Vimentin和Suivivin在子宮內膜腺癌中的表達及其相關性研究

梁利丹，焦丹丹

子宮內膜癌(endometrium carcinoma)為女性生殖系統的三大惡性腫瘤之一，其中子宮內膜腺癌占80%～90%，嚴重威脅女性生殖健康及生命[1-2]。Suivivin屬于凋亡蛋白抑制因子家族 (inhibitor of apoptosis proteins,IAPS) 成員，即凋亡蛋白抑制因子，Ambrosini等[3]應用EPR-1 (effector cell protease receptor-1)的cDNA最先分離出來，是人類基因組編碼的IAP家族成員之一。Suivivin是一種相對分子質量為16.5 kD的蛋白質，由142個氨基酸構成。Suivivin可引起細胞的增殖失調控、永生化，進而發生癌變，參與血管生成，為腫瘤細胞的浸潤和轉移提供路徑。

Vimentin是波形蛋白，屬于Ⅲ型中間絲蛋白之一。而中間絲蛋白是細胞骨架的重要結構[4]，主要源于上皮細胞和間充質細胞，主要存在于白細胞、成纖維細胞等來源于中胚層的細胞中，與微管、微絲等構成了細胞骨架，對于調節及維持細胞功能起著重要的作用。Vimentin基因定位在染色體的10p13，DNA約為10 kb長度； 有研究顯示Vimentin參與細胞遷移、黏附，參與細胞信號轉導。Vimentin的存在有促進腫瘤細胞遷移的作用。

Vimentin和Suivivin在子宮內膜腺癌中的表達關系尚不明確，因此，本文采用免疫組化方法監測Vimentin和Suivivin在子宮內膜腺癌中的表達情況，以探討二者與子宮內膜腺癌的相關性。現報道如下。

1 材料與方法

1.1材料收集我院2009年至2012年刮宮或者手術切除標本的存檔蠟塊，其中子宮內膜不典型增生27例(對照組)、子宮內膜腺癌58例(按照FIGO2009分期)，均經病理確診。以上標本均經4%甲醛固定，石蠟包埋切片，所有病例無其他惡性腫瘤。按照FIGO(2009) 分期標準及組織學分級標準：Ⅰ期16例，Ⅱ期25例，Ⅲ期17例；G1級25例，G2級16例，G3級17例。所有子宮內膜腺癌手術前未接受過性激素替代治療或放、化療。DAB酶底物顯色劑，兔抗人Vimentin單克隆抗體(即用型)，SP免疫組化試劑盒，兔抗人Suivivin單克隆抗體(即用型)及SP免疫組化試劑盒均購自福建邁新生物工程有限公司。

1.2檢測方法采用免疫組化SP法將石蠟組織制作成4 μm, 經二甲苯梯度脫蠟，梯度乙醇脫苯至水化，進行熱修復抗原，然后免疫組化染色，嚴格按照試劑說明書。Vimentin波形蛋白主要定位于細胞質內，以胞質內出現棕黃色的顆粒為陽性判斷標準。Suivivin凋亡蛋白抑制因子主要定位于細胞質內，以細胞質內出現棕黃色顆粒為陽性判斷標準。 均以福建邁新生物公司提供的陽性切片作為染色的陽性對照。將陽性細胞的百分比和染色強度進行綜合評分，每個切片隨機選取5個高倍鏡視野(×400)進行觀察，見圖1-2。按照染色強度的深淺進行計分：0分為背景顏色一致或無染色，1分為淡黃色顆粒，2分為棕黃色顆粒，3分為黃褐色顆粒。按照陽性細胞數的百分比進行計分：0分無陽性細胞，1分為陽性細胞占1%～25%，2分為26%～50%，3分為>50%。顏色強度及陽性細胞數的分結果相加得分>2分者判為陽性，≤2分者為陰性。

1.3統計學方法Vimentin和Suivivin的免疫組化結果及與臨床病理資料間關系使用是SPSS21統計學軟件包，計數資料應用四格表χ2檢驗, 秩和檢驗分析進行統計分析Vimentin和Suivivin在子宮內膜腺癌中的表達的相關性分析。隨訪60個月，以死亡為終點事件，采用Kaplan-Meier生存分析法，并應用Log-rank檢驗，以P<0.05為顯著性檢驗標準。

2 結果

2.1Vimentin在子宮內膜癌中的表達Vimentin陽性表達于胞質，其在子宮內膜不典型增生中的陽性率為3.70%，在子宮內膜腺癌中的陽性表達率為75.86%。子宮內膜腺癌中高中低分化的陽性表達率分別為56.00%、81.25%、100.00%，3組比較差異有統計學意義(P<0.05)， Vimentin在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期子宮內膜腺癌中的表達分別為56.25%、72.00%、100.00%，3組比較差異有統計學意義(P<0.05)，與淋巴結轉移相關(P<0.05)，而與年齡無關(P>0.05)。在子宮內膜腺癌中分化越差、惡性程度越高、表達越強。

