蘿卜與蕓薹屬遠緣雜交不親和性克服及DNA甲基化的研究進展

郭曉燦 韓佳慧 童未名

摘要：通過遠緣雜交可以獲得種內雜交難以得到的變異類型，創造許多新的種質資源，為品種改良提供原材料。從20世紀20年代開始，人們就已經開展了蘿卜屬與蕓薹屬植物遠緣雜交的研究，并有不少屬間雜交成功的報道。本文綜述了當前蘿卜與蕓薹屬屬間不親和性的機制，總結了不親和性的克服方法，并概括了不同屬間遠緣雜種的育性和DNA甲基化的研究進展，以期為今后蘿卜與蕓薹屬蔬菜品種的遺傳育種工作提供參考。

關鍵詞：蘿卜;蕓薹屬;遠緣雜交;不親和性;DNA甲基化;研究進展;表觀遺傳

中圖分類號： S631.103.2 ?文獻標志碼： A ?文章編號：1002-1302（2019）22-0012-06

蘿卜（Raphanus sativus L.）是我國主要的蔬菜作物之一，為十字花科蘿卜屬一、二年生草本植物，其肉質根營養豐富，且蘿卜的栽培地區廣，品種類型多[1]。蕓薹屬（Brassica）植物種類繁多，用途廣泛，具有遺傳類型豐富、變異廣泛的基因庫。蕓薹屬植物的遠緣雜交不僅涉及該屬內的種間雜交，而且涉及與鄰近屬物種進行的屬間雜交。Karpechenko首先進行了蘿卜與甘藍的遠緣雜交，并獲得高度不育的遠緣雜種F1代[2]。此外，王明霞的研究表明，蘿卜屬與蕓薹屬的遺傳相似水平較高，而且通過遠緣雜交可以將蘿卜屬的抗蟲能力[3]，如抗根結線蟲、孢囊線蟲[4]和雄性不育系[5]、抗根腫病[6-7]等特異性狀導入蕓薹屬作物中，能夠實現作物之間優異性狀的轉移，創造蔬菜新品種和新類型。然而，在進行種間或屬間雜交時，如果采用常規的雜交技術，成功率往往很低。人們通過混合花粉和多次重復授粉、柱頭移植、剪短法和化學藥劑的使用等方法來克服受精前的障礙，但受精后，在胚胎的發育過程中，由于胚乳得不到正常發育的營養，導致胚的死亡[8]。在1959年研究者首先用幼胚培養的方法獲得了蕓薹屬內的種間雜種，之后許多學者采用組織培養技術使種間、屬間雜交的結實率和雜種的獲得頻率得到了提高。

遠緣雜交在創造新種質、雜種優勢利用和品種改良等應用領域具有重要的現實意義，在物種的起源、演化和遺傳變異研究方面也發揮著重要的指導作用。本文就蘿卜與蕓薹屬間的遠緣雜交不親和性、異源多倍體的獲得及遠緣雜種的鑒定等研究進展進行綜述。

1 蘿卜與蕓薹屬遠緣雜交不親和性的影響因素

在種間或種以上的分類單位，由于在形態、遺傳和生理上存在較大不同，從而導致雜交不能正常結實和獲得雜種。表1中匯總了關于蘿卜與蕓薹屬間雜交的實例，蘿卜與蕓薹屬“禹氏三角”中的3個基本種白菜（Brassica rapa L.）、黑芥（Brassica nigra L.）、甘藍（Brassica oleracea L.），以及3個復合種埃塞俄比亞芥（Brassica carinata L.）、芥菜（Brassica juncea L.）、甘藍型油菜（Brassica napus L.）和野生蕓薹種均有雜交成功的實例，并且有的正反交都獲得了一定的結實率和雜種獲得率，揭示蘿卜屬與蕓薹屬的親緣關系較近。此外可以看出，不僅不同雜交親本和組合方式下遠緣雜交不親和性的程度不同，而且同一雜交組合下正反交的雜種獲得率也有很大差異。組培技術出現后，在蘿卜與蕓薹屬遠緣雜交中均采用子房培養、幼胚培養和胚珠培養等組培技術進行胚挽救，結果是卓有成效的。從表1還可以看出，通過組織培養和整花培養技術使結實率、雜種獲得頻率得到了提高，并對雜種進行加倍，獲得異源四倍體、異源六倍體等，使雜種后代的育性得到了提高，有效克服了遠緣雜交的不親和性。

