氣相色譜法同時測定卡莫司汀原料中3種有機溶劑殘留量

韓 彬，高燕霞，龐文哲，張軼華

（河北省藥品檢驗研究院，河北 石家莊 050011）

卡莫司汀又稱雙氯乙亞硝脲、亞硝基脲氮芥、卡氮芥，是目前使用較廣泛的周期非特異性抗腫瘤藥。人用藥品注冊技術要求國際協調會（ICH）規定了69種組分作為藥品中殘留溶劑的檢測對象，并規定了各組分在藥品中的殘留限度［1］。國內生產企業共用到有機溶劑3種，即甲酸、乙醇和N，N-二甲基甲酰胺（DMF）。卡莫司汀為 2010 年版《中國藥典（二部）》［2］收載，但均未對殘留溶劑進行控制，我國和歐洲藥典［2-3］均采用氣相色譜法測定揮發性溶劑的殘留量，也有采用氣相色譜（GS）法測定殘留溶劑的［4-5］。本研究中采用 GS法同時測定3種有機溶劑殘留量，直接進樣方式提高了甲酸和DMF的響應值，便于操作，可更好地控制藥品質量。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

ThermoTRACE1310型氣相色譜儀（Thermo公司）。

1.2 試藥

甲酸（批號為 20180912），乙醇（批號為20180201）和DMF（批號為20120319）均為色標物質，均購自天津市光復精細化工研究所；甲醇（色譜純，Fisher chemical）；卡莫司汀原料藥由河北某藥廠提供（批號分別為150901，150902，150903）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：HP-FFAP 柱（30 m ×0.53 mm，1 μm）；檢測器：FID；進樣量：1.0 μL；起始溫度：40 ℃ ，維持10 min，以10℃ ／min的速率升溫至200℃，維持3 min；進樣口溫度：200℃；檢測器溫度：230℃；載氣：N2；流速：3.0 mL ／min；分流比：5 ∶1。采用直接進樣方式，以甲醇作為溶劑，溶劑無干擾，氣相色譜圖見圖1。

圖1 氣相色譜圖

2.2 溶液制備

取甲酸、乙醇和DMF適量，精密稱定，用甲醇定量稀釋成每 1 mL 中約含甲酸 0.5 mg、乙醇 0.5 mg、DMF 0.088 mg的混合溶液，作為對照品溶液。取卡莫司汀原料約1.0 g，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察：取甲酸、乙醇和DMF適量，精密稱定，用甲醇定量稀釋成每1 mL中約含甲酸1.0 mg、乙醇 1.0 mg、DMF 0.176 mg的混合溶液，作為對照品貯備液，由對照品貯備液逐級稀釋，分別配制（按乙醇計）質量濃度為 0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.8，1.0 g ／L 的溶液，按擬訂色譜條件分析。以峰面積（A）為縱坐標、質量濃度（C）為橫坐標繪制標準曲線。結果見表1。

表1 3種殘留溶液的回歸方程與線性范圍（n＝7）

精密度試驗：取2.2項下對照品溶液，按擬訂色譜條件測定，連續進樣6次。結果甲酸、乙醇、DMF峰面積的RSD分別為 0.52%，1.04%和 1.31% （n＝6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取樣品（批號為 150901）1.0 g，精密稱定，按2.2項下方法平行制備6份，按擬訂色譜條件測定含量。結果甲酸、乙醇、DMF的平均含量分別為2.74%，0.047%，0.0029%，RSD分別為 0.72%，1.62%和 2.31% （n＝6）。

穩定性試驗：取對照品溶液分別于 0，2，4，8，12，24 h時進樣，測定各色譜峰峰面積。結果甲酸、乙醇、DMF峰面積的RSD分別為 0.81%，1.10%和 1.60% （n＝6），表明對照品溶液在24 h內基本穩定。

檢出限與定量限確定：將對照品貯備液逐級稀釋，按信噪比（S／N）＝3計算，甲酸、乙醇和DMF檢出限分別為 0.02，0.001 6，0.002 4 μg；按S／N＝10 計算，最低定量限分別為 0.07，0.004 5，0.007 μg。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為150901）約 1.5 g，精密稱定，置 10 mL容量瓶中，共 9份，按80%，100%，120%計算回收率。分別加入對照品溶液4，5，6 mL，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。按擬訂色譜條件分析，以外標法計算。結果見表2。

表2 加樣回收試驗結果（%，n＝9）

2.4 樣品含量測定

2010年版《中國藥典》附錄ⅧP中規定，甲酸限度為 0.5%，乙醇限度為 0.5% ，DMF 限度為 0.088% 。對3批卡莫司汀原料藥的殘留溶劑進行測定。結果見表3。可見，甲酸檢出量遠遠超過限度值，應加強對殘留溶劑的質量控制。

表3 3批樣品殘留溶劑含量測定結果（%）

3 討論

3.1 進樣方式和進樣口溫度選擇

由于DMF的沸點較高（149～156℃），不容易充分氣化，我國藥典中明確建議采用直接進樣法測定。文獻［6］報道用1，3-二甲基咪唑啉酮作為溶劑，采用頂空進樣法測定DMF殘留量，但該溶劑昂貴，檢驗成本較高。卡莫司汀熔點較低（30～32℃），遇熱不穩定，本研究中將進樣口溫度分別設為160℃和200℃進行試驗，試驗結果證明，2種溫度下產生的熱分解產物均與待測物質分離良好。為提高甲酸和DMF的靈敏度，故采用直接進樣方式，進樣口溫度設為200℃。

3.2 色譜柱選擇

由于甲酸和DMF極性較強，嘗試采用極性較強的色譜柱。試驗發現，使用HP-INNOWAX色譜柱（30 m×0.53 mm，3 μm）時，初始柱溫分別為 30，35，40 ℃時，乙醇峰均完全被甲醇峰包裹。使用HP-FFAP色譜柱時，待測色譜峰間分離良好，且與卡莫司汀熱降解產物也可達到完全分離。