淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療對(duì)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者BA水平及妊娠結(jié)局的影響

朱淑嬪 趙軍招

(溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院生殖中心 溫州 325000)

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(Recurrent spontaneous abortion ，RSA)發(fā)病率逐年上升，其發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜[1]。有研究證實(shí)，RSA會(huì)降低機(jī)體細(xì)胞免疫功能[2]。淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療(Lymphocyte active immunotherapy，LIT)能夠有效控制母體對(duì)胚胎免疫排外反應(yīng)，是治療RSA的首選[3]。本研究回顧性分析RSA患者的臨床資料，旨在探討LIT對(duì)RSA患者BA水平及妊娠結(jié)局的影響。

1 一般資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年4月～2018年4月我院收治的102例RSA患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)連續(xù)流產(chǎn)≥3次；(2)血清BA呈陰性且內(nèi)分泌水平正常；(3)夫婦雙方染色體核型正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)配偶精液異常；(2)TORCH檢測(cè)呈陽(yáng)性；(3)有生殖道感染及生殖道畸形。按照隨機(jī)數(shù)字法分為觀察組53例和對(duì)照組49例。觀察組平均年齡(30.24±1.21)歲，流產(chǎn)次數(shù)3～5次；對(duì)照組平均年齡(31.20±1.17)歲，流產(chǎn)次數(shù)3～5次。兩組患者年齡、流產(chǎn)次數(shù)等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且均簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

全組患者均接受黃體酮膠囊200mg/d保胎治療，觀察組加用LIT治療。具體方法如下：抽取20～30ml配偶或第三方健康供血者外周靜脈血，保存。將抽取靜脈血加入25ml肝素鈉(東營(yíng)天東制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)：H20058187)及25ml生理鹽水；采用Ficoll密度梯度離心法分離淋巴細(xì)胞，使用無(wú)菌生理鹽水洗滌3次，清除血小板，制作成濃度為2～4×107個(gè)/ml的淋巴細(xì)胞懸液；患者均行常規(guī)消毒后，取前臂內(nèi)側(cè)皮注，分為6～8點(diǎn)，0.2～0.3ml次/點(diǎn)，注射點(diǎn)之間間隔3cm。免疫治療每4次一個(gè)療程，每次間隔4周。1個(gè)療程后復(fù)查兩組患者BA水平，若未到達(dá)正常水平，則繼續(xù)加強(qiáng)免疫治療；若到達(dá)正常水平，則鼓勵(lì)妊娠，在確定宮內(nèi)妊娠跡象后免疫治療3周/次，妊娠16周后，超聲檢查胎兒正常后停止治療。

1.3 觀察指標(biāo)

治療前及治療3個(gè)療程后，抽取2ml雙方外周靜脈血，分離血清；采用雙熒光標(biāo)記流式細(xì)胞分析儀(諾詩(shī)樂(lè)生物科技(蘇州)有限公司，Namocell)檢測(cè)外周血T細(xì)胞中CD3+、CD4+、CD8+封閉效率(BE)，BA轉(zhuǎn)陽(yáng)治療后由負(fù)值轉(zhuǎn)為正值。1ml外周靜脈血直接離心取血清，采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)患者血清腫瘤壞死因子α(Tumor necrosis factor alpha，TNF-α)、干擾素(interferon，INF)-γ、白細(xì)胞介素(Interleukin，IL)-4及IL-10細(xì)胞因子水平，并統(tǒng)計(jì)患者治療后妊娠情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組患者免疫治療前后外周血T淋巴細(xì)胞BE變化比較

治療3個(gè)療程后，觀察組轉(zhuǎn)陽(yáng)50例(96.15%)，對(duì)照組轉(zhuǎn)陽(yáng)43例(87.76%)。組間比較，觀察組CD3+BE、CD4+BE、CD8+BE明顯高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

組別CD3+BECD4+ BECD8+ BE觀察組(n=53)治療前-1.71±1.390.19±1.350.63±0.43治療后1.70±1.37?1.73±1.38?1.49±0.43?對(duì)照組(n=49)治療前-1.53±1.330.22±1.330.72±0.77治療后1.26±1.39?1.39±1.23?1.02±0.35?

