武漢地區(qū)314例消化系統(tǒng)疾病患者CYP2C19基因多態(tài)性分析

盛碧，陳永剛，王慧娟，紀剛劍，鄒吉利

（湖北省武漢市第三醫(yī)院 藥學部，湖北 武漢 430060）

CYP2C19酶是細胞色素P450酶系中的一種，該酶的缺陷在東方人中高達15%～23%，質(zhì)子泵抑制劑（proton pump inhibitors, PPIs）主要經(jīng)CYP2C19代謝，CYP2C19基因多態(tài)性影響質(zhì)子泵抑制劑療效[1-2]。國內(nèi)關(guān)于消化系統(tǒng)疾病中CYP2C19基因型報道基本集中于CYP2C19*2型和CYP2C19*3型，而關(guān)于2006年新發(fā)現(xiàn)的CYP2C19*17型鮮有報道[3]。本研究通過檢測CYP2C19*2、*3及*17等位基因，首次探討武漢地區(qū)消化系統(tǒng)疾病患者CYP2C19基因型、代謝表型及患者性別、年齡和不同臨床分型消化系統(tǒng)疾病與CYP2C19基因多態(tài)性的關(guān)系，旨在為我國消化系統(tǒng)疾病患者的個體化用藥提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月—2017年12月于湖北省武漢市第三醫(yī)院行CYP2C19基因多態(tài)性檢測的無血緣關(guān)系武漢地區(qū)漢族消化系統(tǒng)疾病患者314例。其中，男性159例，女性155例；年齡16～89歲。

1.2 標本采集

抽取患者外周靜脈血2 ml于乙二胺四乙酸抗凝管中，用于提取DNA。

1.3 儀器與試劑

人全血基因組DNA提取試劑盒、CYP2C19基因分型試劑盒購自武漢友芝友醫(yī)療科技有限公司，實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR）儀（美國安捷倫公司）。

1.4 檢測方法

抽取患者的外周靜脈血混合均勻后取200μl，利用DNA提取試劑盒從外周血細胞中提取全血基因組DNA，采用qRT-PCR檢測，利用分析軟件確定CYP2C19基因型。

1.5 CYP2C19基因分型及代謝表型檢測

本研究檢測的等位基因為CYP2C19*2、*3、*17（其中，*2對應(yīng)681位點G突變、*3對應(yīng)636位點G突變，*17對應(yīng)-806位點C突變），根據(jù)基因型結(jié)果判斷代謝表型。其中，CYP2C19*1*17和CYP2C19*17*17為超快代謝型（ultrarapid metabolism,UM），CYP2C19*1*1為快代謝型（extensive metabolism,EM），CYP2C19*1*2、CYP2C19*1*3、CYP2C19*2*17及CYP2C19*3*17為中間代謝型（intermediary metabolism, IM），CYP2C19*2*2、CYP2C19*2*3及CYP2C19*3*3為慢代謝型（poor metabolism, PM）[4-5]。

1.6 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 24.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料以率（%）表示，比較用Fisher確切概率法分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 患者的CYP2C19基因型和代謝表型

314例檢測樣本中有116例681位點G、636位點G及-806位點C未發(fā)生突變，198例樣本存在位點突變，共檢測出8種基因型和4種代謝表型，分別為CYP2C19*1*17、*1*1、*1*2、*1*3、*2*17、*3*17、*2*2及*2*3，未檢測到CYP2C19*17*17和*3*3基因型，*2、*3及*17基因型分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡（P=0.169、0.374和0.841）。見表1。

表1 314例患者CYP2C19基因型和代謝表型檢測結(jié)果

2.2 不同性別患者CYP2C19基因型、代謝表型比較

將基因型和代謝表型檢測結(jié)果按性別進行分組，結(jié)果顯示，不同性別消化系統(tǒng)疾病患者CYP2C19基因型、代謝表型比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表2。

2.3 不同年齡段患者基因型、代謝表型比較

檢測樣本按患者年齡分為＜40、40～＜60、60～＜80及≥80歲，結(jié)果顯示，不同年齡段消化系統(tǒng)疾病患者CYP2C19基因型分布比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；代謝表型分布比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表 3。

