黃芩有效成分的含量測定技術

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黃芩來源于唇形科植物黃芩的干燥根，是傳統的藥食兼用天然植物，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎之功效。現代研究表明，黃芩中的有效成分主要是黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素等。近年來，科研工作者針對黃芩中有效成分含量測定開展研究和應用，并取得諸多有價值的研究成果。綜述黃芩有效成分含量測定研究進展，為進一步開展黃芩相關研究提供參考。

1 高效液相色譜法

高效液相色譜法是中藥材有效成分含量測定的常用方法，具有精密度高、分離效能高等優點。李因澤等采用HPLC色譜法同時測定不同產地黃芩中的黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素、去甲漢黃芩苷、千層紙素A苷含量。采用Agilent?Zorbax?SB-C18色譜柱（250?mm×4.6?mm，5μm），以乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度為流動相，流速1.0?mL/min，檢測波長280?nm，柱溫30?℃。黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素、去甲漢黃芩苷、千層紙素A苷的線性關系良好，平均回收率在98.70%～99.17%之間。

2 反相高效液相色譜法

顏梅等采用反相高效液相色譜法測定黃芩中5種黃酮苷元成分含量。去甲漢黃芩素、黃芩素、漢黃芩素、白楊素、千層紙素A的進樣量分別在0.018?0～0.108?0、0.378?0～2.268?0、0.094?5～0.567?0、0.022?5～0.135?0、0.035?4～0.212?4μg范圍內與各自峰面積積分值呈良好的線性關系;精密度、重復性、穩定性試驗的RSD<3%;加樣回收率分別為98.72%、101.80%、99.25%、98.71%、99.05%。

3 近紅外光譜法

近紅外光譜是一種快速無損檢測技術，廣泛應用于天然藥物檢測，具有速度快、樣品處理簡單、對樣品沒有污染等特點。

王曉虹等結合化學計量學用近紅外光譜法對黃芩中總黃酮含量進行快速、無損定量分析。采集25份黃芩樣品的近紅外光譜數據，按紫外—可視分光光度法測定各黃芩樣品的總黃酮含量，再建立用樣品近紅外光譜預測總黃酮含量的定量分析模型，比較不同預處理方法及光譜區間對模型預測精度的影響。確定模型預測精度的交叉驗證均方根為1.18%，決定系數（R2）為0.81，殘留預測偏差（RPD）為2.34。

成東霞以黃芩苷含量為特征指標，探索應用近紅外光譜、高效液相色譜鑒定黃芩質量。研究結果表明：“矢量校正+一階導數預處理方法”為最優處理方法，采用本預處理方法建模得到最優模型，模型的決定系數（R2），校正標準差（SEC）和相對標準差（RSD）分別為93.67%，1.08，12.00%，使用32個檢驗集進行檢驗，得到決定系數（R2），預測標準差（SEP）和相對標準差（RSD）分別為89.07%，1.19，12.46%。用已知含量的黃芩樣品進行準確性檢測，確定模型可靠準確。

4 超高效液相色譜法

超高效液相色譜法借助于HPLC的理論及原理，涵蓋小顆粒填料、非常低系統體積、快速檢測手段等全新技術，增加分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。與傳統HPLC相比，UPLC的速度、靈敏度及分離度分別是HPLC的9倍、3倍及1.7倍，縮短分析時間，減少溶劑用量。

連中學等建立UPLC測定黃芩藥材中9種黃酮類成分含量的方法時，采用Waters?Acquity?BEH?C18色譜柱（50?mm×2.1?mm，1.7μm），以甲醇（A）-乙睛（B）-0.1%甲酸水溶液（C）為流動相，流速0.3?mL/min，檢測波長為278?nm和325?nm，柱溫30?℃。9種黃酮類化合物在12?min內達到基線分離，線性關系良好（r≥0.9991）。

5 超高效液相色譜-串聯質譜法

超高效液相色譜-串聯質譜技術將色譜的高鑒別性能和質譜的高分離特點完美結合，實現色譜和質譜互補，是比較先進的現代分析技術，具有分離能力高、靈敏度高、應用范圍廣和專屬性強等特點，符合現代藥物分析研究對高精密度和準確度分析方法的需求。