注：*表示治療后組間比較，P<0.05。

2.2 兩組患者免疫治療前后血清細(xì)胞因子水平比較

兩組患者組內(nèi)治療后比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；組間比較，觀察組治療后TNF-α、INF-γ水平明顯低于對(duì)照組，IL-4、IL-10水平明顯高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

組別TNF-αINF-γIL-4IL-10觀察組(n=53)治療前29.18±5.97334.64±61.3410.64±3.4417.41±4.36治療后24.37±5.93?254.44±69.37?12.30±3.74?20.20±4.56?對(duì)照組(n=49)治療前30.94±5.84335.23±70.7210.73±3.5817.45±4.43治療后27.67±5.38278.70±64.379.33±3.2615.37±4.63

注：*表示治療后組間比較，P<0.05。

2.3 配偶或第三方淋巴細(xì)胞對(duì)主動(dòng)免疫治療療效的影響

治療后，配偶或第三方淋巴細(xì)胞與各指標(biāo)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；妊娠結(jié)局，配偶或第三方淋巴細(xì)胞與妊娠失敗患者比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表3。

表3 配偶或第三方淋巴細(xì)胞對(duì)主動(dòng)免疫治療療效的影響

項(xiàng)目CD3CD4CD8配偶68.93±6.3735.03±5.9130.87±7.33第三方66.32±6.3533.99±5.5230.41±7.38t2.0700.9160.315P0.0410.3610.752

2.4 兩組患者妊娠結(jié)局比較

觀察組治療成功率79.25%明顯高于對(duì)照組的40.82%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=14.202,P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 兩組患者妊娠結(jié)局比較[n(%)]

組別成功分娩流產(chǎn)治療成功率觀察組(n=53)42(79.25)11(20.75)79.25(42/53)對(duì)照組(n=49)20(40.82)29(59.18)40.82(20/49)

3 討論

RSA的病因主要分為非免疫性和免疫性兩大類，免疫性包括自身相關(guān)型和同種免疫型[4]。相關(guān)研究表明，母胎雙方免疫不適應(yīng)，造成母體排斥胚胎，從而形成流產(chǎn)；同種免疫型中T淋巴細(xì)胞具有重要意義[5]。

正常孕產(chǎn)婦的血清中分布大量BA，因其具有抗原和阻礙組合的特點(diǎn)，能夠結(jié)合胎兒胎盤(pán)滋養(yǎng)層抗原阻滯母體免疫系統(tǒng)識(shí)別和殺傷胚胎父系抗原[6]，臨床BA缺乏代表T淋巴細(xì)胞活化比率不足[7]。本研究結(jié)果表示，兩組患者采用LIT治療3個(gè)療程后，觀察組轉(zhuǎn)陽(yáng)率96.15%與對(duì)照組轉(zhuǎn)陽(yáng)率87.76%比較，治療后觀察組CD3+BE、CD4+BE、CD8+BE明顯高于對(duì)照組，提示LIT方案能夠有效改善BA水平，使其達(dá)到正常水平，Th1/Th2平衡與RSA患者妊娠結(jié)局密切相關(guān)[8]。本研究發(fā)現(xiàn)從妊娠結(jié)局上來(lái)看，使用父系淋巴細(xì)胞或第三者淋巴細(xì)胞都無(wú)差異性，這與有關(guān)研究一致。本研究結(jié)果表示,LIT方案治療RSA患者療效顯著，能夠?qū)A轉(zhuǎn)陽(yáng)率及T淋巴細(xì)胞BE水平進(jìn)行增高，同時(shí)能維持Th1/Th2細(xì)胞因子平衡。

綜上所述，LIT治療RSA患者療效顯著，有利于增高BA水平轉(zhuǎn)陽(yáng)和T淋巴細(xì)胞BE水平，同時(shí)提高患者成功妊娠率。