MMP-9和PTEN蛋白在膠質瘤中的表達特點及意義

褚榮濤 邵國平 惠衛寧 龔銘杰（通訊作者）

（常熟市第二人民醫院＜揚州大學第5臨床醫學院＞神經外科 江蘇 常熟 215500）

膠質瘤（glioma）是顱內腫瘤的一種，占顱腦腫瘤的40%～50%，是最常見的顱內惡性腫瘤。年發病率為3～8人/10萬人口。如同其他腫瘤一樣，膠質瘤也是由于先天的遺傳高危因素和環境的致癌因素相互作用所導致。由于其本身具有侵襲性生長特性，導致該腫瘤較難被治愈。MMP-9是金屬蛋白酶中具有代表性意義的一種酶，通過金屬蛋白酶降解細胞外基質來突破組織屏障從而發生轉移；PTEN蛋白是抑癌基因，多數腫瘤俊輝在該蛋白中發生突變[1]。本文主要研究MMP-9和PTEN蛋白表達特點和相關性，分析MMP-9和PTEN蛋白對于膠質瘤的意義，現將研究結果報告如下。

1.資料和方法

1.1 一般資料

選取本院2012年1月—2017年12月膠質瘤患者57例，將其作為觀察組。選取同期正常人群33例，將其作為對照組。其中，對照組男女數量比例為21/12，年齡51～66歲，平均年齡（58.7±4.2）歲；觀察組男女數量比例為34/23，年齡50～69歲，平均年齡（58.9±4.4）歲，兩組患者在基礎信息上無差異（P＞0.05），可進行對比。

1.2 方法

1.2.1 組織芯片制備 對腫瘤標本進行常規固定、包埋、切片和染色，通過光學顯微鏡，尋找目標區域組織，在組織切片上做好標記。

1.2.2 免疫組織化學染色 采用EnVision法。使用MMP-9和PTEN多克隆抗體及PV6001、DAB顯色試劑盒（中衫生物技術開發有限公司）。讓組織芯片進行脫蠟、水化，在室溫條件下3%H2O2封閉內源性過氧化物酶，5min后在100℃高溫、pH6.0條件下修復15min，加入試劑進行顯色，復染后脫水、透明、封片。

1.3 觀察指標

檢測人腦組織中MMP-9和PTEN蛋白表達，分析MMP-9與PTEN表達相關性。

1.4 統計學方法

將SPSS18.0統計軟件對實驗結果進行分析，計數資料使用χ2檢驗，并用百分比表示，計量資料采用（±s）表示，并用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2.結果

2.1 免疫組織化學結果

制作研究對象膠質瘤組織芯片，免疫組織化學陽性信號為棕黃色顆粒，并在包漿中發現MMP-9和PTEN蛋白。

2.2 正常腦組織和不同WHO級別膠質瘤PTEN表達情況

在33例正常人群中，PTEN蛋白全部呈陽性反應，陽性率100.00%；在57例膠質瘤患者中，29例呈現PTEN蛋白陽性反應，陽性率為50.88%，差異具有統計學意義（P＜0.05）。隨著WHO分級提升，膠質瘤PTEN蛋白表達下降，見表1。

表1 正常人群與不同WHO級別膠質瘤中PTEN蛋白表達（n）

2.3 正常腦組織和不同WHO級別膠質瘤MMP-9表達情況

在33例正常人群中，27例MMP-9呈陽性反應，陽性率81.82%；在57例膠質瘤患者中，48例呈現MMP-9陽性反應，陽性率為84.21%，差異無統計學意義（P＞0.05）。隨著WHO分級提升，膠質瘤MMP-9表達增強，見表2。

表2 正常人群與不同WHO級別膠質瘤中MMP-9表達（n）

2.4 膠質瘤中MMP-9和PTEN蛋白表達相關性

膠質瘤中MMP-9和PTEN蛋白表達無相關性，見表3。

表3 膠質瘤中MMP-9和PTEN蛋白表達關系（n）

3.討論

膠質瘤源自于人體神經外胚層，其特征明顯，不僅會呈現浸潤性生長，而且還會存在復發現象[2]。由于該惡性腫瘤此種特性，導致治療無從進展，直到現在，仍然是神經外科惡性腫瘤治療過程中的一個重難點課題。但在研究過程中發現[3]，膠質瘤在浸潤和轉移過程中牽涉多個環節，如腫瘤細胞黏附、細胞遷移、基質降解等，其中，細胞外基質在腫瘤的浸潤和侵襲過程中起到關鍵作用。而且膠質瘤腫瘤細胞能夠分泌蛋白水解酶，并使其降解，破壞細胞間質構成的細胞外基質，來促進腫瘤侵襲轉移。

MMP-9屬于蛋白水解酶的一種，而且在其中具有較大作用。在目前研究中[4]，基質金屬蛋白酶（MMPs）涉及惡性腫瘤發展多個過程，不僅包括惡性腫瘤浸潤、侵襲，還有轉移、血管生成、腫瘤增殖。其中，MMP-9由巨噬細胞、結締組織和某些腫瘤細胞進行合成和分泌。還有研究提出佐證[5]，在膠質瘤中，MMP-9陽性表達率較高，明顯超出正常人群。通過免疫組織化學技術檢查，MMP-9會在膠質瘤中進行轉錄，表達水平也會相應增加，表明膠質瘤的侵襲性與MMP-9表達存在一定聯系[6]。

PTEN本身具有磷酸酶活性，具有抑制腫瘤的作用。在研究中表明[7]，人類出現腫瘤時，多數患者均出現PTEN蛋白基因突變。而且PTEN定位于胞漿，N端是其主要功能區，也是酶的催化中心。脂質磷酸酶活性是PTEN蛋白能夠抑制腫瘤的主要原因，通過該功能，能夠影響細胞增殖、黏附以及細胞遷移。隨后有研究發現[8]，PTEN在很多腫瘤中均存在表達缺陷，而且惡性腫瘤患者PTEN蛋白陽性表達率明顯低于正常人群，表明PTEN蛋白突變、丟失、滅活等在膠質瘤的發展過程中具有重要作用。而且隨著腫瘤逐漸惡化，患者PTEN蛋白陽性表達率會進一步降低也表明PTEN蛋白基因異常與膠質瘤惡化有直接關聯。

本文研究表明：在33例正常人群中，PTEN蛋白全部呈陽性反應，陽性率100.00%；在57例膠質瘤患者中，29例呈現PTEN蛋白陽性反應，陽性率為50.88%，差異具有統計學意義（P＜0.05）。隨著WHO分級提升，膠質瘤PTEN蛋白表達下降。膠質瘤中MMP-9和PTEN蛋白表達無相關性。

膠質瘤是一種特殊顱內腫瘤，屬于多基因突變疾病，致病原因較多，包括癌基因激活、過度表達、抑癌基因突變等，因此在研究過程中，要結合多基因因素進行考慮。PTEN蛋白會調節多種酶和蛋白，使血管內皮生長因子活性發生改變，進而影響腫瘤細胞生長和侵襲，使細胞局部黏附和運動遷移能力發生變化。但是在本次實驗中，無法證明PTEN蛋白對MMP-9有根本性影響，想要進一步驗證二者之間的聯系，需要進一步擴大研究對象數量，展開深入研究。

綜上所述，在膠質瘤中，PTEN蛋白和MMP-9表達無相關性，但MMP-9表達升高和PTEN表達下降表明膠質瘤侵襲性升高。