上感合劑質量標準研究*

施 敏，管 敏

（南京中醫藥大學附屬醫院，江蘇 南京 210029）

上感合劑是我院針對上呼吸道感染、發熱研制的醫院制劑，由羌活、薄荷、柴胡、黃芩、青蒿、生石膏、大青葉、鴨跖草、甘草9味藥材組方，具有清熱透表的功效。處方以黃芩和柴胡為君藥，清解邪熱；薄荷、羌活、青蒿、生石膏同為臣藥，解肌除煩，利咽止痛；大青葉、鴨跖草為佐藥，清熱解毒瀉火。全方共奏衛氣同治、清熱透表之功效［1］。是我院奚肇慶教授的經驗方，臨床應用30多年，療效確切。上感合劑擴大了其中醫中藥的適應證，使用方便，退熱作用迅速而持久，適用于內科、兒科的臨床急診和危重癥。本研究中采用薄層色譜（TLC）法對該制劑中的羌活、大青葉、甘草3味藥材進行了定性鑒別，并采用高效液相色譜法對該制劑中君藥黃芩中的主要成分黃芩苷進行含量測定，建立上感合劑的定性、定量標準。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1260型安捷倫高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；AX2247H／E OHAUS型電子天平（千分之一，常州奧豪斯儀器有限公司）；BP211D型賽多利斯天平（萬分之一，德國賽多利斯科學儀器有限公司）；薄層層析硅膠G板（青島海洋化工廠分廠，批號為20160712；煙臺江友硅膠開發有限公司，批號為20160503）。

1.2 試藥

羌活（批號為 160901），黃芩（批號為 160401），大青葉（批號為 150301），甘草（批號為 161101），薄荷（批號為 160601），柴 胡 （批號 為 161001），青 蒿 （批 號為161201），生石膏（批號為 161201），鴨跖草（批號為160401），均購自安徽省萬生中藥飲片有限公司；靛玉紅對照品（批號為0717-200003），黃芩苷對照品（批號為110781-201213），甘草對照藥材（批號為 120904-201318），羌活對照藥材（批號為 120935-201413），均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇（色譜級），水為超純水，其他試劑均為分析純；上感合劑（江蘇省中醫院制劑部，批號分別為 170701，170702，170703）。

2 方法與結果

2.1 薄層鑒別

羌活：依據2015年版《中國藥典（一部）》羌活項下鑒別方法［2］進行適當改進。取上感合劑（批號為170701）20 mL（相當于羌活藥材1 g），蒸干，殘渣加甲醇10 mL，超聲處理30 min，過濾，得上清液，濃縮至5 mL，作為供試品溶液；另取羌活對照藥材1 g，同供試品溶液制備方法制備對照藥材溶液；取不含羌活的陰性對照溶液20 mL，同法制備陰性對照品溶液。硅膠G薄層板噴適量3% 醋酸鈉溶液，105℃活化1 h，照薄層色譜法，分別吸取上述3種溶液各5 μL，點于含醋酸鈉的薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（8∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，10%硫酸乙醇溶液顯色，105℃加熱3～5 min，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與羌活對照藥材溶液色譜相應位置上，顯相同的藍色熒光斑點，陰性對照無干擾，詳見圖1。

圖1 羌活的薄層色譜圖

大青葉：取上感合劑（批號為170701）10 mL（約相當于大青葉藥材0.5 g），加三氯甲烷20 mL，水浴加熱回流1 h，放冷使分層，取三氯甲烷層，濃縮至1 mL，作為供試品溶液。另取靛玉紅對照品，加三氯甲烷制成質量濃度為1 g／L的溶液，作為對照品溶液；取不含大青葉的陰性對照溶液10 mL，依法制備陰性對照品溶液。照薄層色譜法，分別吸取上述3種溶液各5 μL，點于硅膠G薄層板上，以環己烷-三氯甲烷-丙酮（5∶4∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，5 min內盡快觀察。供試品溶液色譜中，在與靛玉紅溶液色譜相應位置上，顯相同的淺紫紅色斑點，陰性對照無干擾，詳見圖2。

圖2 大青葉的薄層色譜圖

甘草：取上感合劑（批號為170701）25 mL（相當于甘草藥材1 g），用正丁醇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用水洗滌3次，棄去水液，正丁醇層蒸干，殘渣加甲醇5 mL使溶解，作為供試品溶液。取甘草對照藥材1 g，加甲醇30 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40 mL使溶解，而后同供試品溶液制備方法制備甘草對照藥材溶液。另取不含甘草的陰性溶液25 mL，同法制備甘草陰性對照品溶液。硅膠G薄層板噴適量1%氫氧化鈉溶液，105℃活化1 h，照薄層色譜法，分別吸取上述3種溶液各5 μL，點于含氫氧化鈉的薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15∶1∶1∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱5 min，紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與甘草對照藥材溶液色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾，詳見圖3。

圖3 甘草的薄層色譜圖

2.2 黃芩苷含量測定

2.1.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇 -0.2%磷酸溶液（47 ∶53）；流速：1.0 mL ／min；檢測波長：280 nm；進樣量：10 μL；柱溫：30 ℃。

