背部經脈手法對PCPA失眠大鼠的行為學影響

吉登軍 顧非 李云龍 李亞洲 寧元率 王怡超 曹欣地 柳文韜

[摘要] 目的 觀察背部經脈手法對對氯苯丙氨酸（PCPA）失眠大鼠的行為學影響。 方法 運用SPSS 18.0 for Windows軟件生成隨機數字表，隨機函數為Rvuiform，種子號1234。將30只雄性清潔級SD失眠大鼠按隨機數字表分為背部經脈手法組（A組）、空白對照組（B組）、藥物治療組（C組），每組10只。分別于PCPA藥物造模前、造模后、治療7 d后這3個時間點采集大鼠行為學數據，包括曠場實驗（水平運動和垂直運動水平的運動總數）、力竭游泳實驗、鼠尾懸吊實驗數據的變化。 結果 治療前三組大鼠力竭時間、曠場運動總數、掙扎次數、絕望時間比較，差異均無統計學意義（P > 0.05）。治療后B組力竭時間及絕望時間均較治療前降低（P < 0.05）;A組和C組治療前后力竭時間及絕望時間比較，差異無統計學意義（P > 0.05）。與B組比較，A組和C組力竭時間均增加，差異有統計學意義（P < 0.05）;A組與C組力竭時間比較，差異無統計學意義（P > 0.05）。治療后三組掙扎次數均較治療前減少，差異有統計學意義（P < 0.05）。 結論 PCPA失眠大鼠存在行為學異常，可用于推拿治療失眠的基礎實驗研究;行為學上，背部經脈手法和安定均可明顯減緩失眠大鼠的運動能力、心肺功能和對新環境的探索能力的下降，是推拿手法改善失眠的客觀體現。

[關鍵詞] 背部經脈手法;失眠;對氯苯丙氨酸;動物實驗;行為學

[中圖分類號] R24? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）01（a）-0012-04

隨著社會高速發展及生活壓力急劇增加，失眠的發病率快速升高。長期失眠不僅會對身體健康造成嚴重損害，也會給患者帶來巨大的精神壓力，嚴重影響患者生活質量。推拿作為治療失眠的有效非藥物療法之一，近年來在大健康的背景下被愈加關注。曹仁發教授在推拿治療失眠項目研究工作中指出，雖然推拿治療失眠有較好的療效，但其作用機制卻僅限于用傳統中醫理論去解釋，缺乏現代醫學基礎研究方面的有力證據，需進一步深入推拿作用機制的研究。本研究旨在通過觀察背部經脈手法對對氯苯丙氨酸（PCPA）失眠大鼠的行為學影響，驗證背部經脈對失眠大鼠模型的有效性，為推拿手法的基礎研究提供一定的支持。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 動物? 清潔級雄性SD大鼠30只，體重230～280 g，由上海中醫藥大學附屬岳陽中西醫結合醫院實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK（滬）2017-005。飼養環境：室內采光按照白晝循環模式，室溫20～25℃，定時喂食，自由飲水，預養7 d，適應實驗室環境。運用SPSS 18.0 for Windows軟件生成隨機數字表，隨機函數為Rvuiform，種子號1234，將30只大鼠按隨機數字表法分為背部經脈手法組（A組）、空白對照組（B組）、藥物治療組（C組），每組10只。三組大鼠造模前體重分別為A組（255.30±9.59）g、B組（253.95±8.55）g、C組（249.55±12.48）g。造模前三組大鼠體重比較，差異無統計學意義（F = 0.845，P = 0.440），具有可比性。

1.1.2 儀器? 4×4敞箱（80 cm×80 cm×40 cm）、泳池（120 cm×80 cm×75 cm）、秒表。

1.2 PCPA失眠大鼠模型造模

使用醫用生理鹽水將PCPA（美國SIGMA公司，批號：SHBD9164V）配制成濃度為45 mg/mL的懸浮液備用。于每日上午8∶00～8∶15腹腔注射PCPA混懸液（注射量按1 mL/100 g每只大鼠體重計算），每日1次，連續注射2 d。于第2次腹腔注射28～30 h后，觀察大鼠，當其出現晝夜節律消失，白天活動不停，整體觀察與造模前明顯不同時，表明失眠大鼠造模成功。

1.3 治療方法

A組：予背部經脈手法治療，手法治療時間5 min，每天1次，連續7 d。背部經脈手法治療具體操作：將大鼠固定于固定器中，用壓力指套從大鼠頭側枕后部為起始，沿后背正中刺激經脈并向尾部移動，直至尾根部為止，注意讀取壓力指套的壓力值，使得整個操作過程中的壓力保持在5～8 N，刺激量為5 min/（只·d），連續7 d。