1.1 雜交親本的基因組和基因型

在一般情況下，雜交父母本的親緣關系越近，獲得雜種的頻率越高。通過利用基因組原位雜交（GISH）和擴增片段長度多態性（AFLP）技術對部分回交后代（BC1）的基因組組成分析可知，F1代雜種的白菜基因組（AA）和蘿卜基因組（RR）間的染色體配對頻率較高，在73.53%的花粉母細胞（PMCs）中形成異源合價體，表明2個基因組之間存在顯著的同源重組[37]，如蘿卜與白菜雜交更容易獲得雜種[4，15，38]。表2是對表1中獲得的遠緣雜種頻率進行匯總的結果，也揭示了蘿卜與白菜、甘藍的遠緣雜種獲得率顯著高于黑芥組合。另外，基因組測序比對表明，蘿卜基因組與蕓薹屬基因組共同經歷了基因三倍體化的事件，有著共同的進化祖先物種[39]。因此可見，親本的基因組體系對屬間雜交的可交配性起著決定性作用[11]。在遠緣雜交中，不同基因型的親本也影響著雜種的結實率，如黃邦全等研究發現，不同類型的蘿卜與Ogura紫菜薹雜交，紫菜薹Ogura CMS與四季蘿卜雜交的結實率明顯高于紫菜薹Ogura CMS與南畔晚蘿卜雜交的結實率[17]。

1.2 雜交親本的染色體數目

遠緣雜交中雜交親本的親和性與親本的染色體數目呈正相關，有研究表明，具有相同染色體組的2個親本的親和性較強，易得到雜種。此外，羅鴻源的試驗還表明，染色體數目多的物種作母本的結角率較高（6.2%～71.7%），獲得遠緣雜種的成功率也較高[40]。從表2中也不難看出，蘿卜與蕓薹屬復合種雜交獲得雜種的頻率明顯高于與基本種雜交，是否與復合種的染色體數目相關，還有待具體分析。

1.3 子房離體培養的取材時間

授粉后雜種子房離體培養的取材時間早晚會影響子房的成活率，必須在角果停止生長、胚敗育之前進行組織培養，從而為雜種胚提供正常生長所需的營養，雜種獲得率也可以提高。李明山等在蘿卜與大白菜的屬間雜交試驗中發現，在授粉第15天后，胚乳開始變褐退化，但胚仍是健康的[13]。然而，相關研究表明，蘿卜與大頭菜的最佳取材時間是授粉后的第7天[27]。雖然都是蘿卜與蕓薹屬的屬間雜交，但是不同親本及雜交組合方式的最佳取材時間會不盡相同。周清元曾探討過取材時間對蕓薹屬植物雜交結實率的影響[41]。可以看出，過早或過晚的取材時間都會影響遠緣雜交的結莢率和結實率。

1.4 單向不親和性

在蘿卜屬與蕓薹屬的屬間雜交中，單向屬間不親和性普遍存在。例如在蘿卜與甘藍種的雜交中，以蘿卜作為父本容易獲得雜種[42]，與表2的結論一致。Inomata在白菜與甘藍的雜交組合中也發現，子房培養顯著提高了正交組合的雜種獲得率，但對于反交的效果甚微[43]。如陳洪高在遠緣雜種（蘿卜/芥藍）與蘿卜雜交的研究中發現，以雜種（蘿卜/芥藍）作為母本時的親和性大于以蘿卜為母本時的親和性[35]。在表2中也明確了單向不親和性現象的存在，即同一組合在正反交不親和性方面也有一定的差異。

2 不親和性的克服方法

2.1 受精指數高雜交組合與授粉時間

受精指數與結實指數間存在較高的遺傳相關性（r=0.656）[44]，選擇受精指數高的雜交組合對于克服不親和性有積極影響。吳江生等在甘藍型油菜與芥菜型油菜的試驗中發現，受精指數與結角率和角果長度均達到0.001的顯著水平[45]。研究表明，在抑制不親和反應的因素未發生作用之前的蕾期對柱頭進行授粉，花粉管可正常生長進入子房到達胚囊。母本柱頭對花粉的識別能力最低時期不僅在柱頭未成熟時，還在過成熟時[46]。因此，在開花前期或后期進行授粉，可以克服遠緣雜交不親和性[47-48]。

