非典型豬瘟的診斷與防控

牛緒東 馬梓承 李克鑫 李克欽 張春瑋 胡棟 張元瑞 劉建柱*

1.山東農業大學動物科技學院

2.山東德信生物科技集團

3.濟南鑫寶星動物藥業有限公司

豬瘟（CSF）是由微RNA病毒目黃病毒科瘟病毒屬豬瘟病毒（CSFV）引起的一種急性、熱性、高度傳染性疾病，是世界動物衛生組織（OIE）規定通報的疫病，也是我國自2007年以來一直實行強制免疫的一類傳染病，是威脅養豬業的主要傳染病之一。近幾年，在臨床上時常發生非典型豬瘟。作者于2018年4月28日接診一例來自泰安市某養殖戶飼養的已注射過豬瘟疫苗的豬群，發生了與典型豬瘟不全一致的非典型豬瘟的病例。通過實驗室檢查，從而得到確診，現總結如下。

（一）發病情況

畜主在2018年春節后于一個月內分四批陸續從周圍不同的地區購進119頭15～40 kg體重的豬，進場后便陸續分別間隔免疫注射某廠家的豬瘟活疫苗（細胞源）、O型口蹄疫疫苗、圓環病毒滅活苗和偽狂犬疫苗。最近一個多月開始陸續發病和死亡，邀請多名獸醫給予診治，曾按附紅細胞體病和弓形體病治療，曾用磺胺間甲氧嘧啶、磺胺對甲氧嘧啶、土霉素、氟苯尼考、恩諾沙星、雙黃連和黃芪多糖等藥物進行治療，均無明顯效果。畜主來山東農業大學動物科技學院10 d前曾注射了兩個廠家的豬瘟細胞苗（注：因原來廠家的疫苗暫時缺貨，故購買了另一廠家的豬瘟疫苗），其中，大約半數豬只注射了原來廠家的疫苗，但是現在仍繼續發病和死亡；剩余的半數豬注射了另一廠家的疫苗后僅個別死亡，現已趨于穩定。到畜主來診之時，據統計已死亡29頭，仍有36頭發病。經作者診斷處理后一周內，比較嚴重者又死亡9頭，未見新發病例。病情穩定后，經統計其發病率是 54.62%（65/119）、死亡率為31.93%（38/119）、病死率為58.46%（38/65）。

（二）臨床癥狀

病豬表現營養不良，飲食欲減退或廢絕，逐漸消瘦和貧血；可視粘膜及皮膚蒼白，被毛無光澤，皮膚皸裂（見圖1），有的皮膚上可見出血點；多數腹瀉，排灰白色或灰黃色稀便，有的排“算盤珠樣”的干糞，表面附有黏液（見圖2）；個別出現嘔吐現象；輕度咳嗽和氣喘，有的流鼻涕；體溫多在40℃～41℃之間；后期有的可見耳朵發紫，拉稀者死亡快，病程多在一周之內，排干糞者病程可延至2～3周。

圖1 病豬表現消瘦、貧血、皮膚皸裂

圖2 病豬多數拉稀，有的拉干糞

（三）病理剖檢

尸體表現貧血蒼白（見圖3）；全身淋巴結腫脹，呈現“大理石樣”花紋的周邊出血現象（見圖4），體表淋巴結周圍可見淡黃色水腫（見圖5）；心外膜輕度出血，心冠脂肪水腫（見圖6）；雙側扁桃體腫脹、潮紅（見圖7）；尿液呈淡黃色，膀胱黏膜有少量出血點；脾臟輕度腫大，可見少量出血性梗死灶；腎臟貧血呈土黃色，其上可見多量針尖狀出血點（見圖8）；氣管及支氣管內出現泡沫狀液體和少量黏痰（見圖9），肺臟淤血、出血、水腫（見圖10）；肝臟輕度腫大和淤血，膽囊擴張，膽汁濃稠內含多量顆粒狀物（見圖11）；胃底腺區輕度出血，賁門腺區呈現明顯出血（見圖12）；腸道輕度出血，大腸黏膜輕度水腫。

圖3 尸體表現貧血蒼白

圖4 腸系膜淋巴結腫脹，呈現周邊出血

圖5 腹股溝淋巴結周圍可見淡黃色水腫

圖6 心外膜輕度出血，心冠脂肪水腫

圖7 雙側扁桃體腫脹、潮紅

圖8 腎臟貧血性出血

圖9 氣管及支氣管內有泡沫狀液體和黏痰

圖10 肺臟淤血、出血和水腫

圖11 膽汁濃稠內含多量顆粒狀物

圖12 賁門腺區出血

（四）實驗室診斷

分別采集病死豬的肺臟、淋巴結和脾臟，以備病料中四種病毒基因組的提取。

對CSFV進行RT-PCR檢測。凍存于液氮中的組織病料（脾臟和淋巴結）解凍后取適量加入滅菌PBS并研磨成勻漿，10000 rpm離心4 min后取上清，使用北京全式金EasyPure Viral DNA/RNA kit 提取病毒核酸。根據GenBank中已發布的CSFV序列保守區設計引物，擴增目的片段為599 bp，上游引物序列：F-TRACCAYGCAYATGWCAGAAGTACC；下游引物序列：R-AGTCGACTTCCCTGGTTTCACTTG。經反轉錄后，采用 20 μl PCR 體 系：DNA 樣本 3 μl，R-Mix 10 μl；E-Mix 0.3 μl；上下游引物各 1 μl；滅菌ddH2 o 4.7 μl。PCR 程 序：94 ℃5 min；94℃ 30 s、57℃ 40 s、72℃30 s，35 個循環；72℃ 10 min，4℃保存。PCR產物通過1%的瓊脂糖凝膠電泳觀察結果，該病料中CSFV核酸出現目的條帶（見圖13）。

