顏值高本領大
——木芙蓉花70%乙醇提取物對金黃色葡萄球菌抑菌效果的探究

文 廣東省深圳市龍崗區龍城高級中學高三（12）班 饒 遠

木芙蓉屬錦葵科木槿屬小喬木，在我國南方很常見，其花大、色艷，觀賞價值高。《本草綱目》言其“治一切大小癰疽，腫毒惡瘡，消腫，排膿，止痛”。我查閱CNKI數據庫發現，研究木芙蓉抑菌作用的文獻很少，只發現李昌靈老師對木芙蓉葉提取物的抑菌作用進行過研究。研究木芙蓉花抑菌效果的文獻則沒有。

金黃色葡萄球菌是化膿感染中最常見的病原菌，可引起青春痘的化膿感染。受李昌靈老師的研究啟發，我進行了木芙蓉花70%乙醇提取物對金黃色葡萄球菌抑菌效果的探究。

一、實驗材料與儀器

木芙蓉花，乙醇（國產分析純），金黃色葡萄球菌，LB固體培養基，LB液體培養基。

立式壓力蒸汽滅菌器，搖床，電熱恒溫培養箱，水平層流凈化工作臺，旋轉蒸發器（RE－52AA），JY92－IIN超聲波細胞粉碎機。

二、實驗過程

1.制備木芙蓉花70%乙醇提取液

將新鮮的木芙蓉花用水洗凈，烘干、粉碎，取20g木芙蓉花干粉，加入200mL70%乙醇，進行超聲波細胞粉碎，使所得濾液溫度保持在65℃，利用旋轉蒸發器濃縮，用容量瓶定容至濃度為1g/mL。滅菌20min后，放入冰箱，在4℃的環境下冷藏。

2.制備菌懸液

在無菌條件下，將37℃活化后的金黃色葡萄球菌取出，采用麥氏比濁法制備108cfu/mL菌懸液，再稀釋為106cuf/mL的菌懸液。

3.瓊脂打孔法

在無菌條件下，取106cfu/mL的金黃色葡萄球菌懸液100uL，涂布于LB固體培養基，用滅菌的50uL的移液槍槍頭在滅菌的LB固體培養基上打孔，并挑出孔內的培養基，每個培養皿打4個孔。其中3個孔注入滅菌的1g/mL木芙蓉花70%乙醇提取液，另一個孔注入1%鏈霉素作為陰性對照。

同時，4個孔液面上放入滅菌的打孔濾紙圓片，置于37℃恒溫培養箱中培養24h，重復3次，測定抑菌圈半徑（為孔邊緣至相對應的透明圈的最外緣間的環形距離）。

4.二倍稀釋法

在無菌條件下，取8支試管，分別注入1mL的LB液體培養基，采用二倍稀釋法，將濃度為1g/mL的木芙蓉花70%乙醇提取液分別稀釋，得到濃度為1g/mL，0.5g/mL，0.25g/mL，0.125g/mL，0.0625g/mL，0.03125g/mL 的藥液，編號1～6，每支試管都含有1mL的不同稀釋度藥液。取剩余的2支試管中的1支加入0.03mL1%鏈霉素作陰性對照，另1支不加，作陽性對照。

在上述8支試管中各接種100uL106cfu/mL金黃色葡萄球菌懸液，置于37℃恒溫箱中培養24h，觀察其生長情況。

三、結果與分析

1.瓊脂打孔法實驗結果

根據瓊脂打孔法進行實驗，分析1g/mL的木芙蓉花70%乙醇提取液對金黃色葡萄球菌的抑菌透明圈。

1號、2號、3號孔注入的是1g/mL的木芙蓉花70%乙醇提取液，淺棕色表明木芙蓉花提取液滲透至固體培養基中，淺棕色區域因提取液漸次滲透，所以有菌長出。孔邊緣的深棕色為抑菌透明圈，透明圈區域無菌落長出，其最大抑菌圈半徑是10mm，最小抑菌圈1mm，眾數是3mm。

4號孔注入的是1%鏈霉素，孔四周透明，無菌長出，表明鏈霉素有較強的抑菌效果，如圖1所示。實驗結果表明，1g/mL的木芙蓉花70%乙醇提取液對金黃色葡萄球菌有抑制作用。

圖1 1g/mL的木芙蓉花70%乙醇提取液瓊脂打孔法的實驗結果

2.二倍稀釋法實驗結果

瓊脂打孔法的抑菌實驗結果表明，1g/mL的木芙蓉花70%乙醇提取液對金黃色葡萄球菌有抑制作用。在此基礎上采用二倍稀釋法進行定量實驗，以進一步了解其最低抑菌濃度（MIC），實驗現象見圖2。

圖2 1g/mL的木芙蓉花70%乙醇提取液二倍稀釋法的實驗現象

培養24h后，振蕩1號至5號試管培養液后無混濁現象，說明無菌長出。振蕩6號試管后輕微混濁，說明有菌長出。陽性對照試管菌液明顯混濁，陰性對照試管中加入的是1%鏈霉素，振蕩培養液后仍澄清，說明無菌長出。

初步判斷，木芙蓉花70%乙醇提取物對金黃色葡萄球菌最低抑菌濃度（MIC）為0.0625g/mL。再將5號試管培養物取100uL涂布于固體LB培養基中，置于37℃恒溫箱中培養24h后，平板上無菌落出現。

綜上結果可確定，木芙蓉花70%乙醇提取物對金黃色葡萄球菌最低抑菌濃度（MIC）為0.0625g/mL。詳細結果如表1所示。

四、實驗討論

李昌靈老師對木芙蓉葉提取物的抑菌作用進行過研究，其數據表明，木芙蓉葉70%乙醇提取物抑制金黃色葡萄球菌最低抑菌濃度（MIC）為0.5g/mL。本實驗參照李昌靈老師實驗中定性研究的方法，得到木芙蓉花70%乙醇提取物對金黃色葡萄球菌最低抑菌濃度（MIC）為 0.0625g/mL。

表1 木芙蓉花70% 乙醇提取物對金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度(MIC)

瓊脂打孔法操作簡便，可作為篩選抑菌效果的定性方法。實驗過程中考慮到培養過程中藥液會蒸發，所以蓋上紙片，既可減緩液體的蒸發，又可減少液體流入固體培養基底部。

二倍稀釋法是一種精確定量的方法，但操作復雜。另外，實驗提取所得的藥液為顏色較深的中草藥制劑，若直接根據培養液的混濁度來判斷最低抑菌濃度（MIC），可能會因為顏色深而導致觀察不準確。在這之后將含最低濃度提取液的澄清液體培養基用涂平板的方法繼續培養24h，根據最終是否有菌落長出則能較好地避免這種現象，確定最低抑菌濃度（MIC）。

本文利用木芙蓉花70%乙醇提取物對金黃色葡萄球菌的抑菌效果進行了實驗，為研究木芙蓉花的解毒、消腫、排毒功效提供了初步的實驗依據。但還未對其他常見病原菌的抑菌效果進行研究，今后可進一步探究。