細胞免疫功能檢測在病毒性心肌炎中的臨床價值探討

楊海霞，孔慶鑄，彭建明

(中山市博愛醫院 檢驗科,廣東 中山528403)

作為一種因病毒感染而導致的局灶性或彌漫性心肌變性或壞死性疾病，病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)可以導致患者心功能障礙，出現一系列不良反應[1]。同時其在急性期過后仍然有潛在活動性的可能，嚴重的可以導致患者猝死[2,3]。目前VMC的發病機制仍未完全明了，以往研究[4,5]表明病毒性心肌炎的患者多有細胞免疫功能低下的表現，同時可伴有免疫調節失衡的表現，因而患者細胞的免疫功能可能是影響患者病毒性心肌炎發生和預后的一個重要因素。為此，選擇2015年11月至2017年11月于我院治療的病毒性心肌炎患者為研究對象，對該類患者治療前后的T細胞亞群、自然殺傷細胞(nature killer cell,NK)和腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)的表達水平進行檢測和分析，同時與健康對照組相對比，借以了解病毒性心肌炎患者的免疫功能相關因子的變化情況，為臨床病毒性心肌炎的診斷與治療提供思路。

1 資料與方法

1.1一般資料選擇2015年11月至2017年11月于我院治療的94位病毒性心肌炎患者為研究對象納入實驗組，其中52位男性，42位女性，患者的年齡在21-64歲之間，其平均年齡(42.3±8.4) 歲。所有納入研究對象均參考相關規范的診斷標準[6,7]，同時排除了有其他重要臟器原發性疾病或免疫系統疾病的患者，此外，近期有過使用激素治療歷史的患者也被排除。還選取同期100例來我院行體檢的健康人群作為對照組，其中男性56例，女性44例，其年齡在19-62歲，平均年齡為(41.8±7.6) 歲。實驗組和對照組的一般資料相比較其差異無統計學意義(P均>0.05)，表明兩組基線資料具有可比性。

1.2治療方法

使用中西醫結合的療法對病毒性心肌炎患者進行治療，堅持抗病毒、抗感染的基本原則和補充患者電解質和營養心肌等相關對癥支持治療，必要時加用抗心律失常的相關藥物。此外，給予患者黃芪注射液和丹參注射液進行靜脈滴注治療，療程持續1個月。

1.3檢測方法

所有研究對象均在入院24 h內和出院時接受靜脈采血行免疫功能相關因子的檢測。使用間接免疫熒光法對研究對象外周血中T淋巴細胞亞群CD3、CD 4、CD8和CD4/CD8等活性水平進行檢測，使用的是中國軍事醫學科學院所提供的相關檢驗試劑。使用125IUdR釋放試驗來檢測NK細胞的活性水平：使用125IUdR對K562細胞標記作為靶細胞，計算的效靶比為100∶1，并持續溫育20 h，設置培養液對照作為為自然釋放，以TritonX-100對照作為最大釋放，沉淀后的細胞接受胰蛋白酶和DNA酶相關處理，再對試劑進行離心，使用γ計數器測量其上清液和沉淀細胞的cpm值，最后根據125IUdR釋放的百分率減去自然釋放百分率進行計算。TNF-α水平的測定方法為：選用細胞培養板小孔中生長良好的小鼠成纖維細胞L929作為研究用的靶細胞，后加入遞倍稀釋的待檢血清和抗凝全血經細菌脂多糖誘導培養12 h的上清，同時加人定量的放線菌素D來提高靶細胞的相關敏感性，同時設定培養液作為陰性對照，標準定量TNF-α作為陽性對照。經過24 h室溫孵育后，進行洗滌和結晶紫染色，后洗去相關染料，繼續加入10 g/L 的SDS進行溫育，并在酶標儀上檢測A570值，最后根據陰性對照孔細胞50%溶解樣品的最大稀釋度的倒數來作為TNF-α的活性單位。

1.4觀察指標

本研究的觀察指標為研究對象外周血中T淋巴細胞亞群CD3、CD4、CD8活性水平和CD4/CD8比值，同時觀察外周血中NK細胞和TNF-α的表達水平。

1.5統計學分析

采用統計學分析軟件SPSS 22.0對本研究的所有數據進行統計分析，研究對象的細胞活性水平均采用“x—±s”表示，組間比較使用t檢驗進行對比分析，如果檢驗結果P<0.05，則表示兩組數據對比差異具有顯著性，有統計學意義。