2.2 克服受精前障礙

大量研究表明，蕾期重復授粉、混合授粉、涂抹化學藥劑和輻射誘變種子等方法可以克服遠緣雜交受精前的障礙。例如在蘿卜×蕪菁[49]、甘藍型油菜×蘿卜[12]屬間雜交中采用甘氨酸（Gly）、赤霉素（GA3）、氯化鈉（NaCl）取得了良好的效果;利用輻射誘變和重復授粉[50]提高了蘿卜×大白菜[40]的雜種獲得率。此外研究發現，花粉萌發液和重復授粉[40]對于克服蘿卜與蕓薹屬的屬間雜交不親和性有著顯著作用。

2.3 不育系材料作母本

以蘿卜雄性不育植株為母本、甘藍型油菜為父本進行授粉，得到34株雜種（蘿卜/甘藍型油菜）[29]。同樣的，在克服油菜雜交不親和的研究中也發現，以白菜型的不育材料作母本組合的平均結角率比以育性正常的材料作母本組合的結角率增加了14倍以上[40]。上述研究說明，在蘿卜屬與蕓薹屬雜交中，用不育性材料作母本可以提高遠緣雜交的親和性，這為蘿卜與蕓薹屬的屬間雜交育種提供了參考。

2.4 組織培養技術

遠緣種間在遺傳上的差異較大，造成生理上的不協調，所以在原胚至球形胚以及在有絲分裂和合成新的細胞質等方面時遇到障礙，就會發生雜種胚的敗育。胚的發育與胚乳的營養供應有關，組培技術的出現可以及時為幼胚發育提供營養。Tokumasu等在蘿卜屬與蕓薹屬的屬間雜交中都使用雜種胚離體技術，使得雜種獲得率普遍提高[51]。然而組織培養技術最重要的是為雜交種創造一個適宜的環境，在培養基中添加適量的生長物質、糖、無機鹽、激素及控制培養溫度、光照等對雜交種的成長有著促進作用[52]。有研究表明，采用改良液體培養基胚的生長速度、成活率均顯著高于固體培養基[13]。

3 遠緣雜種的育性

遠緣雜種的育性主要包括雜種的成活性和結實性。成活性是指雜種種子不能發芽、幼苗衰弱或者死亡。由于染色體的不同源性，在減數分裂時常發生染色體不能進行正常配對聯會及隨之產生的不規則分配，因而導致雜種植株不結實，表現為雜種不育。

染色體加倍可以克服減數分裂時染色體不能正常配對引起的雜種不育性，提高雜種成活率和后代結實率[12]。秋水仙素處理法是染色體加倍常用的方法，但處理的方法和效果是不同的。（1）涂抹法。用藥棉蘸秋水仙素涂抹雜種著生腋芽處，如在蘿卜與蕓薹屬間雜交時，處理的雜種均在花蕾較小時便變黃脫落或者開花后不能受精，不能使染色體加倍成功[12]。李勤菲等采用秋水仙堿滴生長點、浸根和秋水仙堿培養基等3種方法處理蕓薹屬三倍體幼苗，其中滴生長點誘導率最低，為17.54%[53]。（2）浸根法。如采用0.15%秋水仙素處理蘿卜、甘藍的屬間雜種，51.0%的植株為嵌合體，21.3% 的植株加倍過度，27.7%的雜種植株未加倍成功[20]。采用秋水仙素浸根加倍方法簡單有效，但得到的大多數為嵌合體。（3）組培加倍法。秋水仙素滅菌的方法有濕熱高壓滅菌和抽濾滅菌方法，在濕熱高壓滅菌后，含有秋水仙素的培養基上愈傷組織的生長沒有發生藥害，再生苗/愈傷組織的誘導率為147.2%，再生植株的結實率為48.1%;而抽濾滅菌的結果則相反，再生苗/愈傷組織的誘導率僅為3.3%，再生植株的結實率為0[54]。可能是由于秋水仙素為一種生物堿，用高壓滅菌鍋滅菌時，秋水仙素可能發生改性而使有效濃度降低。而且將甘藍型油菜與藍花子（Raphanus sativus L.var. raphanistroides Makino）F1代組培苗轉入含有秋水仙素的固體培養基中，后期鑒定發現，絕大多數為雙二倍體[55]，嵌合體的頻率降低。