2.2Suivivin在子宮內膜腺癌中的表達Suivivin陽性表達為細胞膜/質，Suivivin在在子宮內膜腺癌中陽性表達于細胞質(陽性率25.92%)。子宮內膜腺癌中高中低分化Suivivin陽性率分別為64.00%、87.50%、100.00%，3組比較差異有統計學意義(P<0.05)，Suivivin在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期子宮內膜腺癌中的陽性率分別為50.00%、88.00%、100.00%，3組比較差異有統計學意義(P<0.05)。Suivivin的表達與組織學分級及FIGO分期相關(P<0.05)，與淋巴結轉移相關，而與年齡無關(P>0.05)，見表1。

圖1 Vimentin在不典型增生和子宮內膜腺癌組織中的表達(SP，×400)

圖2 Suivivin在不典型增生和子宮內膜腺癌組織中的表達(SP，×400)

表1 Vimenitin和Suivivin在子宮內膜腺癌中的表達及臨床生物學特性例(%)

2.3Vimentin蛋白和Suivivin蛋白在子宮內膜腺癌中表達的相關性在58例子宮內膜腺癌組織中，Vimentin和Suivivin在子宮內膜腺癌中的表達呈正相關(P>0.05)，見表2。

表2 Vimentin和Suivivin在子宮內膜腺癌中表達的相關性

2.4Vimentin和Suivivin的表達與預后分析將Vimentin和Suivivin的表達分為陽性組和陰性組，繪制了Kaplan-Meier生存曲線，Vimentin表達陽性組與陰性組相比較，差異有統計學意義(χ2=8.514，P<0.05)。Suivivin表達陽性組與陰性組相比較，差異有統計學意義(χ2=5.265，P<0.022)，見圖3-4。

圖3 子宮內膜腺癌Vimentin表達與預后Kaplan-meier分析(P=0.008)

圖4 子宮內膜腺癌Suivivin表達與預后Kaplan-meier分析(P=0.040)

3 討論

子宮內膜癌為婦科常見的惡性腫瘤之一，其中腺癌病理類型占子宮內膜腫瘤的80%～90%，在全球范圍內，子宮內膜癌在全球惡性腫瘤中排第六位[5-6]。子宮內膜腺癌發病的確切病因及病理生理機制尚不十分清楚，目前認為缺乏體力活動和肥胖是子宮內膜癌的兩個重要的高危因素[7]。然而，腫瘤的發生發展是由多種癌基因、抑癌基因等共同參與，引發細胞增殖與凋亡失衡并長期累積的結果。

Vimentin在乳腺癌、肝癌、胃癌、結直腸癌中表達上調[8-9]，并與它們的侵襲轉移有關；Suivivin包含一個凋亡蛋白抑制因子家族成員的特征性BIR結構區(baculovirus IAP repeat, BIR )，而且Suivivin的羧基末端的結構域是由一個含有豐富的疏水基團的α-螺旋結構取代鋅指結構的蛋白，且與紡錘體上的微管蛋白結合，發揮了凋亡抑制的作用[10]。另外，在BIR結構域中含有對凋亡有重要抑制作用的氨基酸的殘基，即Cys84、Trp67 和Pro33。Suivivin可通過殘基與caspase-3和caspase-7結合，并抑制其活性。Suivivin基因定位于染色體17q25，長度為14 700 bp，3個內含子、4個主要外顯子和3個隱藏外顯子(a、b、c)組成，外顯子與內含子的比例不同，組成了不同的Suivivin的異構體，在細胞凋亡過程中發揮不同的調節作用[11]。

Suivivin是介導線粒體凋亡途徑的重要的凋亡抑制因子，在凋亡的細胞中高度表達，當細胞接收到凋亡信息時，線粒體凋亡途徑激活，可誘導大量的Suivivin釋放，抑制胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶介導的線粒體凋亡途徑，抑制細胞的凋亡。Suivivin-ptEx2/3和Suivivin-2a等被發現[12-13]，并且證實其在細胞凋亡過程中發揮重要的調節作用。有研究提示Suivivin在宮頸癌、肝癌、胃癌、胰腺癌中均表達升高，提示Suivivin過表達促進腫瘤發生發展。在大部分惡性腫瘤內Suivivin的表達均上調，然而抑制Suivivin能激活細胞的線粒體凋亡途徑，從而誘導腫瘤細胞的凋亡[14]。因此，Suivivin蛋白為腫瘤治療研究的新靶點提供理論依據。

在子宮內膜腺癌中，Vimentin和Suivivin的表達均增高，這提示了它們和子宮內膜癌有相關關系，而二者在子宮內膜癌中呈正相關，說明它們在子宮內膜腺癌的發生發展過程中起到協同作用。Vimentin和Suivivin有可能作為子宮內膜腺癌發生發展和預后的臨床診斷指標，并為子宮內膜腺癌的靶向治療提供信息，而且為子宮內膜腺癌的預后和復發提供理論依據。