糖尿病腎病患者自身抗體檢測的意義

楊宏秀，張會芬，劉麗，袁寶軍，夏彥東，王建梅

（開灤總醫院 1.檢驗科，2.婦產科，河北 唐山 063000）

糖尿病腎病（diabetic nephropathy,DN）是導致糖尿病患者死亡及致殘的主要原因[1]，對DN早診斷，可預防DN的發生、發展，有利于糖尿病患者的預后[2-3]。DN是繼發于糖尿病的全身性微血管病變，主要表現為微血管循環障礙和微血管基底膜增厚，尿酸（uric acid,UA）通過介導血管損傷參與了DN腎損害[4]；同型半胱氨酸（Homocysteine,Hcy）是一種反應性血管損傷氨基酸，與DN的進展相關[5]；抗腎小球基底膜抗體（anti-GBM antibody）引起的疾病很可能是由于肺出血-腎炎綜合征抗原暴露引起[6]；抗心磷脂抗體（anti-cardiolipin antibodies,ACA）可加重血管損傷，與體內的高凝狀態有關[7]。本研究通過對糖尿病患者血清UA、Hcy、GBM和ACA的檢測，探討其在DN診斷中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年9月—2017年2月開灤總醫院就診的2型糖尿病（T2DM）患者174例作為研究對象。其中，男性89例，女性85例，年齡41～65歲，平均（52.1±7.8）歲。所選患者均符合1999年WHO糖尿病診斷標準[8]，除外惡性腫瘤、高血壓、泌尿系感染、糖尿病酮癥酸中毒及心功能不全，無糖皮質激素服用史。所有患者根據腎小球濾過率（GFR）和尿蛋白/肌酐比值（ACR）分為4組：單純糖尿病組（A組）32例，GFR ≥ 60 ml/（min·1.73 m2）且 ACR＜30 mg/g ；早期糖尿病腎病組（B 組）42 例，GFR ≥ 60 ml/（min·1.73 m2）且30 mg/g≤ACR≤300 mg/g；糖尿病腎病組（C組）45 例，GFR ≥ 60 ml/（min·1.73 m2）且 ACR＞300 mg/g；腎功能不全組（D組）55例，GFR＜60 ml/（min·1.73 m2）且ACR＞300 mg/g。4組患者性別比例、年齡比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法

留取受檢者晨尿10 ml，檢測尿清蛋白，并于清晨抽取靜脈血 3 ml，靜置 20 min 后 3 000 r/min 離心10 min分離血清，置入-20℃冰箱冷凍保存待測。血清復融后統一檢測血清UA、Hcy、GBM和ACA。血清UA和Hcy使用全自動生化分析儀檢測，UA采用氧化酶法檢測，Hcy采用酶法檢測，GBM和ACA采用間接酶聯免疫法檢測后計算其濃度。GFR采用適合中國人的改良 MDRD 計算公式，GFR（ml/min·1.73 m2）=186×Scr-1.154× 年 齡 -0.203×0.742（ 女 性 ）×1.233（中國人）。

1.3 儀器與試劑

日立7180全自動生化分析儀（日本日立公司），尿酸試劑盒（液體）（上海科華公司），Hcy測定試劑盒（北京九強公司），抗腎小球基底膜抗體測定試劑盒、抗心磷脂抗體免疫球蛋白G（ACA-IgG）測定試劑盒、抗心磷脂抗體抗免疫球蛋白A（ACA-IgA）測定試劑盒、抗心磷脂抗體免疫球蛋白M（ACA-IgM）測定試劑盒（深圳亞輝龍公司）。

1.4 統計學方法

數據分析采用SPSS 17.0統計軟件，正態分布的計量資料以均數±標準差（±s）表示，ACA-IgM的結果呈偏態分布，將其轉換平方根后以（±s）表示，多組間均數比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用LSD-t檢驗，兩變量間進行Pearson直線相關性分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組血清UA及Hcy結果比較

各組血清UA及Hcy結果比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。B、C、D組的血清 UA 水平高于A組（t=3.090、5.130 和 7.477，均P=0.003），B、C、D 組的血清 Hcy水平也高于A組（t=2.774、6.550和 8.083，P=0.007、0.000和0.000）；與B組比較，C組血清UA和Hcy水平升高（t=2.445和2.229，P=0.017和0.024），D組血清UA和Hcy水平升高（t=5.298和5.546，均P=0.000）；D組與C組比較，血清UA和Hcy水平升高（t=2.956 和 4.190，P=0.004 和 0.000）。見表1。

2.2 各組自身抗體結果比較

各組血清GBM和ACA-IgA結果比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。與A組比較，B組ACA-IgM水平升高（t=2.097，P=0.040），GBM、ACA-IgG 和ACA-IgA水平差異無統計學意義（t=1.038、1.716和 0.760，P=0.303、0.091 和 0.450），C 組 GBM、ACA-IgG 和 ACA-IgA水平升高（t=4.563、4.014和2.664，均P=0.000），ACA-IgM水平差異無統計學意義（t=1.897，P=0.062），D 組 GBM、ACA-IgA 和 ACAIgG 水 平 升 高（t=4.165、2.475 和 2.253，P=0.000、0.015 和 0.027），ACA-IgM 水平差異無統計學意義（t=0.872，P=0.386）；與B組比較，C組GBM、ACA-IgG、ACA-IgA和ACA-IgM水平差異無統計學意義（t=1.121、1.895、1.724 和 -0.210，P=0.266、0.062、0.067和0.834），D組GBM和ACA-IgA水平升高（t=2.718和 2.363，P=0.018和 0.020），ACA-IgG 和 ACA-IgM水平均無統計學意義（t=1.678 和 -1.377，P=0.097 和0.172）；D組與C組比較，GBM水平升高（t=2.435，P=0.017），ACA-IgA、ACA-IgG 和 ACA-IgM水平均無統計學意義（t=0.305、0.714 和 -1.179，P=0.761、0.964和0.241）。見表2。