綜上所述，蘸秋水仙素涂抹雜種腋芽不能使雜種加倍，可能由于采用涂抹法時，秋水仙素不易滲入莖尖生長點組織;浸根加倍往往得到的是嵌合體，原因可能是煉苗后植株的根系比較發達，可能是由于根系運輸秋水仙素未能到達所有生長點而不能使其整株加倍成功，也可能是由于植株的生長速度高于加倍細胞的分化和增殖速度，也有可能是由于操作不仔細，秋水仙素使部分莖葉加倍。而使用添加秋水仙素的固體培養基處理時間長，可以徹底抑制紡錘體的形成而產生雙二倍體，但是不易確定合理的濃度，所以要注意濃度的使用，過高過低都會影響雜種生長。

4 表觀遺傳學

DNA甲基化涉及多種生物學過程，包括基因表達調控和轉座子活性的調節，這些過程可能在不改變DNA序列[56-59]的情況下引起相應的形態學變化。

4.1 異源多倍體與DNA甲基化

大量新物種來源于異源多倍體，因此異源多倍體是最廣泛的物種形成模式之一。然而，異源多倍體的形成需要2個親本基因組在1個共同的細胞質內發揮作用，這可能涉及到表觀遺傳變化。

Xu等采用甲基化敏感性擴增多態性（MSAP）方法對白菜的DNA甲基化進行研究發現，約有1.7%的片段在基因組加倍時發生了甲基化改變，表明基因組的加倍使胞嘧啶甲基化發生變異[60]。還有研究發現，單一合成甘藍多倍體系之間的變異，可導致開花時間等性狀的遺傳和表型差異[61-62]及分子變異[63]。除此之外，Lukens等研究了甘藍和白菜雙單倍體雜交，得到49個異源多倍體植株在大量位點上存在遺傳和表觀遺傳變異，在理想狀態下，植株形態是一致的，但S0多倍體后代的CpG甲基化表觀遺傳程度高且變化罕見[64]。遠緣雜交早期世代發生遺傳變異，如蘿卜和芥藍雜種的F4代至F10代異源四倍體體細胞染色體數目變化表明，早期便發生DNA甲基化變異從而導致世代染色體數目不同[23]。

4.2 DNA甲基化的遺傳力和可逆性

據報道，植物中胞嘧啶甲基化（MC）模式以自發或誘導的2種方式來改變，并通過不同的DNA甲基轉移酶通過有絲分裂傳遞[65]。然而，人們對DNA甲基化的誘導性變化是否可以傳遞了解得較少。Johannes等通過研究證明，擬南芥表觀遺傳基因重組自交系中的DNA甲基化變化至少在8代之間傳播，而基因DNA序列沒有發生改變[66]。與此同時，李象松等對人工合成的蘿卜-芥藍異源四倍體F4代、F10代用甲基化敏感性擴增多態性檢測發現，甲基化程度分別為3061%、33.10%[67]。Li等也通過蘿卜和芥藍的屬間雜交得到Raphanobrassica的異源多倍體F4代至F10代，經MSAP檢測，胞嘧啶甲基化模式在雜交和二倍體形成過程中發生了明顯變化[23]。除此之外，甘藍與莖瘤芥嫁接組成了TTC（2，3，5-三苯基氯化四氮唑）嵌合莖尖分生組織（SAM），GS1（嫁接-自交）代中與莖瘤芥相比有529%～6.59%的甲基化變化，GS5代中有31.58%的甲基化變化，其余DNA的甲基化改變則逐漸恢復到原來的狀態，說明嫁接誘導的DNA甲基化變化是可遺傳的，也是可逆的[68]。因此，表觀遺傳變化是指由潛在DNA序列的改變以外的機制引起的遺傳變化，這種變化可持續多代[69-70]。

利用相關序列擴增多態性（SRAP）[71-72]對白菜和黑芥雜交材料進行分析表明，同源四倍體的片段是同源二倍體的2倍，此外，異源四倍體中的新片段是異源二倍體的2倍。當異源四倍體（F1）進行自交時，F2代表現出不同的表型和遺傳模式，表明在廣泛的雜交和基因組加倍中，遺傳變化的程度與多倍體水平呈正相關[73]。

