Notch-1、Notch-3和Hes-1在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義*

張映城，矯健鵬，李勇進(jìn)，秦志豐，岳小強，魏品康，顏兵

（1.中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)附屬長征醫(yī)院 中醫(yī)科，上海 200003；2.中國人民解放軍總醫(yī)院海南醫(yī)院 腫瘤科，海南 三亞 572000）

Notch信號通路可能在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起到一定的作用。在哺乳動物中，目前發(fā)現(xiàn)Notch信號通路存在Notch-1、Notch-2、Notch-3、Notch-4 4個受體及Jag-1、Jag-2和DLL-1、DLL-3、DLL-4 5個配體，其常見的經(jīng)典下游基因有Hes-1[1]。在惡性腫瘤中，Notch信號通路不同的配體和受體表達(dá)具有不同的意義，比如REEDIJK等[2]研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌中高Notch-1和Jag-1共表達(dá)提示患者不良預(yù)后；LIN等[3]在頭頸部腫瘤中亦有類似發(fā)現(xiàn)；LEE等[4]在非小細(xì)胞肺癌中發(fā)現(xiàn)Notch-3高表達(dá)和T分期負(fù)相關(guān)。然而，對Notch信號通路相關(guān)受體和配體在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義尚不明確。基于此背景，本研究旨在分析Notch-1、3及Hes-1在胃癌中的表達(dá)及其與相關(guān)臨床病理參數(shù)的聯(lián)系。

1 資料與方法

1.1 臨床標(biāo)本

選取2014年1月—2016年1月中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)附屬長征醫(yī)院首次活檢病理確診的胃腺癌患者30例，所有患者術(shù)前均未接受新輔助治療。患者病理分期參照第7版美國癌癥聯(lián)合委員會（AJCC）指南，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 試劑及實驗方法

人胃癌標(biāo)本的處理采取本院病理科標(biāo)準(zhǔn)法處理，免疫組織化學(xué)（以下簡稱免疫組化）染色簡述如下：取4 μm薄層切片，常規(guī)處理后按比例加入一抗[兔抗人Notch-1單克隆抗體（ab52627）、兔抗人Notch-3多克隆抗體（ab23426）、兔抗人Hes-1單克隆抗體購（ab108937）購自美國Abcam公司]，過夜加入二抗后常規(guī)顯色，樹脂封片后晾干保存。

1.3 數(shù)據(jù)讀取

免疫組化結(jié)果分別由2位獨立的病理科醫(yī)師完成，取兩者均數(shù)為最終結(jié)果。讀數(shù)標(biāo)準(zhǔn)如下：取染色良好切片，顯微鏡100倍視野下隨機選取5個視野。采用下列方法判斷染色結(jié)果。將染色強度（0：無染色，1：輕度，2：中度，3：高度）和染色范圍（0：1%～10%，1：＞10%～25%，2：＞25%～50%，3：＞50%～75%，4：＞75%）兩者取乘積，按0～12分為4個等級，以0得0分，1～4得1分，5～8得2分，9～12得3分的方法取值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法；相關(guān)分析采用Spearman法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者一般情況

本研究共納入30例不同分期的胃癌患者。其中，男性21例，女性9例，男∶女約為2.3∶1，符合我國胃癌男性多于女性的特點；年齡22～85歲，平均54.10歲。

2.2 Notch-1、Notch-3和Hes-1與TNM分期的相關(guān)性

Notch-1和Hes-1陽性率在不同的T分期中差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其中在中晚期患者中較高。Notch-3的陽性率僅在不同年齡的患者間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其他臨床病理參數(shù)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（見附表）。通過進(jìn)一步相關(guān)性分析表明，Notch-1的表達(dá)和Hes-1有相關(guān)性（r=0.471，P=0.009），而 Notch-1 和 Notch-3（r=0.308，P=0.097）、Notch-3和Hes-1（r=0.218，P=0.247）的表達(dá)無相關(guān)性。

Notch-1表達(dá)多表現(xiàn)為細(xì)胞膜染色，核陽性少見，在胃癌細(xì)胞中表達(dá)高于周邊細(xì)胞；Notch-3在胃癌細(xì)胞中多呈核陽性；Hes-1表達(dá)以細(xì)胞核陽性為主。見附圖。

附表 不同影響因素Notch-1，Notch-3，Hes-1表達(dá)陽性率的比較 例

附圖 Notch-1、Notch-3和Hes-1在胃癌中的表達(dá) （×100）

3 討論

本研究結(jié)果顯示，N otch信號通路相關(guān)受體Notch-1、Notch-3及其下游基因Hes-1在不同分期的胃癌患者中均存在一定表達(dá)，Notch-1和Hes-1的表達(dá)有相關(guān)性，兩者在不同的T分期中表達(dá)均有差異。本研究提示Notch-1和Hes-1在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中可能比Notch-3作用更重要，但未來仍需進(jìn)一步研究。

