生物安全對實驗室檢測非洲豬瘟病毒的重要性

張雪梅 祁俊娟 王丹怡 王艷紅 詹穎潔 唐艷榮

（北京市朝陽區(qū)動物疫病預防控制中心，北京 100018）

自2018年8月3日，經(jīng)中國動物衛(wèi)生與流行病學中心診斷并確診沈陽市沈北新區(qū)沈北街道（新城子）發(fā)生我國第一例非洲豬瘟疫情。至2019年3月22日全國共有28個省發(fā)生疫情，非洲豬瘟疫情已經(jīng)波及到多家上市公司，造成巨大經(jīng)濟損失，嚴重影響了生豬養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展，也對生豬產(chǎn)品質量安全和有效供給構成威脅。中國非洲豬瘟疫情防控形勢已十分嚴峻。

非洲豬瘟病毒（ASFV）是一種獨特的雙鏈DNA病毒，它是目前唯一的DNA蟲媒病毒。非洲豬瘟不是人畜共患病，不會感染人，同時它也不會感染豬之外的其他動物，不影響食品安全。世界動物衛(wèi)生組織將其列為法定報告動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。主要癥狀：自然感染潛伏期很短，發(fā)病時體溫升高至41℃，約持續(xù)4d，直到死前48h，體溫開始下降，同時臨床癥狀才顯示出來，豬只食欲減退，顯出極度需弱，呼吸困難，漿液或粘液結膜炎，有時會引起帶血性下痢，嘔吐，死亡。

主要病理變化：在耳、鼻、腋下、鹛腹、會陰、尾、腳無毛部分呈界線明顯的紫色斑。在淋巴節(jié)有豬瘟罕見的某種程度之出血現(xiàn)象；脾臟腫大，有些腫大可至10倍，質脆；循環(huán)系統(tǒng)：心包液特別多，多數(shù)呈現(xiàn)心包下及次心內膜充血；呼吸系統(tǒng)：喉、會厭有瘀斑充血及擴散性出血，鏡檢常有充血而沒有出血病灶，肺泡則呈現(xiàn)出血現(xiàn)象，淋巴球呈破裂。

我國的非洲豬瘟疫情由國外傳入。國內疫情傳播主要通過生豬及其產(chǎn)品跨區(qū)域調運、餐廚剩余物喂豬、人員與車輛帶毒傳播這三種途徑。由于在世界范圍內到目前為止沒有研發(fā)出可以有效預防非洲豬瘟的疫苗，豬一旦感染死亡率為100%，給我國疫病防控帶來非常大的安全隱患。所以及時發(fā)現(xiàn)疫情變得尤為重要。由于非洲豬瘟臨床癥狀與豬瘟癥狀相似，只能依靠實驗室監(jiān)測確診。

目前，實驗室檢測非洲豬瘟的方法主要有聚合酶鏈反應（PCR）、紅細胞吸附試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗。我實驗室主要采用實時熒光PCR方法對非洲豬瘟進行檢測。實時熒光PCR是最廣泛應用的病毒學診斷技術，敏感度高、特異性強、能夠實現(xiàn)ASFV核酸的快速檢測。此法容易發(fā)生交叉污染，應該采取適當?shù)念A防措施來減少和控制污染風險的發(fā)生。

非洲豬瘟病毒對溫度和pH的抵抗力較強，在低溫暗室內存在血液中之病毒可生存六年，室溫中可活數(shù)周，加熱被病毒感染的血液55℃30分鐘或60℃10分鐘病毒將被破壞，許多脂溶劑和消毒劑可以將其破壞。

針對ASFV特點及PCR診斷技術的特點，做好實驗室生物安全尤為重要。下面從幾方面談一下實驗室生物安全。

第一、實驗室設計，PCR實驗要求在生物安全二級（BSLII）及以上實驗室來完成。實驗室選址、設計和建造應符合國家和地方環(huán)境保護和建設主管部門等的規(guī)定和要求。實驗室內部必須分區(qū)，避免交叉污染，實驗室的走廊和通道應不妨礙人員和物品通過。

第二、實驗室的設計應保證對生物、化學、輻射和物理等危險源的防護水平控制在經(jīng)過評估的可接受程度，防止危害環(huán)境。實驗室的建筑材料和設備等應符合國家相關部門對該類產(chǎn)品生產(chǎn)、銷售和使用的規(guī)定和要求。