表2 不同性別患者CYP2C19基因型、代謝表型比較 例（%）

2.4 不同臨床分型患者基因型、代謝表型比較

檢測樣本按消化系統(tǒng)疾病的不同分為9種臨床分型，結(jié)果顯示，不同臨床分型患者CYP2C19基因型、代謝表型比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表4。

表3 不同年齡段患者基因型、代謝表型比較 例（%）

表4 不同臨床分型患者基因型、代謝表型比較 例（%）

3 討論

CYP2C19酶在質(zhì)子泵抑制劑、抗血小板藥物等約10%常規(guī)處方藥物的代謝中發(fā)揮重要作用。亞洲人群CYP2C19代謝表型以EM和IM型為主，PM型在亞洲人群中為13%～23%[7-8]。本研究中患者主要代謝表型為EM和IM型，分別為36.94%和45.54%，PM型為16.56%，所占比例符合亞洲人群分布情況[9-10]。CYP2C19*17等位基因頻率在亞洲人群較低，故UM型在亞洲人群較少見，本研究中UM型為0.96%，低于俄羅斯、瑞典、丹麥和沙特阿拉伯人群[11-12]。有研究表明，對于UM型者，PPIs標準劑量可能不能有效抑制胃酸分泌，因此，篩選出變異等位基因?qū)ο到y(tǒng)疾病患者個體化用藥劑量調(diào)整是很有必要的[13]。

CYP2C19*2是亞洲人群最常見的等位基因，該等位基因頻率在日本人群為30%，泰國人群為27%，高于歐洲人群和黑人的15%～17%[5，14-16]。CYP2C19*3等位基因頻率在亞洲人群也較高，印度尼西亞高達37%，日本為10.4%，韓國為11.6%，伊朗為1.7%，高于加拿大和丹麥人群的0%[6]。本研究中CYP2C19*2和CYP2C19*3等位基因頻率與報道的亞洲人群接近。CYP2C19*17是一種新的等位基因，該等位基因頻率在亞洲人群為0.3%～4.0%，歐洲人群為18%～28%，沙特阿拉伯人群為26.9%[6，17]。本研究中CYP2C19*17頻率為1.12%，符合亞洲人群分布情況。因CYP2C19*17等位基因的分布在世界范圍內(nèi)尚未得到充分研究[4，18]。本研究首次對武漢地區(qū)消化系統(tǒng)疾病患者CYP2C19*17型基因多態(tài)性進行研究，可為這種新的等位基因在不同人群中的分布提供參考依據(jù)。

近年來有報道表明，CYP2C19基因多態(tài)性與消化系統(tǒng)疾病的發(fā)生有關(guān)[19-22]。DENISENKO等[19]研究表明，俄羅斯消化性潰瘍患者中，UM型頻率較高。本研究中UM型頻率較低，可能是俄羅斯人群中攜帶CYP2C19*17基因頻率較高，而該基因型頻率在亞洲人群中偏低。有學者報道CYP2C19基因多態(tài)性與胃食管反流病相關(guān)，在反流性食管炎患者中，與PM型相比，EM型對PPIs治療無效的風險增加；PM型與亞洲人消化系統(tǒng)癌癥風險存在相關(guān)性[20-21]。另有學者報道，在基于埃索美拉唑根除幽門螺桿菌的三聯(lián)療法中，EM型根除率低于非EM型[22]。關(guān)于CYP2C19基因多態(tài)性與消化系統(tǒng)疾病不同臨床分型的關(guān)系可做進一步研究。

本研究首次分析武漢地區(qū)314例消化道疾病患者CYP2C19基因多態(tài)性，經(jīng)統(tǒng)計學分析顯示患者CYP2C19基因多態(tài)性符合亞洲人分布規(guī)律，與歐洲等其他國家有明顯不同。根據(jù)CYP2C19基因多態(tài)性，可為個體化用藥提供參考依據(jù)，提高療效并減少不良反應(yīng)的發(fā)生，促進個性化精準醫(yī)學的進步。