既往研究提示，Notch信號通路的不同的受體和配體均在胃癌中有所表達(dá)，如DU等[5]通過一項包含15項研究的Meta分析發(fā)現(xiàn)Notch-1、Notch-2、Notch-3、Jag-1、Jag-2、DLL-4及Hes-1在胃癌中高表達(dá)，但部分研究結(jié)論并不完全一致。相比其他的受體和配體，Notch-1在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義基本明確。研究顯示Notch-1在胃癌中高表達(dá)，且和不良預(yù)后因素相關(guān)，如YEH等[6]報道Notch-1在胃癌組織中的激活能夠促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展；李大衛(wèi)等[7]通過免疫組化對比168例胃癌和27例正常胃黏膜發(fā)現(xiàn)，Notch-1在胃癌組織中表達(dá)增加且和腫瘤大小、分化程度、浸潤深度、血管侵襲等相關(guān)，Notch-1陽性的患者3年生存率低于陰性的患者；SUN等[8]同樣發(fā)現(xiàn)Notch-1在胃癌中高表達(dá)，且和腸型胃癌聯(lián)系密切；DU等[5]報道盡管Notch-1和腫瘤體積、淋巴結(jié)侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等相關(guān)，但卻和彌漫型胃癌相聯(lián)系。綜合既往的研究基本可看出，Notch-1在胃癌中提示不良預(yù)后，在本研究中，Notch-1和高T分期中更傾向于高表達(dá)，這和既往研究結(jié)果較為一致，但在其他病理參數(shù)上（如胃癌Lauren分型）并未得出有意義結(jié)論，提示未來仍需進(jìn)一步擴大樣本量。

Notch-3在分子結(jié)構(gòu)上和Notch-1并不完全一致，兩者功能不完全重疊。對Notch-3在腫瘤中的意義有不少報道，如在膽囊癌中，LIU等[9]報道，Notch-3在腺鱗癌及鱗癌中表達(dá)較高，且和小瘤塊、TNM分期較早相關(guān)；但不論是在何種病理類型的膽囊癌中，Notch-3的高表達(dá)都和不良預(yù)后相關(guān)；在非小細(xì)胞肺癌中，LEE等[4]報道Notch-3和高T分期呈負(fù)相關(guān)，但無預(yù)后意義。在胃腸道腫瘤中，SERAFIN等[10]報道Notch-3高表達(dá)可促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖；與之類似，OZAWA等[11]報道Notch-3核陽性在Ⅱ期和Ⅲ期結(jié)腸癌中和腫瘤復(fù)發(fā)相關(guān)。在胃癌中關(guān)于Notch-3的報道較少，結(jié)論也極為不一致。如DU等[5]通過Meta分析發(fā)現(xiàn)Notch-3在胃癌中高表達(dá)且和彌漫性胃癌相關(guān)；KANG等[12]卻發(fā)現(xiàn)Notch-3在腸型胃癌中高表達(dá)且和良好預(yù)后相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，Notch-3在胃癌中呈現(xiàn)核陽性表達(dá)，但其與相關(guān)臨床病理參數(shù)尚無相關(guān)，提示未來對于Notch-3在胃癌中的表達(dá)狀態(tài)及其臨床意義仍需要進(jìn)一步的研究。

HES和HEY是Notch信號通路經(jīng)典下游基因，在惡性腫瘤中，Notch-1和Hes-1信號通路常常是調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖的關(guān)鍵通路（如膠質(zhì)瘤[13]）。Hes-1基因?qū)τ谡{(diào)控胃腸道正常干細(xì)胞具有至關(guān)重要的作用[14]，也是促成消化道腫瘤的關(guān)鍵[15]。值得注意的是由于Notch-1在消化道腫瘤中的高表達(dá)，Notch-1也往往是Hes-1高表達(dá)的主要原因（如胰腺癌[16]、腸癌[17]），盡管在胃癌細(xì)胞株中同樣發(fā)現(xiàn)Notch-1可導(dǎo)致Hes-1高表達(dá)[18]，但在胃癌標(biāo)本中此類研究較少。本研究中發(fā)現(xiàn)Notch-1高表達(dá)和Hes-1相關(guān)，和既往研究結(jié)論較為一致。

本研究尚存在以下不足，首先是樣本量較小有可能導(dǎo)致結(jié)論不準(zhǔn)確，盡管部分結(jié)論和既往研究較為一致，但仍存在不一致之處，且無法明確解釋，需要進(jìn)一步擴大樣本量。二是本研究納入患者含所有臨床分期，因不同分期患者后續(xù)治療上無法統(tǒng)一，即便隨訪存在部分生存數(shù)據(jù)，但因無法排除不同治療方法等混雜因素，尚無法分析上述指標(biāo)和患者最終生存的關(guān)系，需后續(xù)進(jìn)一步研究。