第三、應有專門設計以確保存儲、轉運、收集、處理和處置危險物料的安全。應清楚地標示出具體的危險材料、危險，包括：生物危險、有毒有害、腐蝕性、輻射、刺傷、電擊、易燃、易爆、高溫、低溫、強光、振動、噪聲、動物咬傷、砸傷等；需要時，應同時提示必要的防護措施。

（1）實驗室應標示危險區(qū)、警示區(qū)，包括用于特殊情況下的臨時標識，如“污染”、“消毒中”、“設備檢修”等。在某些情況下，宜同時使用標識和物理屏障標示出危險區(qū)。

（2）標識應明確、醒目和易區(qū)分。只要可行，應使用國際、國家規(guī)定的通用標識。

（3）實驗室入口處應有標識，明確說明生物防護級別、操作的致病性生物因子、實驗室負責人姓名、緊急聯(lián)絡方式和國際通用的生物危險符號；實驗室所有房間的出口和緊急撤離路線應有在無照明的情況下也可清楚識別的標識；所有管道和線路應有明確、醒目和易區(qū)分的標識；在須驗證或校準的實驗室設備的明顯位置注明設備的可用狀態(tài)、驗證周期、下次驗證或校準的時間等信息。

（4）所有操作開關應有明確的功能指示標識，必要時，還應采取防止誤操作或惡意操作的措施。

實驗室的生物安全管理

第一、建立質量與生物安全管理體系：設立生物安全委員會，要建立生物安全監(jiān)督員和內審員隊伍，定期進行生物安全督促檢查；要求各部門執(zhí)行本單位編制的實驗室質量與生物安全管理體系文件，并按文件規(guī)定的程序開展各項管理活動。實驗室管理層應負責安全管理體系的設計、實施、維持和改進，實驗室安全管理體系應與實驗室規(guī)模、實驗室活動的復雜程度和風險相適應。

第二、人員管理：實驗室生物安全工作的關鍵是人，人員要緊繃生物安全這根弦，保證所有實驗人員持證上崗，所有實驗人員經(jīng)常進行專業(yè)和管理培訓，以達到增強生物安全防范意識的目的。工作中必須做好人員防護。抓好實驗室生物安全人才隊伍建設。

第三、菌（毒）種和陽性樣本的管理：嚴格按照國家相關規(guī)定由熟悉相關的生物安全知識的人員實行雙人雙鎖管理制度。

第四、環(huán)境與設備管理：按《實驗室生物安全通用要求》對實驗室生物安全實行分級管理。制定相應的操作規(guī)程并合理使用。重點提到是生物安全柜、無菌操作臺、高壓滅菌器的科學使用，銳器的使用和存放也應合乎要求，消防器具不但在品種上要滿足實驗室的特殊要求，而且要在保質期內使用。

第五、廢棄物安全管理是防止生物安全事件的重要一環(huán)。病原微生物實驗室的培養(yǎng)物、儲存物、垃圾以及其他廢棄物的處理和處置必須以安全為目的，要制定消毒制度，儲備消毒劑，而且要確保消毒劑的有效性并對消毒效果進行判定。

第六、檢測不同的實驗要按不同的等級做好個人防護，建立應急預案。

第七、實驗室一天內必做事情：早起第一件事就是給實驗室通風；開啟實驗室必備的儀器；檢查實驗室的衛(wèi)生情況，及時處理垃圾，保持干凈整潔；檢查實驗室各種儀器的安全，尤其是電源插口處，是否有松動，及時插緊；實驗室的危險儀器的使用，必須做到儀器在人在，以防出現(xiàn)事故及時處理；晚上離開實驗室，切斷一些儀器的電源，并關好門窗，帶走廢棄物。

病原微生物實驗室的安全性取決于實驗人員的安全意識，實驗室設施的建設，防護設備的配置和管理體系的完善，才能保證生物安全。只有在保證生物安全的基礎上，對非洲豬瘟病毒的實驗室檢測才能確保真實有效，對非洲豬瘟疫情才能做到及時發(fā)現(xiàn)，提早控制，防止疫情的進一步擴散。