西安地區健康兒童血清缺血修飾清蛋白參考區間的建立

史劍飛，盧北玲，李 俏，毛 瑞，曹三成，寧遠征

（1.西安市兒童醫院檢驗科，西安 710003；2.西安市中醫醫院檢驗科，西安 710021）

血清缺血修飾清蛋白（ischemia modified albumin，IMA）是正常人清蛋白發生氧化應激自由基損傷后形成的產物。清蛋白在缺血缺氧或酸中毒等病理條件下氨基酸N-末端被修飾，導致其與重金屬離子（Cu2+，Ni2+和Co2+等）結合的能力下降，根據此原理檢測IMA的生成[1]。研究發現IMA在心肌梗死[2]，苯丙酮尿癥[3]，兒童哮喘[4]等疾病進展中表達顯著升高。IMA已經被廣泛應用于臨床各種疾病的診斷評估與病情監測，目前國內外暫無統一的兒童IMA參考區間，多參考試劑說明書且均為成人參考區間，因此建立西安地區兒童的參考區間尤為重要[5]。本實驗室依據現有的檢測系統，結合統計學分析初步建立西安地區0～12歲健康兒童IMA的參考區間，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2019年7月1日～8月15日在西安市兒童醫院兒童保健科健康體檢兒童260例，其中按性別分為男性組140例，女性組120例；按年齡分為≤1歲組41例、1～3歲組56例和≥3歲組163例。收集上述健康兒童的血清進行檢測。所有入選兒童無黃疸、心肌缺血性疾病、手術外傷以及用藥史等，肝功能、腎功能、心肌酶和血脂檢查均正常且血清標本無溶血、乳糜和黃疸。

1.2 試劑與儀器 上海科華生物工程股份有限公司的IMA檢測試劑以及配套校準品和質控品，美國貝克曼庫爾特AU5800全自動生化分析儀，采用清蛋白-鈷結合法，根據IMA標準操作程序檢測IMA水平。

1.3 方法

1.3.1 檢測儀器性能驗證：根據CLSI-EP9-A2文件，對本實驗室AU5800分析系統的批內精密度、批間精密度、線性范圍和可報告范圍等進行驗證以滿足臨床檢測需求。

1.3.2 建立參考區間：①標本采集與檢測：根據試劑說明書要求，收集健康體檢兒童血清3ml上機檢測；②離群值剔除：采用Dixon法，將數據從小到大排列，可疑離群值與其相鄰值之差為D，R為所有數據最大值與最小值之差，若D/R≥1/3，則作為離群值剔除，以此類推；③初步分組：根據健康體檢兒童的性別和年齡進行分組和統計分析；④參考區間驗證：選取在西安市兒童醫院兒童保健科進行健康體檢的男性和女性各20例，對本實驗室建立的血清IMA參考區間進行驗證，若男性和女性兒童的血清IMA濃度值落在參考區間之外不超過2例，說明建立的參考區間適用。

1.4 統計學分析 采用GraphPad Prism5.0對所有數據進行統計學分析。選擇D檢驗法（D'Agostino-Pearson法）判斷數據是否為正態分布，P＞0.1數據呈正態分布，若數據呈正態分布，采用95%參考值范圍±1.96s計算參考區間；若數據呈偏態分布，則采用單側95%分位數法（P95）計算參考區間。不同性別組間的比較采用Mann-Whitney U檢驗，不同年齡組間的比較采用Kruskal-Wallis H檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 檢測系統性能驗證 檢測系統的批內精密度、批間精密度、線性范圍和可報告范圍等各項指標均符合試劑廠家性能參數要求。

2.2 離群值判斷和剔除 260例數據中最大值為79 U/ml，最小值為46 U/ml，則全矩R為33 U/ml，D為14 U/ml，D/R＞1/3，79 U/ml數據被剔除不可用。以此類推，共259例數據被納入。

2.3 血清IMA水平的數據分布 IMA總體數據判斷：P=0.002＜0.10，呈偏態分布；健康男性兒童數據判斷：P=0.002＜0.10，呈偏態分布；女性數據判斷：P=0.112＞0.10，呈正態分布。