筆者也對PRRSV和PRV、PCV2用病料中的肺臟和淋巴結，按照RNA/DNA提取試劑盒（購自上海生工生物公司）說明書分別進行了RT-PCR和PCR技術檢測。這三種病毒的特異性引物均由北京偉嘉集團山東檢測中心提供。分別進行了PCR特異性擴增，擴增片段大小 分 別為 432 bp、292 bp、785 bp。經過一系列步驟的嚴格操作，PCR產物通過1%的瓊脂糖凝膠電泳觀察結果，在該病料中PRRSV、PRV和PCV2核酸均未出現目的條帶。

從左至右 M：DL 2 000 DNA marker；“＋”泳道依次為豬瘟、藍耳、偽狂犬和圓環病毒的陽性對照；

“－”泳道依次為豬瘟、藍耳、偽狂犬和圓環病毒的陰性對照；

“1”泳道依次為豬瘟、藍耳、偽狂犬和圓環病毒的樣品。

圖13 PCR擴增產物電泳結果

（五）結論

根據流行病學、臨床癥狀和病理剖檢，作者初步診斷為CSFV和PCV2的混合感染性疾病。經（RT）PCR檢測了4種病毒后得知，PRRSV、PRV和PCV2為陰性，僅CSFV為陽性，故該病例最終確診為CSFV的單一感染。

（六）討論與小結

1.發病原因。該豬場發生非典型豬瘟主要有以下幾個原因，一是豬場原來使用的豬瘟疫苗可能存在問題，按常規跟胎免疫注射卻沒有阻斷住CSFV的侵襲，當懷疑有豬瘟后，畜主可能又使用了由于保存不當或原本就質差的疫苗對部分豬進行了緊急免疫，所以這部分豬才沒有被快速控制住本病的發生；其次是診斷不及時，延誤了緊急免疫注射的最佳時間，造成豬場病毒量急增且長時間被污染，從而引發病情加重，造成了較大的經濟損失；三是畜主自認為該豬場是個小型豬場，又遠離村鎮和其他養殖場，所以衛生消毒意識淡薄，每天只清掃豬舍很少進行大面積的衛生消毒工作，從而造成病原微生物的滋生與侵襲；四是，是否與飼料營養不全或存在霉菌毒素有關（有待進一步分析），使機體的免疫力降低，從而給CSFV的侵襲提供了方便。

2.處理方案及效果。該病例達到后，筆者于48 h內及時給予確診，制定如下防制方案。（1）無害化深埋處理病死豬；（2）把免疫失敗的豬群再重新按3倍量緊急免疫注射質量好的豬瘟細胞苗；（3）注射疫苗3 d后，豬場內外進行全面衛生消毒，1次 /d，連續 3 d，以后每 10 d 左右一次。環境消毒用3%的熱火堿溶液，舍內帶豬消毒用1∶800的三氯異氰尿酸鈉溶液；（4）飼料內加入5天的氟苯尼考、復合VB和VC，主要是防止繼發感染和增強機體免疫力；（5）飼喂易消化的全價日糧，清除霉敗變質的飼料，供給清潔飲水。

半月后回訪，經采取上述處理措施一周后未見新病例出現，豬群健康基本趨于穩定。因此，對該豬瘟病例的防制取得了比較滿意的可靠效果。

3.免疫監測。有條件的養豬企業，在注射豬瘟疫苗之前應先檢測其效價是否達到免疫注射標準，以防止因疫苗質量問題而影響免疫效果，給養豬生產造成不必要的經濟損失。

免疫效果要通過免疫一周后進行抗體檢測來確定。按生物統計的方法，最少應采集檢測所免疫豬群的頭數為（n代表免疫豬群總頭數）頭的血清，方可代表全群免疫的效果。如果免疫后抗體水平按PPA-ELSIA檢測抗體法，OD490值達到0.3以上；按IHA檢測抗體法，抗體滴度應大于6 log2，方可說明這次免疫的效果優良。否則，應更換疫苗效價達到免疫注射標準的豬瘟疫苗再重新進行免疫注射，免疫注射一周后再檢測免疫效果，直至抗體水平達到保護要求為止。

4.非典型豬瘟的免疫。根據有關資料報道，目前我國許多地區的豬場雖然進行了豬瘟疫苗免疫，但仍然有部分豬群的免疫抗體低下，有的甚至只有20%的免疫合格率，這就說明了豬瘟疫苗免疫失敗的原因主要有豬瘟病毒的持續性感染、混合感染、母源抗體干擾、免疫程序不當及疫苗質量問題等多個方面。

5.非典型豬瘟的診斷要點。臨床上主見拉稀、貧血、漸瘦。特征性剖檢變化為全身淋巴結腫脹并呈現紅白相間的“大理石樣”周邊出血的現象，腎臟貧血性出血及膽汁濃稠等。根據以上特點，臨床上可初步診斷為非典型豬瘟，確診需要實驗室檢查如通過PCR技術檢測到病原。

6.綜合防控。目前，CSFV的感染率仍然較高，并時常引發臨床表現，需要引起畜牧獸醫工作者的高度重視。養殖場要制定并嚴格執行科學有效的生物安全措施，把好疫苗質量關，及時按科學程序免疫，定期做好監控，及時搞好衛生消毒等各項具體工作。