2.2.2 溶液制備

取黃芩苷對照品適量，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL含黃芩苷123.0 μg的對照品溶液。精密吸取樣品溶液1 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲15 min，放冷，補足減失的甲醇至刻度，搖勻，過0.45 μm濾膜，濾過，制得供試品溶液。取缺黃芩的陰性制劑，按供試品溶液制備方法制備缺黃芩的陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學考察

專屬性試驗：按擬訂色譜條件，測定黃芩苷對照品溶液、供試品溶液和缺黃芩陰性對照品溶液的色譜圖，結果見圖4。可見，黃芩苷的色譜峰理論板數、分離度、拖尾因子均符合要求，陰性對照無干擾。

線性關系考察：取黃芩苷對照品溶液，依次稀釋2，4，8，16，32 倍。精密吸取上述對照品溶液，各進樣10 μL。以黃芩苷的質量濃度（X）為橫坐標、峰面積積分值（Y）為縱坐標，進行線性回歸，得黃芩苷的回歸方程Y＝25.65X-14.823（r2＝0.999 9），線 性 范 圍 為3.85 ～ 123.00 μg ／mL。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液，連續進樣6次，記錄黃芩苷對照品峰面積。結果的RSD為0.10%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：平行量取同一批（批號為170701）樣品，共6份，依法制備供試品溶液，進樣測定。結果的RSD為1.98%（n＝6），表明方法重復性良好。

圖4 高效液相色譜圖

穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，12，24 h時進樣，測定，計算峰面積。結果的RSD為1.28%（＜5%，n＝7），表明供試品溶液在 24 h內穩定。

加樣回收試驗：精密量取已知質量濃度的供試品溶液6份，每份1 mL，置100 mL容量瓶中，分別精密加入一定量的對照品溶液，超聲15 min，放冷，加甲醇定容至刻度，搖勻，過 0.45 μm 濾膜，濾過，進樣測定。結果見表1。

表1 黃芩苷加樣回收試驗結果（n＝6）

2.2.4 樣品含量測定

分別取不同樣品3批，依法制備供試品溶液，每批取3份，依法進樣測定，結果批號為170701，170702，170703的樣品中，每瓶黃芩苷含量分別為753.38，750.27，759.42 mg，RSD為 0.97% （n＝3）。

3 討論

3.1 薄層鑒別法定性藥材選擇

羌活的薄層鑒別參考2015年版《中國藥典（一部）》方法［2］，并作了適當改進，薄層板展開晾干后在紫外光燈（365 nm）下觀察，發現斑點不夠清晰，不易于觀察，故增加10%硫酸乙醇顯色，烘烤后，斑點更清晰。以羌活對照藥材為對照，增強了定性鑒別的準確性與可靠性，能較好地控制上感合劑的質量。大青葉的薄層鑒別參考2015年版《中國藥典（一部）》方法，對照品靛玉紅顯色清晰，有明顯鑒別點，因靛玉紅空氣中不穩定，易分解［3］，靛玉紅紫紅色斑點會逐漸變淡，取出晾干后應盡快觀察拍照。甘草的薄層鑒別參考2015年版《中國藥典（一部）》方法［2］，嘗試以甘草酸銨為對照，但甘草酸銨顯色需加熱較長時間，點樣量小顯色不明顯，量大容易拖尾，使用甘草對照藥材后，斑點清晰，且定性鑒別的成分信息更加豐富。

方中其他藥材薄荷、柴胡、青蒿、鴨跖草薄層鑒別采用藥典方法［2］和文獻［4-6］中的相關方法均不能得到理想結果。薄荷的鑒別中，供試品溶液中無與薄荷對照藥材溶液相對應的斑點，可能是薄荷在方中含量較少，且在煎煮和濃縮過程中揮發性成分有所損失。柴胡的鑒別方法學考察時，陰性對照有干擾，調整展開劑比例后，干擾仍存在，可能是方中有極性相近成分。青蒿和鴨跖草的鑒別中，供試品溶液中鑒別點沒有或不清晰。故上述4味中藥的定性鑒別未列入質量標準。

3.2 高效液相色譜法定量指標選擇

黃芩是該方君藥，現代藥理學研究表明，黃芩苷具有抗病毒、抗菌消炎等多重作用［6］，與該方的治療目的相一致，故以黃芩苷作為上感合劑含量測定指標，參考2015年版《中國藥典（一部）》黃芩項下的含量測定方法，對供試品溶液超聲時間進行考察，分別超聲15，30，45 min，結果黃芩苷含量無明顯差異，故確定供試品溶液制備方法為“樣品溶液1 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲15 min”。

3.3 不足

中藥制劑一般含藥味較多，成分復雜。因此，薄層鑒別中僅以化學物質作為對照難以鑒別各味藥材，特別是對照品為其非專屬性成分時，更加難以判斷所顯示的斑點是否源于該藥材，故在本研究中采用對照藥材作參照，可供鑒別的信息更豐富，提高鑒別結果的可靠性。現行制劑質量標準制訂模式中，含量測定指標的選擇多考慮主要成分、易得、易測、穩定等因素［7-9］，許多制劑的指標成分與藥效的發揮是否有直接關系并不確定，故并不能完全代表制劑的質量。在未來中藥及中藥制劑的質量標準研究過程中，必將逐漸采用“多組分”“質量標志物”等為指標綜合控制中藥及中藥制劑的質量，體現中藥的整體性和系統性。