謝彤等采用超高效液相-三重四級桿串聯質譜（UPLC-MS/MS）的方法，采用Thermo?BDS?Hypersil?C18（2.1?mm×100?mm，2.3?μm）色譜柱進行色譜分離，柱溫為40?℃，乙腈（A）和0.1%甲酸水（B）梯度洗脫，流速0.25?mL/min，采用多反應監測的方法進行質譜掃描。白楊素、黃芩素、芹菜素、木蝴蝶素A、漢黃芩素、黃芩苷、漢黃芩苷、木蝴蝶苷A的定量范圍分別為0.975～62.5，4.875～2?500，0.975～62.5，0.097?5～12.5，

0.048?83～6.25，4.875～2?500，0.488?3～250，0.488?3～250?ng/mL，在該范圍內線性關系良好;8種指標性黃酮成分的回收率（n=6）分別為98.75%，96.44%，101.13%，99.41%，102.26%，98.45%，96.75%，99.42%;檢測方法的重現性和穩定性良好。

6 紅外光譜三級鑒別法聯合高效液相色譜-質譜法

IR-TL法可在增大樣品光譜分辨率的基礎上逐級放大相似光譜之間的差異，實現對成分復雜的樣品的區分。HPLC-MS法綜合HPLC分離能力和MS分辨能力，其MS檢測器是一種高靈敏度、高分辨的檢測器，不需要色譜分離即可準確定量，適于一些含量較低或者極性相近的成分分析。

趙勝男等研究不同生長期春秋兩季采收黃芩藥材中有效成分種類及含量的差異，以高效液相色譜-質譜聯用技術（HPLC-MS）分析藥材中6種黃酮類成分（千層紙素A、白楊素、黃芩素、漢黃芩素、黃芩苷、漢黃芩苷）含量的變化。IR-TL分析結果顯示，不同生長期黃芩所含黃酮類、苷類、糖類、酯類等成分均有所不同，其中二年生黃芩中的苷類物質含量最高、藥材質量更穩定;不同采收期對上述指標成分含量有較大影響，其中二年生春季采收樣品的整體含量高于同年份秋季采收樣品。

7 膠束電動毛細管色譜二極管陣列檢測法

毛細管電泳技術兼有電泳和色譜技術的雙重優點，具有高效、高速、高靈敏度、高自動化，以及樣品和試劑耗用量少等優點，廣泛應用于中藥成分含量分析研究。

韓樂等建立膠束電動毛細管色譜二極管陣列檢測法（MEKC-DAD）同時測定不同批次黃芩及其炮制品中黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素、千層紙素A及芹菜素含量。6個黃酮的濃度與峰面積的線性關系良好（r>0.9990）;加樣回收率為96.20%～103.6%。用此法測定黃芩中6個黃酮類成分含量，得到滿意結果。

8 結語

黃芩中有效成分含量測定方法有高效液相色譜法、反相高效液相色譜法、近紅外光譜法、超高效液相色譜法、超高效液相色譜-串聯質譜技術、紅外光譜三級鑒別法聯合高效液相色譜-質譜法和膠束電動毛細管色譜二極管陣列檢測法等。其中，多種色譜法聯用效果檢測速度高、靈敏度高、試劑耗用量少，檢測效果最佳。

收稿日期：2019-10-26

作者簡介：樊志強（1986—），男，講師，從事中藥提取及化學成分研究。

參考文獻

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[3]?成東霞.近紅外定量模型快速檢測黃芩中黃芩苷含量的方法研究[D].杭州：浙江工業大學，2016.

[4]?連中學，劉玉，柴俊雯，等.UPLC法同時測定黃芩中9種黃酮類成分的含量[J].中國中醫藥科技，2017，24（5）：604-606.

[5]?趙勝男，劉素麗，徐楊璐，等.紅外光譜三級鑒別法聯合高效液相色譜-質譜法研究不同采收期黃芩藥材的質量[J].中國藥房，2019，30（12）：1669-1674.

Research?Progress?on?the?Determination?of?Active?Components

of?Scutellaria?Baicalensis

FAN?Zhiqiang

（Benxi?Chemical?Industry?School，?Benxi?Liaoning?117004，?China）

Abstract：?Methods?for?the?determination?of?active?components?in?scutellaria?scutellaria?baicalensis?include?high?performance?liquid?chromatography，?reversed-phase?high?performance?liquid?chromatography，?near?infrared?spectroscopy，?ultra?high?performance?liquid?chromatography，?ultra?high?performance?liquid?chromatography-tandem?mass?spectrometry，?etc.?This?paper?reviewed?the?research?progress?on?the?determination?of?active?components?in?scutellaria?baicalensis，?in?order?to?provide?references?for?further?studies?on?scutellaria?baicalensis.

Key?words：?scutellaria?baicalensis;?effective?component;?content?determination;?Chromatography