

3.3 溶出樣品檢測方法選擇

前期研究中用紫外分光光度法和高效液相色譜法進(jìn)行了大量的試驗(yàn)，結(jié)果表明，紫外分光光度法檢測干擾因素較多且難以保證原始數(shù)據(jù)的完整性，而高效液相色譜法檢測不僅可保證原始數(shù)據(jù)的完整性，且更合理、準(zhǔn)確、高效，可進(jìn)行大范圍溶出行為的考察［11］。

3.4 f2相似因子法的評估分析

地氯雷他定水溶性差，在水和pH 6.8磷酸鹽緩沖液溶出介質(zhì)下，更能好反映不同廠家與原研片劑的溶出行為，特別是廠家1的產(chǎn)品差異性最明顯，在相應(yīng)取樣時(shí)間點(diǎn)，其溶出量明顯偏低，提示廠家1產(chǎn)品的處方工藝有待進(jìn)一步研究。由圖2和f2相似因子法評估結(jié)果可知，廠家3與廠家4產(chǎn)品的體外溶出行為與原研片劑完全一致，其余廠家產(chǎn)品與原研片劑在溶出行為上仍有差異，本研究中采用多條溶出曲線來評價(jià)地氯雷他定片的內(nèi)在質(zhì)量更合理。

綜上所述，體外溶出度試驗(yàn)是評價(jià)口服固體制劑內(nèi)在質(zhì)量的一種重要方法，尤其是多種pH溶出介質(zhì)中的溶出行為，不僅可反映仿制制劑內(nèi)在品質(zhì)是否一致，還可提高藥物生物等效性試驗(yàn)的成功率［12-16］。