4.3 小RNAs與DNA甲基化

遠緣雜交會導致基因組復制和異源多倍體的形成，異源多倍體是研究植物進化的重要材料。最近的研究表明，小RNAs，特別是24 nt siRNAs（小干擾RNA）在基因組中起著重要的作用，是闡明異源多倍體機制的關鍵。Ghani等研究白菜和黑芥雜種異源多倍體的小RNA表明，MicroRNA（miRNAs）的百分比與多倍體水平呈正相關，而siRNAs和DNA甲基化的百分比與多倍體水平呈負相關[74]。siRNAs和DNA甲基化的穩定遺傳可維持基因組穩定性，而miRNAs的表達變異則調控基因表達，誘導表型變異。與此同時，在研究擬南芥雜種中也發現，小RNA可作為抑制基因組重組的基因緩沖劑[75]。

5 展望

遠緣雜交作為蔬菜遺傳改良中實現不同物種間優良性狀轉移以及創造新種質資源的有效方法，一直受到人們的關注。國內外已有不少關于屬間雜交成功的例子，但是通過人工雜交授粉、組織培養、體細胞雜交等改良技術仍然沒有使蘿卜屬與蕓薹屬屬間雜交的結實率和雜種獲得率得到很大的提高。因此，仍需要不斷探索關于屬間雜交不親和性的機制。異源多倍體在植物物種的起源和進化中起著重要作用，但是關于2個基因組如何在1個核內與異源多倍體單個親本細胞質協調還尚不清楚，關于DNA甲基化如何在異源多倍體形成和發育中起作用依然知之甚少。隨著組織培養、細胞遺傳學和DNA甲基化等學科的迅猛發展，未來在蘿卜屬與蕓薹屬的屬間雜交會為育種改良創造更多新種質和新品種，從而為深入研究物種進化提供原材料。

參考文獻：

[1]汪隆植，何啟偉. 中國蘿卜[M]. 北京：科學技術文獻出版社，2005：1-21.

[2]Karpechenko G D. Polyploid hybrids of Raphanus sativus L.×Brassica oleracea L[J]. Zeitschrift für Induktive Abstammungs-und Vererbungslehre，1928，48（1）：1-85.

[3]王明霞. 蘿卜及其近緣屬種親緣關系分析與遺傳圖譜構建[D]. 南京：南京農業大學，2007.

[4]Peterka H，Budahn H，Schrader O，et al. Transfer of resistance against the beet cyst nematode from radish （Raphanus sativus） to rape （Brassica napus） by monosomic chromosome addition[J]. Theoretical and Applied Genetics，2004，109（1）：30-41.

[5]Bannerot H，Boulidard L，Chupeau Y. Unexpected difficulties met with the radish cytoplasm in Brassica oleracea[J]. Eucarpia Cruciferae Newsletter，1977，2：16-24.

[6]方小平，王秀珍，曾令益，等. 抗根腫病蘿卜油菜六倍體新物種的創制[C]//中國作物學會油料作物專業委員會第八次會員代表大會暨學術年會， 2018.

[7]Long M H，Okubo H，Fujieda K. Backcross compatibility in hybrids between Brassicoraphanus （Brassica oleracea × Raphanus sativus） and cruciferous crops，and clubroot（Plasmodiophora brassicae Woronin） resistance in their BC2 plants[J]. Journal of the Faculty of Agriculture Kyushu University，1994，37（1）：41-50.

[8]徐愛遐，黃繼英，金平安，等. 甘藍型油菜和芥菜型油菜種間雜交研究[J]. 西北植物學報，1999，19（3）：402-407.

[9]趙德培. 通過組織培養獲得蘿卜與大白菜的屬間雜種[J]. 實驗生物學報，1983，16（1）：21-29.

[10]張鳳銀，梅時勇，甘彩霞，等. 蘿卜與小白菜屬間雜交的初步研究[J]. 江漢大學學報（自然科學版），2010，38（4）：70-72.

[11]婁麗娜，劉 哲，許園園，等. 蘿卜與蕪菁異源三倍體雜種的獲得及鑒定[J]. 江蘇農業學報，2017，33（4）：881-889.

[12]周芳菊. 蕓薹屬與蘿卜屬間雜種的獲得及SSR分子鑒定[D]. 長沙：湖南農業大學，2006.

[13]李明山，索玉英，周長久. 大白菜與蘿卜屬間雜種幼胚離體培養的研究[J]. 園藝學報，1992，19（4）：353-357.

[14]Dolstra O. Synthesis and fertility of ×Brassicoraphanus and ways of transferring Raphanus characters to Brassica[D]. Wageningen，Holland： Centre for Agricultural Publishing and Documentation，1982.

[15]Morris L E，Richharia R H. A triploid radish × turnip hybrid and some of its progeny[J]. Journal of Genetics，1937，34（2）：275-286.