B組：予同A組相同時間（5 min）及相同強度的束縛，不加其他干預，每天1次，連續7 d。

C組：干預第1天開始后，用含有安定藥物的飲水投喂治療。同時予同A組相同時間（5 min）及相同強度的束縛，每天1次，連續7 d。給藥方法：將安定（通用名：地西泮，上海旭東海普藥業有限公司，批號：14160601，10 mg/粒）按成人催眠劑量10 mg/d，用人和鼠給藥劑量體表面積折算公式計算出應給予大鼠藥劑量為0.92 mg/kg，用飲用水稀釋，每天投喂含藥物的飲用水。

1.4 實驗方案

1.4.1 力竭游泳實驗? 事先將泳池的水深調為50 cm，水溫調為（28±1）℃。將大鼠放入泳池當中，并開始計時。當大鼠頭部沉入水中10 s內不能浮出水面時，將其撈出，并記下時間。

1.4.2 曠場實驗? 將大鼠放入4×4敞箱（周壁和底為黑色，底用紅色膠帶劃分為面積相等的16個矩形）中央，并開始計時。在安靜環境中，記錄3 min內大鼠水平運動數據（四爪均進入方格可記數）及垂直運動數據（兩前爪騰空或攀附箱壁可記數，洗臉不算）。實驗結束后取出大鼠，并清理干凈，以便進行后續相關實驗。

1.4.3 鼠尾懸吊實驗? 一手捏在大鼠尾端1 cm處，并將大鼠拎起到距離地面1 m左右處，并用秒表開始1 min倒計時。觀察1 min內的大鼠倒掛時向上翻轉的掙扎總次數，并用另一秒表記錄大鼠靜止不動狀態的總時間（絕望時間）。

1.5 統計學方法

采用SPSS 21.0統計軟件處理實驗數據。計量資料以均數±標準差（x±s）表示。曠場實驗、力竭實驗、鼠尾懸吊實驗中治療前后組間比較為多組隨機樣本比較，資料符合方差齊性，服從正態性，采用單因素方差分析，進一步行組間兩兩比較時，采用LSD-t檢驗;治療前后各組組內比較時，為配對樣本比較，資料服從正態性，采用配對t檢驗。以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組造模前后力竭時間、曠場運動總數、掙扎次數、絕望時間比較

方差分析結果顯示，造模前及造模后三組力竭時間、曠場運動總數、掙扎次數、絕望時間比較，差異無統計學意義（P > 0.05）。與造模前比較，三組造模后力竭時間、曠場運動總數、掙扎次數均降低，絕望時間均升高，差異有統計學意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 三組治療前后力竭時間、曠場運動總數、掙扎次數、絕望時間及各項指標差值比較

方差分析結果顯示，治療前三組力竭時間、曠場運動總數、掙扎次數、絕望時間比較，差異均無統計學意義（P > 0.05）。治療后三組力竭時間比較，差異有統計學意義（F = 7.401，P < 0.05）;進一步兩兩比較，與B組比較，A組和C組力竭時間均增加，差異有統計學意義（P < 0.05）;A組與C組力竭時間比較，差異無統計學意義（P > 0.05）。治療后B組力竭時間短于治療前（P < 0.05），A組和C組組內治療前后力竭時間比較，差異無統計學意義（P > 0.05）。見表2。三組治療前后曠場運動總數組內、組間比較，差異均無統計學意義（P > 0.05）。見表3。與治療前比較，治療后三組掙扎次數均降低，差異有統計學意義（P < 0.05）。見表4。與治療前比較，治療后B組絕望時間降低，差異有統計學意義（P < 0.05）;A組和C組組內治療前后絕望時間比較，差異無統計學意義（P > 0.05）。見表5。方差分析結果顯示，三組治療前后力竭時間差值、曠場運動總數差值、掙扎次數差值、絕望時間差值比較，差異均無統計學意義（P > 0.05）。但兩兩比較結果顯示，與B組比較，A組力竭時間差值降低，差異有統計學意義（P < 0.05），其他各組兩兩比較，差異均無統計學意義（P > 0.05）。見表6。

