不同血液檢測(cè)模式下核酸檢測(cè)試劑有效利用率結(jié)果分析

(開(kāi)封市中心血站，河南 開(kāi)封 475004)

血液以及血液相關(guān)的生物制品不但可以治病救人，也可以作為許多傳染病的載體，如人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)、丙型肝炎病毒(HCV)、乙型肝炎病毒(HBV)等均可引起傳染病的流行，給個(gè)人、家庭以及社會(huì)帶來(lái)極大危害，因此血液以及血液相關(guān)的生物制品的安全性備受關(guān)注[1]。核酸檢測(cè)技術(shù)(NAT)的引入，可直接檢測(cè)病毒，從而彌補(bǔ)了病毒血清學(xué)檢測(cè)的不足，并且降低了輸血后感染的風(fēng)險(xiǎn)[2]。某血站從2017年全面開(kāi)展了NAT檢測(cè)，對(duì)血清陰性的獻(xiàn)血者分別使用了不同的自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)，研究結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年1月～2018年3月來(lái)自某血站的129 955例無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本。所有無(wú)償獻(xiàn)血者均符合我國(guó)《獻(xiàn)血者健康檢查要求》[3]的標(biāo)準(zhǔn)，第一支采用EDTA-K2真空抗凝管采血5ml，用于ELISA檢測(cè)；第二支采用EDTA-K2帶分離膠真空抗凝管采血5mL，用于NAT檢測(cè)；所有標(biāo)本均在冷鏈保證下4 h內(nèi)完成離心，存放于2～8℃環(huán)境下,72 h內(nèi)完成檢測(cè)，實(shí)際利用率=(實(shí)際測(cè)試量/實(shí)際標(biāo)定測(cè)試量)×100%。

1.2 儀器與試劑

核酸檢測(cè)系統(tǒng)：NAI篩查和確證系統(tǒng)采用羅氏Cobas s201核酸檢測(cè)系統(tǒng)(美國(guó)羅氏公司)，全自動(dòng)核酸擴(kuò)增系統(tǒng)：Hamilton STAR全自動(dòng)混樣儀、Cobas Taqmen Analyzer核酸擴(kuò)增檢驗(yàn)儀、Cobas Ampilp rep核酸提取儀，試劑：Cobas TaqScreen MPX；ELISA采用Freeedom evo 200 全自動(dòng)加樣儀，篩查劑:HBsAg、抗-HCV及抗-HIV；BEPⅢ酶免疫分析儀；KUBOAT 8420低速離心機(jī)；MPR2141OR冰箱。

1.3 方法

NAT檢測(cè)：采用CHITAS BSS1200(核酸匯集+提取)+ABI 7500(核酸擴(kuò)增)技術(shù)對(duì)樣本混合檢測(cè)，每個(gè)一級(jí)混樣池包含6個(gè)納入NAT檢測(cè)的無(wú)償獻(xiàn)血樣本，取每個(gè)樣本中的167μL血漿到一級(jí)混樣池，采用全自動(dòng)混樣儀加樣，應(yīng)用MGP磁珠分離技術(shù)原理于全自動(dòng)核酸提取儀中提取核酸，采用核酸擴(kuò)增檢驗(yàn)儀進(jìn)行HBV、HCV、HIV靶序列擴(kuò)增檢驗(yàn)，觀察并記錄服務(wù)器所判讀的結(jié)果。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)：采用TECAN全自動(dòng)加樣儀自動(dòng)加樣，兩種試劑的2次檢測(cè)采用FAME進(jìn)行(均嚴(yán)格按儀器和試劑盒的要求進(jìn)行操作)，每組檢測(cè)均設(shè)置對(duì)照，且每一級(jí)混樣池均含內(nèi)對(duì)照(IC)，將全自動(dòng)核酸提取和擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)檢出的陽(yáng)性、混樣池拆分為6個(gè)組，組成該一級(jí)混樣池的原始樣本做單樣本檢，檢測(cè)為陰性判定為NAT陰性，陽(yáng)性判定為NAT陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

選用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計(jì)數(shù)資料采取%表示，行χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NAT總體檢測(cè)結(jié)果

共完成NAT檢測(cè)129 955例 ，有反應(yīng)性199例，陽(yáng)性率為0.15%(199/129 955)，混樣陽(yáng)性的進(jìn)行拆分單檢，有反應(yīng)性55性例，拆分陽(yáng)性反應(yīng)率為27.64%(55/199)，其中HBV DNA占NAT拆分陽(yáng)性率的90.91%(50/55)，HCV RNA 2例，HIV RNA 3例，試劑總的損耗率為0.22%(296/129 955)，實(shí)際測(cè)試量為129 659例，利用率為99.77%(129 659/129 955)。

2.2 ELISA總體檢測(cè)結(jié)果

共完成ELISA檢測(cè)129 955例 ，有反應(yīng)性180例，陽(yáng)性率為0.14%(180/129 955)，混樣陽(yáng)性的進(jìn)行拆分單檢，有反應(yīng)性50性例，拆分陽(yáng)性反應(yīng)率為27.78%(50/180)，其中HBV DNA占拆分陽(yáng)性率的80.00%(40/50)，HCV RNA 3例，HIV RNA 7例，試劑總的損耗率為0.22%(296/129 955)，實(shí)際測(cè)試量為129 655例，利用率為99.77%(129 659/129 955)。