表1 各組血清UA及Hcy結果比較 （±s）

表1 各組血清UA及Hcy結果比較 （±s）

注：1）與A 組比較，P＜0.05；2）與 B組比較，P＜0.05；3）與C組比較，P＜0.05

組別 n ACR/（mg/g） GFR/[ml/（min·1.73 m2）] UA/（μmol/L） Hcy/（μmol/L）A 組 32 6.90±5.74 146.82±26.13 314.57±82.04 11.45±3.03 B 組 42 149.55±78.621） 126.57±27.801） 375.73±81.881） 15.84±8.251）C 組 45 476.42±205.411）2） 95.62±20.881）2） 422.78±94.091）2） 19.46±6.211）2）D 組 55 765.56±296.971）2）3） 26.76±10.051）2）3） 483.69±106.971）2）3） 26.70±10.051）2）3）F值 118.232 213.272 23.173 28.786 P值 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 各指標與腎功能相關性分析

采用Pearson相關分析，GBM、ACA-IgA、UA和Hcy分別與ACR呈正相關（r=0.281、0.206、0.411和 0.492，P＜0.05）；ACA-IgG 和 ACA-IgM與ACR無相關性（r=0.051 和 -0.015，P＞0.05）。

表2 各組自身抗體濃度結果比較 （u/L，±s）

表2 各組自身抗體濃度結果比較 （u/L，±s）

注：1）與 A 組比較P＜0.05；2）與 B 組比較，P＜0.05；3）與 C 組比較，P＜0.05

組別 n GBM ACA-IgG ACA-IgA ACA-IgM A 組 32 3.063±0.059 3.421±0.130 1.123±0.452 1.338±0.674 B 組 42 3.146±0.294 3.435±0.521 1.349±0.529 1.495±0.6821）C組 45 3.173±0.1531） 3.448±0.6131） 1.499±0.3721） 1.440±0.603 D 組 55 3.284±0.2841）2）3） 3.452±0.8321） 1.647±0.9551）2） 1.417±0.729 F值 6.729 2.026 4.710 0.332 P值 0.000 0.112 0.003 0.802

3 討論

UA是嘌呤核苷酸的代謝產物，通過增加血小板的黏附，沉積于腎間質和腎小管，激活腎素—血管緊張素的表達而介導腎血管損傷[9-10]，有文獻指出，UA可作為評價糖尿病患者腎臟損害嚴重程度的指標[11]。本研究顯示，隨著DN腎損害程度的加重，血清UA的水平升高，且與ACR呈正相關，可見血清UA水平升高可提示早期腎損傷，并可作為監測DN進程的指標。

Hcy增高也是糖尿病患者出現腎損害的危險因素，Hcy通過誘導產生過氧化物酶或抑制一氧化氮合成酶，增強自由基活性，引起血管內皮細胞損傷，導致蛋白尿[12-13]。本研究顯示，Hcy與ACR呈正相關，且隨著DN病情的加重Hcy水平逐漸升高，差異有統計學意義，即Hcy可作為DN早期腎損害檢測指標，并監測DN的疾病進程。

GBM以人基底膜Ⅳ型膠原α3鏈的非膠原區1為靶抗原，抗原抗體結合后激活補體，并與中性粒細胞和巨噬細胞結合，后者通過釋放溶菌酶和細胞因子，導致腎小球基底膜溶斷裂，產生局部炎癥[14]。本研究顯示，GBM濃度隨著DN的發展逐漸升高，C組與A組比較，GBM濃度升高，D組分別與A、B、C組比較，GBM濃度均升高，且GBM與ACR呈正相關，提示GBM在DN的發生發展中能反映腎損害的嚴重程度。

ACA是一種自身抗體，有IgG、IgA、IgM 3類，它以血小板和內皮細胞上帶負電荷的心磷脂為靶抗原，與血栓形成密切相關。糖尿病的發展進程中多種因素可直接或間接損傷血管壁，內皮細胞受損和血小板活化后激活ACA，而ACA又可加重血管損傷并使前列環素合成減少和血小板聚集，促使血栓形成，產生各種慢性并發癥，尤其是血栓并發癥[15]。本研究發現，隨著糖尿病腎損害的加重，ACA-IgG 和ACA-IgA逐漸升高，尤其到C組和D組分別與A組比較其水平升高，而D組與B組比較，其ACA-IgA水平也升高，ACA-IgA與ACR呈正相關；B組與A組比較，ACAIgM水平升高，后隨著腎損害加重ACA-IgM水平降低，但D組仍高于A組，即ACA-IgM在糖尿病腎功能損傷早期即可升高，提示DN早期腎損害。由此可見ACA可在DN進程中提示糖尿病腎損害的程度，指導臨床及時對癥治療。

血清GBM、ACA、UA和Hcy均參與腎血管損傷，本研究提示，UA、Hcy和ACA-IgM水平可提示早期腎損害，血清GBM、ACA、UA和Hcy可作為DN疾病進程的監測指標，為DN的診斷和治療提供依據，延緩DN的發展，提高患者的生存質量。