3 討論

失眠，中醫稱之為不寐，《難經·四十六難》“血氣衰，肌肉不滑，榮衛之道澀，故晝日不能精，夜不得寐也”，闡釋了失眠與氣血肌肉的關系，提出肌肉不滑是失眠的原因之一。目前PCPA藥物造模是國外較為公認的失眠模型，利用藥物抑制大鼠大腦相應神經遞質合成，造成睡眠晝夜節律消失，致使大鼠失眠[1]。造模后大鼠可出現晝夜節律消失，白天活動不停，整體觀察狀態有血氣不調、榮衛澀滯之象[2]，符合本研究要求。宏觀神經行為的異常是失眠動物常有的征象，而這種異常正是失眠動物模型造模成功的標準，也是最易于觀察的指標。同時行為學指標能全面、迅速地反映失眠大鼠的整體狀態變化，本研究采用的力竭實驗、曠場實驗、鼠尾懸吊實驗數據指標，可以反映大鼠的運動功能、心肺能力，以及對新環境的探索能力和情緒焦慮相關狀態。將失眠大鼠的整體狀態以具體化、客觀化的數據顯示，使其具有可比性，適用于推拿機制的基礎研究[3]。

本研究結果顯示，與B組比較，A組及C組力竭時間均增加，差異有統計學意義（P < 0.05），即背部經脈手法和安定藥物均可以緩解失眠大鼠心肺能力和運動功能的下降?，F代神經解剖已證實，手法改善失眠的作用機制與背部神經系統解剖結構有密切關系，脊柱兩旁淺層有脊神經后支分布，深層有交感神經干、交感神經椎旁節和灰、白交通支，當在脊柱兩側施加手法干預時，可以刺激機體的神經系統，激發相應的內臟調控系統，影響中樞神經和周圍神經遞質的釋放，發揮神經、體液調節作用，改善睡眠狀態[4]。而心肺能力和運動功能的變化可以作為大鼠睡眠狀態的改善指標，通過觀察這些指標，本研究可以初步證明背部經脈手法對于大鼠失眠狀態的改善作用。

本研究中，與治療前比較，B組治療后力竭時間和絕望時間均降低（P < 0.05），而A組和C組治療前后力竭時間和絕望時間比較，差異無統計學意義（P > 0.05）?？瞻自炷４笫蟮倪\動能力下降和情緒變化呈現出隨時間逐步加重的趨勢，而背部經脈手法和藥物治療在一定程度上能夠控制和延緩其加重，可以作為失眠程度改善的反映。背部經脈手法所包含的按揉法主要為緩慢柔和的推拿手法，其有鎮靜安神、疏通經絡和行氣活血的作用，可以提高局部血液流動速度，改善軟組織的微循環，促進生理代謝，有利于脊柱相關肌纖維的再生和恢復，改善組織的力學特性[5]。背部經脈手法作用于失眠大鼠脊背部時，可以調整血氣、滑利脈絡，以改善睡眠狀態?，F代醫學也有相應的解釋：脊柱兩側的皮膚，通過節段神經支配與相應的內臟密切聯系，背部手法作用于脊柱時，刺激會通過感覺神經纖維，在植物神經和體液的參與下，對相應的臟腑起到調整作用。同時通過反射弧影響腦干網狀結構的功能狀態，從而調整大腦的興奮性以達到改善睡眠的目的[6]。

綜上，通過觀察背部經脈手法對PCPA失眠大鼠的行為學影響，初步顯示PCPA失眠大鼠存在行為學異常，而背部經脈手法和安定藥物治療均可明顯減緩失眠大鼠運動功能、心肺能力和對新環境探索能力的下降，是推拿手法改善失眠的客觀體現。今后可以將PCPA失眠大鼠模型用于推拿治療失眠的基礎實驗研究，推進推拿學科的發展。

[參考文獻]

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[3]? 張智燁，張振賢，董書桂，等.理虛解郁方對慢性疲勞綜合征大鼠行為學的影響[J].上海中醫藥大學學報，2014， 28（2）：65-67.

[4]? 畢勝，李義凱，汪愛媛，等.不同推拿手法下腰椎小關節應力變化的觀察[J].中國康復醫學雜志，2001，16（3）：144-145.

[5]? 駱雄飛，紀東升，匡堯.針灸配合推拿“培元益神”法治療慢疲勞綜合癥[J].中華實用中西醫雜志，2010，23（11）：31-34.

[6]? 李義凱.脊柱推拿生物力學研究的幾個關鍵問題[J].醫用生物力學，2013，28（3）：255-258.

（收稿日期：2018-05-03? 本文編輯：羅喬荔）