2.3 未能完全使用的296套試劑原因分析

未能完全使用的296套試劑中混檢假陽(yáng)性率占13.51%，無(wú)效孔、日常內(nèi)部質(zhì)控和每季度進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部空氣監(jiān)測(cè)均占20.27%，參加衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)占16.89%，內(nèi)部質(zhì)控失控導(dǎo)致的整個(gè)批次無(wú)效占29.05% 。見(jiàn)表1。

表1 未能完全使用的296套試劑原因分析 n(%)

3 討論

輸血相關(guān)傳染病的預(yù)防和控制是全社會(huì)關(guān)注的焦點(diǎn)之一[1]。NAT是一種新興的血液傳染病檢測(cè)方法，其主要原理是：利于化學(xué)、物理、生物學(xué)等方法，通過(guò)其附帶信號(hào)、靶核酸直接擴(kuò)增的方法，將看不見(jiàn)的極微量的核酸變成直觀的可視信號(hào)或光、電，從而判斷是否存在相應(yīng)的病原體[2]。2010年，國(guó)家衛(wèi)生與計(jì)劃生育委員會(huì)確定在全國(guó)15家供血機(jī)構(gòu)開(kāi)展NAT試點(diǎn)工作，以保證血液檢測(cè)質(zhì)量。NAT檢驗(yàn)技術(shù)被越來(lái)越多的國(guó)家和地區(qū)采用，能夠降低HBV、HCV、HIV的傳播風(fēng)險(xiǎn)，提高臨床輸血的安全性[3，4]。

有研究表明NAT可明顯縮短病毒檢測(cè)的窗口期，且不受病毒差異等和個(gè)體免疫因素的影響。由于自動(dòng)化NAT系統(tǒng)的試劑價(jià)格較高，因此如何在確保檢測(cè)質(zhì)量的情況下降低檢測(cè)成本，提高利用率，為大家所關(guān)注。本研究結(jié)果顯示試劑總的利用率為99.77%，有反應(yīng)性199例，陽(yáng)性率為0.15%，混樣陽(yáng)性的進(jìn)行拆分單檢，有反應(yīng)性55性例，拆分陽(yáng)性反應(yīng)率為27.64%，其中HBV DNA占NAT拆分陽(yáng)性率的90.91%，提示這部分獻(xiàn)血者具有比正常獻(xiàn)血者HBV感染的風(fēng)險(xiǎn)更高，對(duì)非反應(yīng)的試劑，要求采用更合理的檢測(cè)策略。ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率為0.14%，其中HBV DNA混檢陽(yáng)性率為0.03%，HCV RNA 3例，HIV RNA 7例，提示對(duì)ELISA對(duì)HBV感染的陽(yáng)性檢出率較低，ELISA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，因此對(duì)HBV感染的陽(yáng)性檢出率較低，本研究結(jié)果顯示試劑損耗率為0.28%，而影響試劑損耗的因素有： 混檢假陽(yáng)性率、無(wú)效孔、日常內(nèi)部質(zhì)控(包括陰陽(yáng)性對(duì)照和室內(nèi)質(zhì)控各一孔/每批次)、參加衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)、每季度進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部空氣監(jiān)測(cè)、內(nèi)部質(zhì)控失控導(dǎo)致的整個(gè)批次無(wú)效。其中內(nèi)部質(zhì)控失控導(dǎo)致的整個(gè)批次無(wú)效占29.05%，對(duì)于試劑損耗應(yīng)該優(yōu)化工作流程，設(shè)計(jì)好檢測(cè)計(jì)劃，因NAT的檢測(cè)過(guò)程非常精密，在使用中，軟件、儀器的硬件均可能導(dǎo)致失敗，從而導(dǎo)致試劑的浪費(fèi)，消耗未加入檢測(cè)試劑的記載時(shí)間，最終降低了試劑的利用率，因此，為提高試劑的利用率，需要根據(jù)實(shí)際檢測(cè)量與廠家密切聯(lián)系，加強(qiáng)儀器保養(yǎng)，提高操作的熟練度和標(biāo)本管理能力，注重實(shí)驗(yàn)室的防治污染，做好實(shí)驗(yàn)室環(huán)境以及儀器的內(nèi)部清潔、消毒工作，以防治污染導(dǎo)致無(wú)效檢測(cè)。

綜上所述，不同血液檢測(cè)模式下核酸檢測(cè)試劑有效利用率無(wú)明顯差異，應(yīng)用NAT可降低輸血風(fēng)險(xiǎn)，尤其對(duì)HBV感染的陽(yáng)性檢出率較高。同時(shí)核酸檢測(cè)試劑的成本頗高，因此減少試劑的浪費(fèi)十分重要，需研究更好的辦法來(lái)提高試劑的利用率。