2.4 血清IMA在不同性別間的數據比較 男性和女性兒童組間IMA結果表達（70.47±2.64U/ml vs 69.61±3.14U/ml），差異有統計學意義（U=6 954, P=0.021＜0.05）。

2.5 血清IMA在不同年齡組間的數據比較 ≤1歲組（n=41，69.71±3.27U/ml）、1～3歲 組（n=56，70.66±2.77U/ml）和≥3歲組（n=162，69.97±2.87U/ml）間血清IMA結果分別比較，差異均無統計學意義（H=1.813，P=0.404）。

2.6 IMA參考區間的確立 以單側95%分位數法計算男性兒童血清IMA的參考區間：P95=74 U/ml；以95%參考值范圍±1.96s計算女性兒童血清IMA的參考區間：63.46～75.76U/ml。清蛋白-鈷結合檢測法檢測西安地區健康兒童血清IMA的參考區間：男性0～74.00 U/ml，女性0～75.76 U/ml。

2.7 參考區間的驗證 選取西安地區健康體檢的男性和女性兒童各20例，其中19例男性兒童和20例女性兒童IMA數值位于參考區間內，說明本實驗室建立的參考區間適用于西安地區兒童。

3 討論

IMA在機體缺血發生的數分鐘內急劇上升，在2～4 h內達到峰值，并在6～12 h內恢復到基線水平[6-7]。IMA是一種快速、簡單、可靠、低成本且敏感的氧化應激生物標記物，常用于監測機體不同環境條件下氧化應激的程度[8]。主要優點是在機體缺血的早期階段，血清IMA在組織發生壞死之前就已經顯著升高。

目前國際上越來越多的研究發現IMA在兒童多種疾病的進展過程中發揮著重要的作用。KESHAVARZI等[3]發現與健康對照組相比，50例2～16歲苯丙酮尿癥（phenylketonuria，PKU）患兒血清中IMA和丙二醛（malondialdehyde，MDA）水平顯著升高，差異有統計學意義（P＜0.001），且IMA升高與MDA升高呈顯著正相關，提示IMA可作為一個評價PKU氧化應激損傷的生物標記物。DOGRU等[4]通過隨訪26例平均年齡6歲左右的哮喘兒童，評估哮喘急性發作期和無癥狀期兒童的IMA水平，發現哮喘急性發作期和無癥狀哮喘穩定期患兒IMA水平均顯著升高，且嚴重哮喘急性發作的患兒IMA表達水平顯著高于輕/中度哮喘患者（P＜0.01），IMA水平與哮喘急性發作的嚴重程度呈正相關，可反映機體氧化應激損傷的嚴重程度。OZDEMIR等[9]研究先兆子癇（pre-eclampsia，PE）妊娠母親和其早產兒的血清IMA水平，發現PE組所有早產兒臍帶血中IMA顯著增加，對于評估早產兒發生氧化應激損傷的診斷及評估有著重要的價值。OZGUNAY等[10]研究小兒腹腔鏡手術中應用不同腹內壓（intraabdominal pressure，IAP）后患兒血清IMA水平的變化，發現12 mmHg IAP加劇IMA的水平升高，對于評估小兒外科手術中不同程度IAP水平對兒童機體氧化應激損傷程度提供了很好的參考。馬利軍等[11]發現缺血性腦血管病患者中IMA水平顯著升高，通過聯合脂蛋白相關磷脂酶A2（Lp-PLA2）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）以及經顱多普勒超聲（TCD）檢測，可對缺血性腦疾病的高危人群進行早期預測、診斷和干預，這為今后研究兒童缺血性腦疾病的進展提供了切入點和參考依據。

IMA已經被廣泛應用于臨床兒童各種疾病的病情評估以及預后監測中，其潛在的價值正逐漸被發現。與試劑盒給定的參考區間（0～78 U/ml）相比，本實驗建立的西安地區健康兒童IMA參考區間（男性0～74.00 U/ml，女性0～75.76 U/ml）均低于其水平，適用于本地區兒童，更好服務于本地區兒童臨床疾病氧化應激損傷的診斷及評估。由于新生兒標本的數據獲取有限，本實驗未將新生兒納入本次研究。