[16]Sun C Z，Ying L，Zhang S N，et al. Production of intergeneric allotetraploid between autotetraploid non-heading Chinese cabbage （Brassica campestris ssp. chinensis Makino） and autotetraploid radish （Raphanus sativus L.）[J]. Acta Societatis Botanicorum Poloniae，2014，83（1）：75-79.

[17]黃邦全，汪 偉，劉幼琪，等. Ogura CMS紫菜薹與蘿卜雙二倍體的獲得及細胞遺傳學研究[J]. 湖北大學學報（自然科學版），2002，24（3）：267-271.

[18]吳沿友，蔣九余. 白菜型油菜與藍花子的屬間雜交合子胚組織培養[J]. 植物生理學報，1996（2）：131.

[19]胡大有，王愛云，李 栒. 蘿卜與甘藍型油菜和黑芥的遠緣雜交親和性研究[J]. 作物研究，2006，20（2）：124-126.

[20]程雨貴. 蘿卜和甘藍屬間雜種的創建和研究[D]. 武漢：華中農業大學，2005.

[21]方智遠，孫培田，劉玉梅. 蘿卜與甘藍遠緣雜交研究初報[J]. 園藝學報，1983，10（3）：187-191.

[22]甘彩霞，何云啟，崔 磊，等. 蘿卜與苤藍屬間雜種胚離體培養[J]. 長江蔬菜，2012（14）：13-16.

[23]Li X L，Guo W W，Wang B，et al. Instability of chromosome number and DNA methylation variation induced by hybridization and amphidiploid formation between Raphanus sativus L. and Brassica alboglabra Bailey[J]. BMC Plant Biology，2010，10：207.

[24]扈新民. 甘藍與蘿卜屬間雜種的創建及鑒定[D]. 楊凌：西北農林科技大學，2009.

[25]蔣 振，張曉輝，蔣 磊，等. 青花菜與蘿卜屬間雜種的表型和分子鑒定[J]. 植物遺傳資源學報，2014，15（4）：859-864.

[26]李 倩，丁云花，李成瓊，等. 甘藍與甘藍型油菜-蘿卜d染色體附加系雜交F1代的獲得與鑒定[J]. 西南大學學報（自然科學版），2008，30（8）：67-71.

[27]甘彩霞，何云啟，崔 磊，等. 蘿卜與大頭菜屬間雜種胚的離體培養[J]. 長江蔬菜，2011（8）：18-20.

[28]曾令和，周長久. 蘿卜與芥菜屬間雜交的研究[J]. 園藝學報，1986，13（8）：193-196.

[29]Paulmann W，Rbbelen G. Effective transfer of cytoplasmic male sterility from radish （Raphanus sativus L.） to rape （Brassica napus L.）[J]. Plant Breeding，2010，100（4）：299-309.

[30]Metz P L J，Nap J P，Stiekema W J. Hybridization of radish （Raphanus sativus L.） and oilseed rape （Brassica napus L.） through a flower-culture method[J]. Euphytica，1995，83（2）：159-168.

[31]Lelivelt C L C，Lange W，Dolstra O. Intergeneric crosses for the transfer of resistance to the beet cyst nematode from Raphanus sativus to Brassica napus[J]. Euphytica，1993，68（1/2）：111-120.

[32]劉英春. 甘藍型油菜與蘿卜遠緣雜交的研究[D]. 重慶：西南大學，2014.

[33]Takeshita M，Kato M，Tokumasu S. Application of ovule culture to the production of intergeneric or interspecific hybrids in Brassica and Raphanus[J]. The Japanese Journal of Genetics，1980，55（5）：373-387.

[34]李旭峰. 甘藍型油菜與藍花子屬間遠緣雜交的研究[D]. 成都：四川大學，1991.

[35]陳洪高. 蘿卜-芥藍異源四倍體的結實性和可交配性研究[D]. 武漢：華中農業大學，2006.

[36]房相佑，謝國祿. 蘿卜與蕓薹野生種間屬間雜種的生產[J]. 國外作物育種，1998（1）：56-60.

[37]Zhan Z X，Nwafor C C，Hou Z K，et al. Cytological and morphological analysis of hybrids between Brassicoraphanus，and Brassica napus for introgression of clubroot resistant trait into Brassica napus L.[J]. PLoS One，2017，12（5）：e0177470.

