酶標分析儀吸光度示值誤差測量結果的不確定度評定

孟祥文

【摘要】 本文依據JJG 861-2007《酶標分析儀》檢定規程和JJF 1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》，分析了可能影響酶標分析儀吸光度示值誤差測量結果的各不確定度分量的主要來源，給出了不確定度的評定過程。

【關鍵詞】 酶標分析儀;吸光度;不確定度

【DOI編碼】 10.3969/j.issn.1674-4977.2019.01.007

Abstract： According to the verification regulation of JJG 861-2007 ELISA Analytical Instruments and JJF 1059.1-2012 Evaluation and Expression of Uncertainty in Measurement，the main sources of uncertainty which may affect the absorbance measurement result of the ELISA analytical iInstruments were analyzed，and the evaluation process of uncertainty was given in this paper.

Key words： ELISA analytical instruments;absorbance;uncertainty

1 測量過程

在酶標分析儀檢定規程規定條件下，儀器開機預熱后，依次設置儀器波長為405 nm、450 nm、492 nm、620 nm，然后將吸光度標稱值為1.0 A的光譜中性濾光片平放在微孔酶標板的空板架上，以空氣為參比，連續測量3次，得到吸光度示值平均值，該平均值與相應波長下的吸光度標準值之差，即為吸光度的示值誤差。

2 數學模型

3 各輸入量的標準不確定度評定

3.1 輸入量[A]的標準不確定度[u（A）]評定

輸入量[A]的不確定度主要來源于酶標分析儀的示值不穩定性，可以在重復性試驗條件下，通過連續測量獲得，采用A類方法評定。也可以根據檢定規程中規定的示值穩定性要求，采用B類方法評定。現在分別用上述兩種方法進行不確定度分析。

1）以上海科華實驗系統有限公司生產的型號為ST-360的酶標分析儀為例，設置儀器波長為492 nm，選擇吸光度標稱值1.0 A的光譜中性濾光片，連續測量3次，得到數據如下：1.033、1.031、1.032，采用極差法計算實驗標準差。測量次數[n=3]時，極差系數C為1.69，計算實驗標準差為：

另外任意選擇3臺相同類型的酶標分析儀，每臺分別在波長405 nm、450 nm、492 nm、620 nm條件下，測定吸光度標稱值為1.0 A的光譜中性濾光片，連續測定3次，共得到12組測量列，每組測量列分別按上述方法計算單次實驗標準差，所得結果見表1。

合并樣本標準偏差為：

實際測量時是在重復性條件下，連續測量3次，以3次測得的算術平均值為測量結果，則測量重復性引入的標準不確定度分量為：

自由度為：

2）JJG 861-2007《酶標分析儀》檢定規程中所規定的示值穩定性應不大于±0.005 A，假設在該范圍內均勻分布，則由示值穩定性引入的標準不確定度為：

3.2 輸入量[As]的標準不確定度[u（As）]評定

輸入量[As]的標準不確定度主要由光譜中性濾光片的定值不確定度及其年變化量所引入，屬于B類標準不確定度。

3.2.1 光譜中性濾光片的定值不確定度[u（As1）]

根據光譜中性濾光片校準證書給出的吸光度定值的擴展不確定度為0.011 A，包含因子[k=2]，則標準不確定度為：

3.2.2 光譜中性濾光片的年變化量[引入的不確定度][u（As2）]

根據相關資料，光譜中性濾光片的年變化量為0.004 A，取均勻分布，則標準不確定度為：

3.2.3 輸入量As的標準不確定度[u（As）]

由于以上二項分量相互獨立不相關，將其合成，得到輸入量[As]的標準不確定度為：

4 合成標準不確定度

輸入量[A]與輸入量[As]相互獨立不相關，故合成標準不確定度為：

5 擴展不確定度

取包含因子[k=2]，則擴展不確定度為：

6 測量不確定度報告

酶標分析儀吸光度示值誤差測量結果的擴展不確定度為：

7 結語

綜上所述，在酶標分析儀吸光度示值誤差檢定時，其測量結果的不確定度主要來源于儀器示值穩定性、標準器定值不確定度以及標準器年變化量，其中標準器定值不確定度的影響最大。

【參考文獻】

[1] 測量不確定度評定與表示：JJF 1059.1-2012[S].

[2] 倪育才.實用測量不確定度評定（第5版）[M].北京：中國質檢出版社，2016.

[3] 董艷華.酶標分析儀示值誤差測量結果的不確定度評定[J].計量與測試技術，2012（1）：40+43.