2 結果

2.1 外周血T淋巴細胞亞群表達水平

如表1所示，和健康對照組相比，實驗組的CD3、CD4、CD8活性水平和CD4/CD8比值均顯著下降，差異均具有統計學意義(P均<0.001)；如表2所示，病毒性心肌炎患者治療后的外周血CD3、CD4、CD8活性水平和CD4/CD8比值均顯著高于治療前，差異均具有統計學意義(P均<0.05)。

表1 兩組外周血T淋巴細胞亞群對比

表2 病毒性心肌炎患者治療前后外周血T淋巴細胞亞群對比

2.2 外周血NK細胞活性和TNF-α水平

如表3所示，和健康對照組相比，實驗組的NK細胞活性和TNF-α水平均顯著下降，差異均具有統計學意義(P均<0.001)；如表4所示，病毒性心肌炎患者治療后的外周血NK細胞活性和TNF-α水平均顯著高于治療前，差異均具有統計學意義(P均<0.001)。

表3 兩組外周血NK細胞活性和TNF-α水平對比

表4 病毒性心肌炎患者治療前后外周血NK細胞活性和TNF-α水平對比

3 討論

作為常見的心血管疾病之一，病毒性心肌炎對患者的影響較為嚴重，但是目前病毒性心肌炎的發病機制仍然不明確，其可能與病毒感染后直接引起的患者心肌損傷和免疫功能失調相關[8,9]。有學者[10]報道該過程中細胞免疫可能比體液免疫具有更加顯著的作用。病毒性心肌炎與與多種病毒如脊髓灰質炎病毒、肝炎病毒和流感病毒等密切相關[11]，而在機體防御病毒感染的過程中，機體的細胞免疫發揮著重要作用，其中T淋巴細胞既是細胞免疫的效應細胞，也是機體非常重要的免疫調節細胞[12]，因此，T淋巴細胞對病毒性心肌炎的發生、治療和預后有著極為重要的作用。

以往研究[13-16]報道，T淋巴細細胞的功能、數量以及相關比例的變化和多種疾病的發生預后存在密切相關性。淋巴細胞中CD3主要指示的是成熟T淋巴細胞的數量，而CD4作為一種有誘導性的T淋巴細胞亞群,機體CD4水平的增加則表示機體的免疫功能得到改善[17]。一般情況下，機體的CD4/CD8處于一種動態平衡,借以維持機體免疫功能的有效。而作為一種粒狀淋巴細胞，NK細胞也是機體免疫系統的非常重要的組成部分，機體的NK細胞主要通過自然殺傷發揮的細胞毒作用[18]。此外，NK細胞在機體抗病毒感染和機體免疫監視過程中也起非常重要的作用[19]。NK細胞可以選擇性殺傷病毒感染的靶細胞[20]。而作為機體巨噬細胞分泌的一種重要分子蛋白，TNF-α主要由機體的單核巨噬細胞分泌， 其可以顯著抑制病毒的復制和減少病毒蛋白的合成，進而減少病毒顆粒的產生，導致病毒感染性下降[21]。此外，TNF-α可以直接殺傷病毒感染細胞。值得注意的是，TNF-α具有一定的致熱性，其抗病毒的具體機制尚有待繼續探索[21]。

本文結果表明，與健康對照組相比，病毒性心肌炎患者 CD3、CD4、CD8活性水平和CD4/CD8比值均顯著下降，說明病毒感染后，機體的T細胞亞群并不能有效地輔助機體的免疫細胞，導致病毒損害心肌細胞，同時，NK細胞活性和TNF-α水平均顯著下降，均提示機體細胞免疫受損。而經過治療后，病毒性心肌炎患者 CD3、CD4、CD8活性水平和CD4/CD8比值和NK細胞活性、TNF-α水平顯著回升，均提示細胞免疫參與了病毒性心肌炎的發生發展與預后，與以往相關研究[22,23]發現較為一致，這些細胞免疫功能均是病毒性心肌炎診斷和評價預后非常重要的參考指標。

綜上所述，病毒性心肌炎患者均存在著顯著的免疫功能紊亂，而機體的CD3、CD4、CD8活性水平、CD4/CD8比值和NK細胞活性、TNF-α水平均可以較好地反映機體的免疫功能狀態，這些可以作為病毒性心肌炎診斷和評價預后重要參考指標，為病毒性心肌炎診斷與治療提供重要參考。

作者簡介：楊海霞(1976-)，女，本科，主管技師，主要從事醫學檢驗工作。