[38]Benabdelmouna A，Guéritaine G，Abirached-Darmency M，et al. Genome discrimination in progeny of interspecific hybrids between Brassica napus and Raphanus raphanistrum[J]. Genome，2003，46（3）：469-472.

[39]Cheng F，Liang J L，Cai C C，et al. Genome sequencing supports a multi-vertex model for Brassiceae species[J]. Current Opinion in Plant Biology，2017，36：79-87.

[40]羅鴻源. 克服油菜遠緣雜交不親和性研究初報[J]. 湖南農業科學，1983（5）：18-20.

[41]周清元，李加納，殷家明，等. 白菜型油菜和羽衣甘藍種間雜交的初步研究 Ⅰ. 取材時間對子房離體培養結籽率的影響[J]. 西南農業大學學報（自然科學版），2003，25（6）：495-497，509.

[42]譚其猛，魏毓棠，魏寶琴，等. 十字花科蔬菜的遠緣雜交試驗——種屬間雜交親和力[J]. 沈陽農學院學報，1984（1）：1-7.

[43]Inomata N. Production of interspecific hybrids between Brassica campestris and Brassica oleracea by culture in vitro of excised ovaries and their progenies[C]//Akio Fujiwara. Plant tissue culture：proceedings，international congress of plant tissue and cell culture held at Tokyo and Lake Yamanake，Japan，1982.

[44]孟金陵，吳江生，韓繼祥. 母本基因組對油菜種間可交配性的影響[J]. 作物研究，1992，6（2）：28-32.

[45]吳江生，孟金陵. 甘藍型油菜×芥菜型油菜的種間可交配性及親和基因型的篩選[J]. 中國農業科學，1992，25（4）：36-40.

[46]吳 俊，李旭鋒，李 琳，等. 油菜諸葛菜屬植物雜交親和性研究[J]. 西南農業大學學報，1999，21（5）：412-416.

[47]孟金陵. 甘藍型油菜與甘藍雜交不親和性研究——Ⅰ.花粉-雌蕊相互作用及雜種早期胚胎發育[J]. 華中農業大學學報，1987，6（3）：203-208.

[48]林 超，孫 萍，程 斐，等. 蕓薹屬植物的遠緣雜交[J]. 山東農業科學，2007（4）：27-31.

[49]Lou L A，Lou Q F，Li Z A，et al. Production and characterization of intergeneric hybrids between turnip （Brassica rapa L. em. Metzg. subsp. rapa） and radish （Raphanus sativus L.）[J]. Scientia Horticulturae，2017，220：57-65.

[67]李象松，魏麗華，李炫麗，等. 蘿卜-芥藍異源四倍體F4和F10世代DNA甲基化變異的MSAP分析[J]. 華中農業大學學報，2010，29（1）：96-100.

[68]Cao L，Yu N，Li J，et al. Heritability and reversibility of DNA methylation induced by in vitro grafting between Brassica juncea and B. oleracea[J]. Scientific Reports，2016：27233.

[69]Vrana P B，Fossella J A，Matteson P，et al. Genetic and epigenetic incompatibilities underlie hybrid dysgenesis in Peromyscus[J]. Nature Genetics，2000，25（1）：120-124.

[70]Bowers J E，Chapman B A，Rong J，et al. Unravelling angiosperm genome evolution by phylogenetic analysis of chromosomal duplication events[J]. Nature，2003，422（6930）：433-438.

[71]馮 濤，劉 娟，華夏雪. 利用SSR、SRAP分子標記鑒定桃早熟芽變[J]. 江蘇農業科學，2017，45（6）：42-44.

[72]倪雅楠，劉 博. 龍爪槐SRAP-PCR反應體系的建立與優化[J]. 江蘇農業科學，2017，45（11）：19-22.

[73]Ghani M A，Sun Q，Li J X，et al. Phenotypic and genetic variation occurred during wide hybridisation and allopolyploidisation between Brassica rapa and Brassica nigra[J]. Scientia Horticulturae，2014，176（2）：22-31.

[74]Ghani M A，Li J X，Rao L L，et al. The role of small RNAs in wide hybridisation and allopolyploidisation between Brassica rapa and Brassica nigra[J]. BMC Plant Biology，2014，14：272.

[75]Ha M，Lu J，Tian L，et al. Small RNAs serve as a genetic buffer against genomic shock in Arabidopsis interspecific hybrids and allopolyploids[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2009，106（42）：17835-17840.