葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）試劑盒性能驗證

張炎勝 陳婷婷 甘月濱 張福輝

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（Glucose-6-phosphate Dehydrogenase，G6PD）缺乏常見于我國長江流域及其以南各省[1]，福建省也屬于高發區域，其是紅細胞磷酸戊糖代謝途徑中的一個關鍵酶，其催化反應生成的還原型輔酶Ⅱ（NADPH）是谷胱甘肽還原酶的輔酶，還原型谷胱甘肽（GSH）的含量對于保護紅細胞膜、防止溶血具有重要意義[2]。G6PD的缺乏或者減少主要見于G6PD缺乏癥，故G6PD定量檢測試劑盒的性能驗證有著重要意義。本實驗室以中國合格評定國家認可委員會發布的2018醫學實驗室質量和能力認可準則在臨床化學檢驗領域的應用說明CNAS-CL02-A003為依據，制定了G6PD定量檢測試劑盒性能驗證方案，包括正確度、靈敏度、參考區間和抗干擾能力驗證。

1 材料和方法

1.1 標本來源

用于精密度驗證的質控物購自北京利德曼生化股份有限公司（批號612241G、622241D），用于靈敏度驗證，線性范圍驗證，抗干擾能力驗證的二級標準物質和參考品購自利德曼。用于正確度驗證的樣本來源于廈門市第一醫院。用于參考區間驗證的樣本來源于我院體檢中心的正常體檢人群。

1.2 儀器和試劑

儀器使用美國貝克曼DXC800生化分析儀，試劑為利德曼萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）試劑盒，批號612231L，按實際說明書進行操作。

1.3 方法

1.3.1 正確度 取20份不同濃度的樣本并與參加過原衛生部室間質評的實驗室進行比對，計算出20份標本的相對偏差。根據CNAS-CL02-A003要求，至少80%的標本相對偏倚應小于1/2 TEa，因此正確度通過判斷標準為：相對偏倚≤15%的個數所占比例應大于80%。

1.3.2 靈敏度 取低值標本進行稀釋，每個稀釋梯度檢測10次，直至10次重復性變異系數（coefficient of variation，CV）大于20%時，取CV＜20%的最大稀釋度檢測均值為靈敏度。

1.3.3 參考區間 參考CNAS-CL02-A003文件搜集男女各20例體檢健康人標本，上機檢測每份標本測定2次取均值，若90%的檢測值在廠家所提供的參考區間內（＞1 300 U/L），則認為參考區間為可接受。

1.3.4 抗干擾能力驗證 配制不同濃度的干擾物溶液，將混合標本（不含脂濁、溶血、黃疸）與不同濃度的干擾物溶液以4 ∶ 1比例混勻進行測定；將混合標本與去離子水以4 ∶ 1比例混勻，作為對照進行測定。連續檢測3次，計算加入干擾物的混合標本測值均值與對照樣品的偏差，偏差值應小于10%。

1.4 統計學處理

使用SPSS19.0統計軟件處理數據，計數資料用%表示。

2 結果

2.1 正確度評估結果

我院與參加原衛生部室間質評的廈門市第一醫院比對結果見表1。比對的20份標本平均相對偏倚為2.33%，其最小相對偏倚到最大相對偏倚范圍為1.01%～3.63%，相對偏倚≤15%的個數所占比例為100%。

2.2 靈敏度評估結果

如表2所示，當將低值樣本稀釋到1 ∶ 30時CV＞20%，取稀釋度1 ∶ 25時的檢測均值為靈敏度，因此靈敏度為1.03，符合試劑說明書要求。

2.3 參考區間評估結果

G6PD在健康人群中為右偏態分布，因此統計方法采用百分位數，用40例健康人標本數據驗證結果的中位數為1 994 U/L，其最小值至最大值范圍為1 530～2 448 U/L，所選標本的檢測值100%落在大于1 300 U/L參考區間范圍內。

2.4 抗干擾能力評估結果

如表3所示，膽紅素＜400 μmol/L，VC＜3 g/L，HB＜3 g/L對檢測結果無影響。符合試劑說明書要求。

3 討論

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥是由基因突變引起的遺傳性疾病，由于該基因為X連鎖不完全顯性遺傳，G6PD基因位于X染色體長臂2區8帶（Xq28）[3-4]，男性發病率高于女性[5-6]。全球約有4億多人受到影響[7]。G6PD缺乏是誘發伯氨奎啉類藥物性溶血、蠶豆病、新生兒病理性黃疸[8-9]、某些感染性溶血的主要原因。該病無法根治，但可以積極預防，對高發人群進行該指標的篩查，可以有效預防溶血癥的發生。進行婚前體檢、優生優育[10]和有效預防新生兒黃疸有重要意義[11-12]。近年來又有研究顯示當患者輸注G6PD缺乏的紅細胞時會引起不良反應，可見G6PD檢測的重要性。

目前，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥檢測方法主要包括分光光度計比色法、酶活性定量分析和基于DNA聚合酶鏈式反應的分子篩查方法，其中酶活性定量分析可采用全自動直接定量法檢測，樣本為經過離心后的壓積紅細胞，直接檢測紅細胞膜上的G6PD，排除了定量比值法采用全血因紅細胞量少而導致G6PD活性結果降低的可能，也有效地減少了白細胞膜G6PD及血漿中游離還原性酶對檢測結果的干擾。該方法優點是基本實現了自動化分析，最大可能地減小了人為因素造成的誤差，標本用量少、快捷，可快速進行大批量標本的檢測。葡萄糖-6-磷酸脫氫酶試劑盒精密度＜5%，靈敏度高，可用于日立、奧林帕斯、貝克曼、西門子等市面上大部分常見的儀器，可廣泛應用于臨床。

綜上所述，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶試劑盒主要分析性能驗證結果符合質量目標，能夠滿足臨床的質量要求。對檢測系統的性能進行有效的評估，有助于提高檢測結果的準確性和可靠性。

表1 G6PD正確度評估

表2 G6PD靈敏度評估

表3 G6PD抗干擾能力評估